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针刺回阳九针穴治疗中风后遗症的疗效及对ET、EDHF及NO水平的影响

目的探讨针刺回阳九针穴治疗中风后遗症的疗效及对血清内皮素（ET）、内皮衍生超极化因子（EDHF）及一氧化氮（NO）水平的影响。方法47例。对照组给予改善脑循环、营养神经、防治感染等西医常规治疗，治疗组在对照组治疗基础上给予针刺回阳九针穴治疗，疗程均水平。结果为76.60%，差异有统计学意义（χ2=7.231，P=0.007）。两组治疗后神经功能缺损评分降低，运动功能评分升高，且治疗组优于对照组（P<0.05）。治疗后水平高于治疗前，且治疗组优于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组生存质量评分高于治疗前，且治疗组优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论针刺回阳九针穴治疗中风后遗症具有较好的临床疗效，能够改善病人的神经功能和运动功能，调节血管内皮细胞功能，提高生存质量。
四黄降糖胶囊治疗2型糖尿病的临床研究

目的:探讨四黄降糖胶囊对2型糖尿病患者胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的影响。方法:将120例2型糖尿病患者利用随机数字表法分为对照组和治疗组，各60例。治疗组予西医基础治疗结合四黄降糖胶囊治疗;对照组予西医基础治疗和安慰剂，两组均治疗6个月。比较两组患者治疗前、治疗3个月、治疗6个月后的临床疗效、中医证候评分、糖化血红蛋白、血清C-肽及胰岛素抵抗指标的变化。结果:对照组1例脱落，两组实际完成119例。治疗组患者临床疗效优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组患者治疗3个月、6个月后中医证候评分、糖化血红蛋白均低于对照组（P<0.05或P<0.01）。治疗组患者治疗6个月后血清C-肽水平、Homa-B均高于对照组，HOMA-IR低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论:四黄降糖胶囊能改善2型糖尿病患者临床症状，提高临床疗效，降低糖化血红蛋白水平，提高血清C-肽水平，促进胰岛β细胞分泌，降低胰岛素抵抗。
不同剂量右美托咪定经鼻给药对老年剖腹探查患者术后活跃型谵妄控制的临床研究

为了观察不同剂量右美托咪定经鼻雾化给药对老年剖腹探查术后活跃型谵妄患者的影响,在静脉泵注右美托咪定(0.4μg/kg/h)的基础上,分别加经鼻雾化给予负荷剂量右美托咪定0.5μg/kg,0.75μg/kg,1.0μg/kg静脉泵用药持续24h。结果提示0.75μg/kg右美托咪定用于老年患者活跃型谵妄控制的效果好,对血流动力学影响小,呼吸影响小,镇静深度合适。
99Tcm-亚甲基二膦酸盐SPECT骨显像患者的周围辐射水平及其影响因素

目的对”Tc“.亚甲基二膦酸盐(MDP)单光子发射计算机断层成像术(sPEcT)骨显像患者周围辐射水平及其影响因素进行研究，为保证周围人员辐射安全提供实验依据。方法对367例中国医学科学院肿瘤医院全身骨显像的患者进行测量，测量其不同时间及不同距离处的周围剂量当量率，分析周围剂量当量率随时间及距离的变化规律，估算周围不同距离处的剂量水平，评估周围人员的辐射剂量。结果患者周围剂量当量率随时间指数衰减，患者体内”Tc”有效半衰期随时间增加;周围剂量当量率距患者4m内随距离的变化呈幂函数，平均幂值为一1.45。从患者注射”Tc。药物至患者体内”Tc“基本消失，在距患者0.5、1.0和1.5m处的周围辐射剂量水平分别为238.3、99.7和61.8恤Sv;在注射后不同的时间点(O、3和6h)，与患者距O.5m滞留10min，辐射剂量分别为9.9、3.O和1.9斗Sv。结论骨显像息者周围剂量当量率随时间和距离快速降低。骨显像患者会对周围人员造成一定的照射，但是剂量水平远低于国家标准的规定。建议患者进行骨显像的当天尽量不要进行和医护人员长时间近距离接触的其他诊疗。
人外周血淋巴细胞增殖试验的优化及其应用

目的:优化人外周血淋巴细胞增殖试验条件;考察动物源材料的Gal抗原含量与淋巴细胞增差异。方法:从细胞接种量，阳性对照（刀豆球蛋白A，ConA）的工作浓度与细胞培养时间，优化人外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件;利用优化的试验方法，通过人外周血淋巴细胞与动物源性材料的（牛跟腱或由牛跟腱纯化的胶原蛋白海绵）匀浆液或浸提液共培养，考察材料的不同前处理方式对液与浸提液对小鼠脾脏淋巴细胞增殖效应的影响，并对比分析对动物源材料的敏感性差异。结果:人人外周血淋巴细胞增殖的影响;参考标准YY/T1561-2017，检测材料匀浆液或浸提液的Gal抗原含量，分析其抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;同时参考标准YY/T1465.1-2016，考察材料匀浆外周血淋巴细胞增殖试验最佳反应条件经优化确定为:细胞接种量为1×105，阳性对照（ConA）的终浓度选择5~10μg·mL-1，培养时间为4d。人外周血淋巴细胞与胶原蛋白海绵（匀浆组与浸提液组）共培养后，样品组与正常细胞对照组相比不存在明显差异;与牛跟腱匀浆液共培养后，与正常细胞对照组相比不存在显著性差异。胶原蛋白海绵（匀浆组与浸提液组）对小鼠脾脏淋巴细胞均无明显增优势。淋巴细胞增殖试验是评价动物源生物材料细胞免疫的可用方法之一。殖效应。牛跟腱匀浆液在5倍稀释与50倍稀释后，对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应（增殖率为143.20%和128.71%）。牛跟腱匀浆液的Gal抗原含量为（3.98±1.06）×1013个·mg-1、胶原蛋白海绵匀浆液为（2.24±0.60）×1013个·mg-1、胶原蛋白海绵浸提液为（1.89±0.64）×1013个·mg-1。结论:淋巴细胞增殖效应与动物源性生物材料中残留Gal抗原含量的正向相关性不强。与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验相比，采用人外周血淋巴细胞增殖试验评价含Gal抗原的动物源性生物材料细胞免疫的敏感性未见关键词:淋巴细胞增殖试验;人外周血淋巴细胞;小鼠脾脏淋巴细胞;牛跟腱;胶原蛋白海绵;Gal抗原中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254-1793（2019）08-1350-08doi:10.16155/j.0254-1793.2019.08.03Optimizationandapplicationofhumanperipheralbloodlymphocyteproliferationtest*SHAOAn-liang1，MUYu-feng1，2，QUShu-xin1，2**，CHENLiang1**，XULi-ming1，2**（1.NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing102629，China;2.SchoolofMaterialsScienceandEngineering，SouthwestJiaotongUniversity，Chengdu611756，China）AbstractObjective:Tooptimizetheexperimentalconditionsofhumanperipheralbloodlymphocyteproliferation*国家重点研发计划（2016YFC1103200，2016YFC1103203）**通信作者徐丽明Tel:（010）53852556;E-mail:xuliming@nifdc.org.cn陈亮Tel:（010）53852583;E-mail:chenliang@nifdc.org.cn屈树新Tel:（028）87601897;E-mail:qushuxin@swjtu.edu.com第一作者Tel:（010）53852558;E-mail:shaoanliang@nifdc.org.cnJournalofPharmaceuticalAnalysiswww.ywfxzz.cn药物分析杂志Chinese·1355·test，andinvestigatethecorrelationbetweenGalantigencontentofanimaltissue-derivedbiomaterialsandtheproliferationeffectofhumanperipheralbloodlymphocytes，andtocomparethedifferenceinthesensitivityofproliferationeffectbetweenhumanperipheralbloodlymphocytesandmousespleenlymphocytesforanimaltissue-derivedbiomaterials.Methods:Theoptimizedexperimentalconditionsofhumanperipheralbloodlymphocyteproliferationtest，includescellseedingquantity，workingconcentrationofpositivecontrol（ConcanavalinA，ConA）andcellcultureperiodwereinvestigated.Therefinedhumanperipheralbloodlymphocyteproliferationtestwasappliedtoinvestigatethecellularimmunityofanimaltissuederivedbiomaterialsbyco-cultureofhumanperipheralbloodlymphocyteswithhomogenateorextractionofanimalderivedmaterials（bovineachillestendonorcollagenspongemadefrombovineachillestendon）.TheGalantigencontentcontainedinthehomogenateorextractionofmaterialswasdeterminedinaccordingtothestandardYY/T1561-2017.Theeffectsofhomogenateandextractionontheproliferationofmousespleenlymphocyteswereinvestigatedandthesensitivityforanimal-derivedmaterialswascomparedwithhumanperipheralbloodlymphocyteproliferationtestinaccordingtothestandardYY/T1465.1-2016.Results:Theoptimizedexperimentalconditionsfortheproliferationtestofhumanperipheralbloodlymphocyteswereasfollows:thecellseedingquantitywas1×105cellsperwell，thefinalconcentrationofthepositivecontrol（ConA）was5-10µg·mL-1，andtheculturetimewas4days.Afteraco-cultureofhumanperipheralbloodlymphocyteswithcollagensponge（includinghomogenategroupandextractiongroup），therewasnosignificantproliferationeffectinthetestgroupcomparedwiththecontrolgroup;andafteraco-culturewithbovineachillestendonhomogenate，nosignificantdifferencewascomparedtothecontrolgroup.Bothhomogenateandextractionofcollagenspongehadnoobviousproliferationeffectonmousespleenlymphocytes.Aandthesignificantproliferationeffectsonmousespleenlymphocyteswereobservedinbovineachillestendonhomogenategroup（143.20%and128.71%）.TheGalantigencontentofbovineachillestendonhomogenatewas（3.98±1.06）×1013number·mg-1，collagenspongehomogenatewas（2.24±0.60）×1013number·mg-1andextractwas（1.89±0.64）×1013number·mg-1.Conclusion:TherewasnostrongpositivecorrelationbetweenthelymphocytesproliferationandthecontentofresidualGalantigenscontainedinbiomaterials.Comparedwithmousespleenlymphocytes，thesensitivityofusinghumanperipheralbloodlymphocytestoevaluatecellularimmunityofGalantigencontainedanimal-derivedbiomaterialsdidnotshowmorebenefit.Lymphocyteproliferationtestwasoneoftheavailablemethodsforevaluatingcellularimmunityofanimal-derivedbiomaterials.Keywords:lymphocytesproliferationtest;humanperipheralbloodlymphocyte;mousespleenlymphocyte;bovinetendon;collagensponge;Galantigen淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程的一个重要阶段，检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。抗原刺激子或白介素将激活并刺激淋巴细胞分化，从而使增淋巴细胞产生各种细胞因子或白介素，这些细胞因殖反应放大。T细胞受特异性抗原或非特异性有丝分裂原（如刀豆球蛋白A，ConA）刺激后，细胞代谢和形态发生变化，主要表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，发生一系列增殖反应，并转化为淋巴母细胞，进而影响机体内的免疫应答（包括刺激效应与抑制效应）。α-半乳糖基抗原（Gal抗原）是动物组织、器官引起超急性免疫排斥反应中的主要靶抗原[1-2]，广泛存在于牛、猪和其他低等动物体内。人体由于有2个碱基错位变异而不表达Gal抗原[3]，但人血清中存在高滴度的抗-Gal抗体（占总血清球蛋白的1%~3%）[4-6]，因此当人体接受含有Gal抗原的组织、器官，或残留有Gal抗原的脱细胞生物材料时，Gal抗原就会与人体中的抗-GalIgG等结合激活补体，引起补体介导的抗体依赖型细胞毒JournalofPharmaceuticalAnalysiswww.ywfxzz.cn药物分析杂志Chinese药物分析杂志ChinJPharmAnal2019,39(8)·1356·药物分析杂志ChinJPharmAnal2019,39(8)性效应，最终导致植入失败[7]。目前，关于动物源性生物材料中残留Gal抗原是否与淋巴细胞增殖效应存在一定的相关性，参与了细胞免疫仍未见报道。本研究首先对人外周血淋巴细胞增殖试验条件进行优化，然后采用优化后的试验条件对动物源性生物材料（胶原蛋白海绵及其原材料牛跟腱）与巴细胞增殖能力的差异，从而阐明动物源性生物材淋巴细胞进行共培养，考察2种材料对人外周血淋料中残留Gal抗原是否与淋巴细胞增殖效应存在一定的相关性。由于人体不含Gal抗原，而小鼠体内含有Gal抗原，为考察人外周血淋巴细胞是否对含Gal抗原动物源性生物材料的细胞免疫特异性和蛋白海绵或牛跟腱共培养，考察2种材料对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响，从而综合比较2种材料对不同种属来源淋巴细胞的增殖效应敏感性的差异。1材料1.1试验样品敏感性更好，本研究采用小鼠脾脏淋巴细胞与胶原牛跟腱[规格:0.5×1×1.36（cm）]、胶原蛋白海绵[规格:5×2.5×0.5（cm）]均常温保存，由合作单位提供，其中胶原蛋白海绵由牛跟腱制备而来。1.2试剂与耗材1640培养液（Gibco公司，批号8118134），胎牛血清（Gibco公司，批号10091-148），青链霉素双抗（北京索莱宝科技有限公司，批号20171206），刀豆球蛋白A（北京欣经科生物技术有限公司，批号11028-71-0），人外周血淋巴细胞分离液（天津市灏洋生物制品科技有限责任公司，批号20170705-1549），CCK-8试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，批号503Q011），96孔细胞培养板（Costar，批号32716601），Gal抗原定量检测试剂盒（北京三药科技开发公司，批号20180308），BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天生物技术，批号070618180905）。1.3主要设备SpectramaxM5酶标仪（MD公司），3K-15离心机（Sigma公司），BB150二氧化碳培养箱（Thermo公司），CKX41倒置显微镜（Olympus公司），HZQ-X100恒温摇床（太仓豪诚公司），JXFSTPRP-CL冷冻研磨仪（上海净信公司）。2方法2.1标准曲线的建立采集健康人肘静脉血50mL，分别加入装有等体积（每管5mL）的人外周血淋巴细胞分离液的离心管中，1200r·min-1离心15min。离心结束后，小心吸取中间云雾层细胞到新离心管中，然后1200r·min-1离心5min，去上清，加入完全细胞培养液，吹打混匀，将细胞悬液从原液倍比稀释9个梯度。将100µL不同浓度的淋巴细胞接种于96孔细胞培养板，设置1排孔作为无细胞加样对照。每孔添加100µL细胞培养液与20µLCCK8。在37℃、5%CO2条件下反应5h，在450nm处读取吸收度。2.2试验条件优化2.2.1阳性对照制备选择刀ConA作为本实验的阳性对照。采用完全细胞培养液（含10%胎牛血清，1%双抗）为介质，稀释500µg·mL-1ConA母液得到20、10、5µg·mL-1的ConA工作液。2.2.2人外周血淋巴细胞接种和检测参照“2.1”项下方法，配制浓度为4×106、2×106、1×106个·mL-1的细胞悬液。将100µL不同浓度的淋巴细胞接种于96孔细胞培养板，设置1排孔作为无细胞加样对照。每孔添加100µL细胞培养液。在37℃、5%CO2条件下分别培养3d与4d。培养结束后，每孔加入20µLCCK8，在37℃、5%CO2条件下反应5h，在450nm处读取吸收度。2.3考察样品的淋巴细胞增殖效应2.3.1样品制备匀浆液:取胶原蛋白海绵（或牛跟腱）12cm2，在超净工作台中剪成约1mm2大小，转移到无菌EP管，加入灭菌钢珠和1mL无血清细胞培养液。在冷冻研磨仪中匀浆，然后5000r·min-1离心8min，取上清，用无血清细胞培养液定容到2mL。浸提液:按照6cm2·mL-1的浸提比例，将胶原蛋白海绵浸泡到无血清细胞培养液中，37℃浸提72h。淋巴细胞:参照“2.1”项下方法制备人外周血淋巴细胞悬液，配制最佳细胞接种密度，每孔接种体积为100µL。2.3.2试验样品与细胞共培养及细胞增殖率检测根据预试验结果，高蛋白浓度的样品匀浆液原液对试验体系产生显著的干扰，造成原因不明的淋巴细胞增殖抑制作用，因此，本实验选择用无血JournalofPharmaceuticalAnalysiswww.ywfxzz.cn药物分析杂志Chinese浆组（胶原蛋白海绵或牛跟腱）:在匀浆液中添加清细胞培养液5倍稀释作为匀浆液的高剂量组。在96孔板中添加不同组别试验样品，1）高剂量匀10%FBS与1%双抗，稀释5倍后制备供试液，每孔添加100µL;2）低剂量匀浆组（胶原蛋白海绵或牛跟腱）:在匀浆液中添加10%FBS与1%双抗，稀释50倍后制备供试液，每孔添加100µL;3）胶原蛋白海绵浸提液组:在浸提液中添加10%FBS与1%双抗，每孔添加浸提液原液100µL;4）胶原蛋白海绵浸提液稀释组:在浸提液中添加10%FBS与1%双抗，稀释5倍制备供试液，每孔添加100µL;5）细胞对照组:每孔添加100µL完全细胞培养液;6）阳性对照组:每孔加入100µL的10µg·mL-1ConA。将96孔细胞培养板在37℃、5%CO2条件下培养4d。细胞增殖率检测:每孔加入20µLCCK8，在37℃、5%CO2条件下反应5h，在450nm处读取吸收度。2.4小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验巴细胞增殖试验。参考标准YY/T1465.1-2016，对“2.3.1”与“2.3.2”中制备的匀浆液与浸提液进行BALB/c小鼠脾脏淋2.5Gal抗原含量检测参照Gal抗原定量检测试剂盒说明书，对“2.3.1”与“2.3.2”项中制备的匀浆液与浸提液进行Gal抗原含量检测。2.6统计学分析采用SPSS20.0中单因素方差分析比较各试验组的淋巴细胞增殖水平、Gal抗原含量及蛋白质含量差异;当P<0.05时，判定为有统计学差异。3结果3.1标准曲线如图1所示，每孔细胞接种量在2.6×105~3.375×105时，吸收度（A）处于0.05~2.0，R2可达到0.997，线性较好。3.2试验条件优化结果由表1可见，细胞培养3d时，当每孔细胞接种数为4×105时，细胞对照组A值过高;阳性对照组（ConA）的细胞培养所需营养不够，未出现明显增殖。当每孔细胞接种数为2×105时，阳性对照组（ConA）的细胞培养所需营养不够，未出现·1357·图1细胞接种数与A值的拟合标准曲线图Fig.1ThestandardfittingcurveofcellseedingnumberandAvalue关系。所需营养明显不够，未出现增殖。当每孔细胞接种明显增殖。当每孔细胞接种数为1×105时，阳性对照组（ConA）的淋巴细胞增殖呈现剂量-效应细胞培养4d的结果见表2。当每孔细胞接种数为4×105时，阳性对照组（ConA）的细胞培养数为2×105时，阳性对照组（ConA）的细胞出现明显增殖，其中2.5µg·mL-1ConA组的增殖率最高。当每孔细胞接种数为1×105时，阳性对照组（ConA）的淋巴细胞增殖呈现剂量-效应关系。当每孔细胞接种数为1×105时，与培养3d相比，培养4d后的ConA组增殖效应更明显。因此，本试验优化后的条件:每孔细胞接种数为1×105，ConA的质量浓度可为5~10µg·mL-1，细胞培养时间为4d。3.3样品淋巴细胞增殖效应的检测结果胶原蛋白海绵匀浆组的淋巴细胞增殖率分别为样品淋巴细胞增殖效应的检测结果见表3、表4，阳性对照组（ConA）的细胞增殖率为369.7%或441.96%，与细胞对照组相比，呈现明显增殖效应，表明试验体系成立。如表3所示，高、低剂量93.94%与96.97%，其OD值与正常细胞对照组相比均无显著性差异（P>0.05）;胶原蛋白海绵浸提液组与浸提液5倍稀释组的淋巴细胞增殖率分别为90.32%与93.55%，其A值与正常细胞对照组相比均无显著性差异（P>0.05）。牛跟腱匀浆液5倍稀释组淋巴细胞增殖率为75.48%，其A值与正常细胞对照组相比存在显著性差异（P<0.05）;牛跟腱匀浆液50倍稀释组淋巴细胞增殖率为90.49%，其A值与正常细胞对照组相比不存在显著性差异（P>0.05）。JournalofPharmaceuticalAnalysiswww.ywfxzz.cn药物分析杂志Chinese药物分析杂志ChinJPharmAnal2019,39(8)·1358·药物分析杂志ChinJPharmAnal2019,39(8)表1不同细胞接种量与ConA浓度时人外周血淋巴细胞增殖结果（培养3d，n=3）Tab.1TheresultsofhumanperipheralbloodlymphocytesproliferationunderdifferentcellseedingnumbersandConAconcentration（after3dculture）组别（group）终浓度（finalconcentration）/（µg·mL-1）空白对照（blank）细胞对照（cellcontrol）ConA//1052.54×105细胞数（cellnumber）2×1051×105A0.198±0.0032.408±0.1151.641±0.0731.908±0.1932.663±0.293增殖率（proliferationrate）/%//6879110A0.199±0.0031.464±0.0171.781±0.0391.411±0.1561.269±0.166增殖率（proliferationrate）/%//1219686A0.199±0.0031.055±0.0411.426±0.0971.181±0.1141.056±0.054增殖率（proliferationrate）/%//135111100表2不同细胞接种数与ConA浓度时人外周血淋巴细胞增殖结果（培养4d，n=3）Tab.2TheresultsofhumanperipheralbloodlymphocytesproliferationunderdifferentcellseedingnumbersandConAconcentration（after4dculture）组别（group）终浓度（finalconcentration）/（µg·mL-1）A4×105细胞数（cellnumber）2×1051×105增殖率（proliferationrate）/%A增殖率（proliferationrate）/%A0.187±0.0080.949±0.1421.805±0.1331.618±0.1491.348±0.053增殖率（proliferationrate）/%//190170142空白对照（blank）细胞对照（cellcontrol）ConA0.187±0.0081.70±0.140.917±0.1811.099±0.0361.787±0.057//1052.5表3胶原蛋白海绵匀浆液或浸提液添加后人外周血淋巴细胞增殖率Tab.3Humanperipheralbloodlymphocyteproliferationrateunder0.187±0.0081.080±0.0871.520±0.2931.596±0.0411.641±0.032//5465105//140147152homogenateorextractionofcollagenspongeadministration组别（group）A增殖率（proliferationrate）/%/细胞对照（cellcontrol）*阳性对照（positivecontrol）匀浆液5倍稀释（5timesdilutionofhomogenate）匀浆液50倍稀释（50timesdilutionofhomogenate）细胞对照（cellcontrol）#浸提液（extraction）浸提液5倍稀释（5timesdilutionofextraction）注（note）:*表示细胞培养液为新鲜完全细胞培养液（indicatesthatcellculturemediumisfreshandcompleteculturemedium）;#表示细胞培养液为放置在相同浸提条件下的无血清细胞培养液，然后添加10%FBS与1%双抗制备而成（indicatesthatthecellculturemediumwasserum-freeandplacedunderthesameextractioncondition，thenaddedwith10%FBSand1%antibiotics）0.33±0.031.22±0.080.31±0.020.32±0.020.31±0.020.28±0.030.29±0.01369.7093.9496.97/90.3293.55P/0.000.250.45/0.190.26JournalofPharmaceuticalAnalysiswww.ywfxzz.cn药物分析杂志Chinese表4牛跟腱匀浆液添加后人外周血淋巴细胞增殖率Tab.4Humanperipheralbloodlymphocyteproliferationrateunderhomogenateofbovinetendonadministration组别（group）A细胞对照（cellcontrol）0.30±0.02阳性对照（positivecontrol）1.32±0.02匀浆液5倍稀释（5times0.23±0.02dilutionofhomogenate）匀浆液50倍稀释（50timesdilutionofhomogenate）0.27±0.05增殖率（proliferationrate）/%/441.9675.4890.49P/0.000.000.053.4小鼠脾脏淋巴细胞增殖检测结果胞无明显增殖效应。小鼠脾脏淋巴细胞均无明显增殖效应。而牛跟腱匀如表5所示，胶原蛋白海绵的匀浆液与浸提液对浆液5倍稀释组与50倍稀释组对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应;100倍稀释组对小鼠脾脏淋巴细3.5Gal抗原含量检测结果胶原蛋白海绵匀浆液与浸提液，其中牛跟腱匀浆液与如图2所示，牛跟腱匀浆液的Gal抗原含量高于胶原蛋白海绵浸提液的Gal抗原含量存在显著性差异（P=0.04）;胶原蛋白海绵浸提液与胶原蛋白海绵匀浆液的Gal抗原含量不存在显著性差异。4小结和讨论在研究早期，大多采用MTT法研究药物对淋巴细胞增殖试验的影响[8-10]。MTT法的检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在570nm波长处测定其吸收度A值，可间接反映活细胞数为水不溶性的蓝紫色结晶（甲臜）并沉积在细胞中，量。当采用悬浮生长的淋巴细胞来考察受试物的增殖效应时，由于加入二甲基亚砜之前吸出上清液时可能带走部分细胞，导致出现试验误差较大，重复性差等问题。CCK-8法的原理与MTT法相同，但四唑盐（WST-8）还原后可生成高度可溶性的黄色结晶，可操作简单，误差小。目前，CCK-8法在医药领域已经得到广泛的应用[11-13]。直接进行比色，生成的结晶量与活细胞数量呈正比，·1359·表5不同试验样品处理后小鼠脾脏淋巴细胞增殖率（%）Tab.5Mousespleenlymphocyteproliferationrateunderdifferenttestsampleadminstration增殖率118.64143.20128.71AP/0.000.300.110.000.76±0.08rate）/%/425.42113.560.84±0.110.70±0.11（proliferation0.59±0.102.51±0.100.67±0.15组别（group）细胞对照（cellcontrol）*阳性对照（positivecontrol）胶原蛋白海绵匀浆液5倍稀释（5timesdilutionofcollagenspongehomogenate）胶原蛋白海绵匀浆液50倍稀释（50timesdilutionofcollagenspongehomogenate）牛跟腱匀浆液5倍稀释（5timesdilutionofbovinetendonhomogenate）牛跟腱匀浆液50倍稀释（50timesdilutionofbovinetendonhomogenate）牛跟腱匀浆液100倍稀释（100timesdilutionofbovinetendonhomogenate）细胞对照（cellcontrol）#（collagenspongeextraction）胶原蛋白海绵浸提液5倍稀释（5timesdilutionofcollagenspongeextraction）注（note）:*表示细胞培养液为新鲜完全细胞培养液（indicatesthatcellculturemediumisfreshandcompleteculturemedium）;#表示细胞培养液为放置在相同浸提条件下的无血清细胞培养液，然后添加10%FBS与1%双抗制备而成（indicatesthatthecellculturemediumwasserum-freeandplacedunderthesameextractioncondition，thenaddedwith10%FBSand1%antibiotics）0.95±0.210.92±0.041.08±0.13/96.84113.68/0.750.230.010.36胶原蛋白海绵浸提液0.64±008108.51BTH.牛跟腱匀浆液（bovinetendonhomogenate）CSH.胶原蛋白海绵匀浆液（collagenspongehomogenate）CSE.胶原蛋白海绵浸提液（collagenspongeextraction）图2Gal抗原含量检测结果Fig.2ResultsofGalantigencontentdeterminationJournalofPharmaceuticalAnalysiswww.ywfxzz.cn药物分析杂志Chinese药物分析杂志ChinJPharmAnal2019,39(8)·1360·药物分析杂志ChinJPharmAnal2019,39(8)于人源外周血淋巴细胞的淋巴细胞增殖试验条件。本研究利用CCK-8细胞活性检测法，优化了基由于所有低等动物体内均表达Gal抗原，而人体内不表达Gal抗原，为考察人源细胞试验体系是否比动物来源的细胞试验体系对含有Gal抗原的动物原材料具有更高的敏感性，本研究进行了人源外周血淋巴细胞和小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验的对比研究。在优化的人源外周血淋巴细胞增殖试验体系中，牛跟腱组织及其由牛跟腱提取的胶原蛋白制备而成的胶原蛋白海绵均显示没有显著影响。虽然牛跟腱匀浆液5倍稀释组的淋巴细胞增殖率为75.48%，分析其原因可能与匀浆液中蛋白浓度过高而导致干扰了试验体系，具体原因还需要进一步验证。在小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验中，胶原蛋白海绵的匀浆液与浸提液对小鼠脾脏淋巴细胞均无明显影响。而牛跟腱匀浆液5倍稀释组与50倍稀释组对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应。这些结果提示，人源外周血淋巴细胞增殖试验在评价牛跟腱类动物源材料时，与小敏性。响，采用不同样品前处理方式，即:胶原蛋白海绵的周血淋巴细胞或者小鼠脾脏淋巴细胞的增殖均没有应似乎不存在正向相关性。这一现象可以解释为:鼠脾脏淋巴细胞增殖试验相比没有显示出更高的灵为进一步考察Gal抗原对淋巴细胞增殖的影匀浆液（使其残留的Gal抗原充分暴露）和浸提液对比，匀浆液Gal抗原含量高于浸提液，但是对人外显著影响。因此，Gal抗原含量与淋巴细胞增殖效人体内存在高滴度的抗-Gal抗体[4-6]，与动物源性生物材料残留Gal抗原引起的免疫反应以体液免疫化后的Gal抗原作为研究对象来考察对淋巴细胞增殖的剂量-效应关系。可是，目前市售的人工合成的Gal抗原（Gal-BSA）中含有BSA成分，并不是合适的研究对象（BSA本身也具有免疫原性）。另外，源性生物材料中是否也出现此类现象正在进一步研采用BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞评价材料（胶原为主，与细胞免疫应答相关性不强。理论上，可将纯本课题组针对牛心包、猪心包与猪角膜等典型动物蛋白海绵及其原材料牛跟腱）的淋巴细胞增殖效应的结果显示，胶原蛋白海绵的匀浆液对小鼠脾脏淋巴究中。细胞无明显增殖效应，而牛跟腱匀浆液5倍稀释组与50倍稀释组，对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应，且具有剂量-效应关系，这一结果提示，在样品匀浆处理条件下，胶原蛋白海绵的免疫原性与其原材料牛跟腱组织相比显著降低。体外淋巴细胞增殖试验是评价动物源性生物材料引起细胞免疫风险的可用手段之一。由于该试验受多种试验条件的影响，建议每个实验室应建立优化的试验条件，关注不同种属淋巴细胞来源的差异和样品前处理方式的不同对结果的影响。虽然本研究中采用人外周血淋巴细胞评价牛跟腱动物源性生物材料增殖效应的敏感性未见优势;与采用小鼠脾脏作为淋巴细胞来源相比，采用人外周血作为淋巴细胞来源显得实验成本更高，细胞来源不方便及试验操作难度更高;但理论上选择人外周血淋巴细胞能客观反映医疗器械的临床实际应用风险，可反映动物源性生物材料中异种抗原（非Gal抗原类）引起的细胞免疫反应。[4][3]参考文献[1]GALILIU，SHOHETSB，KOBRINE，etal.Man，apes，andoldworldmonkeysdifferfromothermammalsintheexpressionofalpha-galactosylepitopesonnucleatedcells[J].JBiolChem，1988，263（33）:17755[2]KOIKEC，KANNAGIR，TAKUMAY，etal.Introductionofα（1，2）-fucosyltransferaseanditseffectonGalepitopesintransgenicpig[J].Xenotransplantation，2008，3（1）:81GALILIU，SWANSONK.Genesequencessuggestinactivationofalpha-1，3-galactosyltransferaseincatarrhinesafterthedivergenceofapesfrommonkeys[J].ProcNatlAcadSciUSA，1991，88（16）:7401GALILIU，MACHERBA，BUEHLERJ，etal.Humannaturalantialpha-galactosylIgG.II.Thespecificrecognitionofα（1，3）-linkedgalactoseresidues[J].ExpMed，1985，162（2）:573GOODAH，COOPERDK，MALCOLMAJ，etal.Identificationofcarbohydratestructuresthatbindhumanantiporcineantibodies:implicationsfordiscordantxenograftinginhumans[J].TransplantProc，1992，24（2）:559[6]ORILORY，KORENE，COOPERDK.Carbohydrateantigensofpigtissuesreactingwithhumannaturalantibodiesaspotentialtargetsforhyperacutevascularrejectioninpig-to-manorganxenotransplantation[J].Transplantation，1993，56（6）:1433SCHAPHERDERAFM，DAHAMR，TEBULTEMT，etal.Antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicityagainstporcineendotheliuminducedbyamajorityofhumansera[J].Transplantation，1994，57（9）:1376[8]林忠宁，董胜璋，董书芸，等.MTT法检测T淋巴细胞增殖功能的方法学探讨与应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波罗蜜根中异戊烯基酚性成分研究

目的:研究波罗蜜Anoco伊船^甜erop矗川瑚Lam.根中的酚性成分。方法:运用ODS、MCICHP.20P、Sepha-dexLH.20等柱色谱和高效液相色谱技术从波罗蜜根中分离化合物。并根据理化性质和NMR、Ms波谱数据鉴定化合物结构。结果:从波罗蜜根的乙醇提取物中分离得到了10个含异戊烯基取代的酚性化合物，分别鉴定为:cud-rastilbene(1)、artocarbene(2)、3`，5`，2，4一tetrahydroxy-4一(3一methyl-2·butenyl)stilbene(3)、demethylmoracinI(4)、momcinc(5)、artoindonesianinB一1(6)、wittifuranw(7)、57-hydroxycud础avoneA(8)、artochaminB(9)、8一(y，y-dime-thylallyl)一5，2`，4`一trihydroxy.7一methoxy{1avone(10)。结论:其中，化合物1、4、5、7为首次从波罗蜜属植物中分离得到，化合物6、8、9为首次从该植物中分离得到。
核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在脓毒症急性肾损伤大鼠肾脏组织的表达及其影响

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（NLRP3）炎性小体在脓毒症急性肾损伤（AKI）大鼠中的作用及其机制。方法采用随机数字表法将18只雄性Wistar大鼠分为脂多糖（LPS）组、LPS+抑制剂组及阴性对照组3组，每组6只。LPS组大鼠给予腹腔内注射LPS（3.5mg/kg），LPS+抑制剂组大鼠腹腔内注射LPS（3.5mg/kg）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase鄄1）抑制剂Belnacasan（VX鄄765，100mg/kg），而阴性对照组大鼠则给予腹腔内注射0.3mL等渗NaCl溶液。比较3组大鼠建模前及建模后24h血清肌酐水平变化，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测3组大鼠建模24h后血清白细胞介素1茁（IL鄄1茁）、IL鄄18及肿瘤坏死因子琢（TNF鄄琢）表达水平，采用Western鄄blotting检测3组大鼠建模24h后NLRP3及Caspase鄄1蛋白表达水平。结果3组大鼠建模前后血清肌酐水平比较，差异有统计学意义（F=146.910，P约0.001）。进一步两两比较发现，建模后，LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠血清肌酐水平均较LPS组显著降低[（1.57依0.20）、（0.54依0.39）、（2.31依0.24）mg/L]，且阴性对照组大鼠血清肌酐水平较LPS+抑制剂组更低（P均<0.05）;而LPS组[（2.31依0.24）mg/Lvs.（0.53依0.16）mg/L]及LPS+抑制剂组[（1.57依0.20）mg/Lvs.（0.56依0.08）mg/L]大鼠建模后血清肌酐水平均较建模前显著升高（P均<0.05）。LPS组、LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL鄄1茁[（9.33依1.16）、（1.93依0.30）、（1.88依0.30）ng/L]、IL鄄18[（23.8依2.8）、（19.6依1.5）（16.6依1.2）ng/L]、TNF鄄琢[（42.3依2.1）、（23.9依2.5）、（23.5依1.3）ng/L]及NLRP3蛋白[（2.04依0.25）、（2.04依0.27）、（1.49依0.28）]和Caspase鄄1蛋白[（0.62依0.07）、（0.51依0.09）、（0.50依0.09）]表达水平比较，差异均有统计学意义（F=217.015、20.590、168.766、8.723、3.905，P均<0.05）。进一步两两比较发现，LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢表达水平均较LPS组大鼠显著降低，且阴性对照组大鼠IL鄄18表达水平较LPS+抑制剂组更低（P均<0.05）。阴性对照组大鼠NLRP3蛋白表达水平均较LPS组及LPS+抑制剂组显著降低，LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠Caspase鄄1蛋白表达水平均较LPS组显著降低（P均<0.05）。结论大鼠发生脓毒症时，通过激活炎性小体NLRP3，进而通过Caspase鄄1通路造成急性肾损伤。[关键词]脓毒症;核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3;急性肾损伤鄄likereceptorprotein3inflammasomeZhangJiannan,LiuWen,ChangDepartmentofCriticalCareMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofToinvestigatetheroleandmechanismofnucleotide(NLRP3)inflammasomeinsepticratswithacutebindingEffectofnucleotidebindingoligomerizationdomainonkidneytissuesinsepticratswithacutekidneyinjuryGuangping,CaoYanhui.HarbinMedicalUniversity,150001Harbin,ChinaCorrespondingauthor:CaoYanhui,Email:icucaoyanhui@126.com[Abstract]Objectiveoligomerizationdomain鄄likereceptorprotein3鄄6880.2020.01.011DOI:10.3877/cma.j.issn.1674基金项目:黑龙江省卫生计生委科研课题（2017鄄041）作者单位:150001哈尔滨，哈尔滨医科大学附属第一医院重症医学科通信作者:曹延会，Email:icucaoyanhui@126.com56··鄄1(Caspase鄄1)inhibitorBernacasan(3.5mg/kg),and(VX鄄765,100mg/kg),TheexpressionlevelsofseruminterleukinInthemeantime,theexpressionlevelsof鄄blottingaftermodelingfor24h.(AKI).MethodsAtotalof18maleWistarratswererandomlydividedintoa鄄1beta(IL鄄1茁),IL鄄18,and鄄linkedResults中华危重症医学杂志（电子版）2020年2月第13卷第1期ChinJCritCareMed(ElectronicEdition),February2020,Vol.13,No.1kidneyinjurylipopolysaccharide(LPS)group,aLPS+inhibitorgroup,andanegativecontrolgroup,6ineachgroup.RatsintheLPSgroupweregivenanintraperitonealinjectionofLPSratsintheLPS+inhibitorgroupweregivenanintraperitonealinjectionofLPS(3.5mg/kg)andcysteinylaspartatespecificproteinasewhileratsinthenegativecontrolgroupweregivenanintraperitonealinjectionofisotonicNaClSerumcreatininelevelsofratsinthe3groupswerecomparedbeforeandsolution(0.3mL).aftermodelingfor24h.tumornecrosisfactor鄄alpha(TNF鄄琢)ofratsinthe3groupsweremeasuredbyenzymeimmunosorbentassay(ELISA)aftermodelingfor24h.鄄1proteinsweredetectedbyWesternNLRP3andCaspaseTheserumcreatininelevelsofratsinthe3groupswerestatisticallysignificantlydifferentbeforeandaftermodeling(F=146.910,P<0.001).modeling,theserumcreatininelevelsintheLPS+inhibitorgroupandnegativecontrolgroupwerebothsignificantlylowerthanthoseintheLPSgroup[(1.570.24)mg/L],andtheserumcreatininelevelinthenegativecontrolgroup(1.57依0.20)mg/L]waslowerthanthatintheLPS+inhibitorgroup,whereastheserumcreatininelevelsintheLPSgroup[(1.57依0.20)mg/Lvs.thosebeforemodeling(all0.30),(1.88依0.30)ng/L],IL鄄18[(23.8依2.8),(19.6依1.5),(16.6依1.2)ng/L],TNF(23.9依2.5),(2.04依0.27),Caspase鄄1proteins[(0.62amongtheLPSgroup,LPS+inhibitorgroupandnegativecontrolgroupFurthercomparisonsshowedthattheserumlevelsofIL168.766,8.723,3.905;allP<0.05).1茁,IL鄄18,andTNF鄄琢intheLPS+inhibitorgroupandnegativecontrolgroupweresignificantly鄄18levelinthenegativecontrolwaslowerthanlowerthanthoseintheLPSgroup,andtheILthatintheLPS+inhibitorgroupThelevelsofNLRP3proteininthenegativecontrolgroupweresignificantlylowerthanthosebothintheLPSgroupandtheLPS+inhibitorgroup(bothinhibitorgroupandnegativecontrolgroupwerebothsignificantlylowerthanthoseintheLPSgroup(bothP<0.05).ConclusionInsepticrats,theNLRP3inflammasomeisactivatedandthenacutekidneydamageoccursthroughtheCaspaseAcutekidneyinjury鄄1茁[(9.33依1.16),(1.93依鄄琢[(42.3依2.1),(1.49依0.28)],and依0.07),(0.51依0.09),(0.50依0.09)]werestatisticallysignificantlydifferent(F=217.015,20.590,[(2.31依0.24)mg/Lvs.(0.56依0.08)mg/L]aftermodelingwerebothsignificantlyhigherthanP<0.05).TheexpressionlevelsofserumIL(0.53依0.16)mg/L]andLPS+inhibitorgroup[Keywords]Sepsis;Nucleotidebindingoligomerizationdomain依0.20),(0.54依0.39),(2.31依[(0.54依0.39)mg/Lvs.P<0.05).Inaddition,theexpressionlevelsofCaspase鄄1proteinintheLPS+鄄1pathway.鄄likereceptorprotein3;(23.5依1.3)ng/L],NLRP3proteins[(2.04依0.25),Furtherpairwisecomparisonsshowedthatafter鄄(allP<0.05).脓毒症是由感染引起宿主反应失调而导致危及复合物---炎性小体作为固有的免疫系统感受器，生命的器官功能障碍，严重时进展为严重脓毒症及能够识别各种危险信号，从而启动下游信号途径，促脓毒性休克。其中肾脏为最常受累的器官，常导致急性肾损伤（acutekidneyinjury，AKI），是ICU患者死亡的重要原因之一。研究表明，ICU中AKI的发病率为30%~50%，其中半数以上均由脓毒症引起，而由脓毒症引发的AKI病死率高达50%[1]。因此，脓毒症成为近年来ICU领域研究的热点和难点，但其发病机制尚有待研究。有学者指出，AKI是对感染性激活物产生的免疫应答[2]。核苷酸结合寡聚化结构域样受体（nucleotidebindingoligomerizationdomain鄄likereceptor，NLR）及其形成的多蛋白水解进细胞活化、细胞因子释放，激活多种炎症因子，造成肾脏损伤[3]。研究发现，NLR蛋白3（NLRprotein3，NLRP3）是参与肾脏炎症反应的重要指标，可通过活化下游半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cysteinylaspartatespecificproteinase鄄1，Caspase鄄1）信号进而激活白细胞介素1茁（interleukin鄄1beta，IL鄄1茁）、IL鄄18及肿瘤坏死因子琢（tumornecrosisfactor鄄alpha，TNF鄄琢）等炎症因子，造成组织损伤[4鄄6]。为此，本研究通过建立大鼠AKI模型，探讨NLRP3炎性小体在脓毒症AKI中的作用机制。中华危重症医学杂志（电子版）2020年2月第13卷第1期ChinJCritCareMed(ElectronicEdition),February2020,Vol.13,No.11材料与方法1.1实验试剂剂57··浓度;加入上样缓冲液，煮沸使蛋白变性，置于-80益冰箱保存备用，采用Western鄄blotting法进行检测。其中，NLRP3、Caspase鄄1一抗浓度均为1颐500，内参GAPDH浓度为1颐1000，二抗浓度均为1颐2000。最后，应用ImageJ2.1软件对条带进行分析。1.6统计学方法采用SPSS20.0统计学软件进行分析，计量资料以均数依标准差（x軃依s）表示，3组大鼠建模前后血清肌酐水平比较采用两因素方差分析，而血清IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢及NLRP3蛋白和Caspase鄄1蛋白较采用LSD鄄t检验，以P约0.05为差异有统计学表达水平比较采用单因素方差分析，进一步两两比意义。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、Caspase鄄1抑制剂Belnacasan（VX鄄765）购自美国Sigma公司;兔抗大鼠NLRP3抗体（1颐500）、Caspase鄄1抗体（1颐500）、甘油醛鄄3鄄磷酸脱氢酶（glyceraldehyde鄄3鄄phosphatedehydrogenase，GAPDH）（1颐1000）及辣根过氧化物酶标记免疫球蛋白G（immunoglobulinG，IgG）二抗（1颐2000）均购自英国Abcam公司;IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢的酶联免疫吸附测定（enzyme鄄linkedimmunosorbentassay，ELISA）试剂盒，二喹啉甲酸（bicinchoninicacid，BCA）蛋白定量试剂盒及蛋白电泳试剂盒均购自上海碧云天公司。本研究已经通过医院伦理委员会审核。1.2脓毒症AKI模型的建立及分组选取8周龄雄性Wistar大鼠18只，体质量（200依20）g，由哈尔滨医科大学动物实验中心提供，许可证号:SYXK（黑）2017鄄008。采用随机数字表法将18只大鼠分为LPS组、LPS+抑制剂组及阴性对照组3组，每组6只。LPS组大鼠给予腹腔内注射LPS（3.5mg/kg），建立脓毒症AKI模型;LPS+抑制剂组大鼠给予腹腔内注射LPS（3.5mg/kg），2h后确定建模成功，再给予VX鄄765（100mg/kg）;阴性对照组大鼠则给予腹腔内注射0.3mL等渗NaCl溶液作为对照。3组大鼠均在25益恒温动物房中单笼饲养，12h光照和12h黑暗交替，自由进食标准颗粒饲料及饮水。24h后取动物标本进行检测。1.3血清肌酐水平测定分别于建模前和建模后24h抽取大鼠尾静脉血，3000r/min离心15min，离心半径为10cm，取血清1mL，应用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐水平。1.4血清IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢检测建模后24h取大鼠尾静脉血，3000r/min离心15min，离心半径为10cm，取上清1mL，根据ELISA试剂盒说明书进行操作，显色后使用酶标仪测定IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢在450nm处的吸光度值。1.5NLRP3、Caspase鄄1蛋白表达水平检测建模24h后断髓处死大鼠，由腹主动脉注入4益的等渗NaCl溶液对肾脏进行冲洗，直至肾脏变白，均取右肾组织剪碎，按10颐1的标准加入放射免疫沉淀法（radioimmunoprecipitationassay，RIPA）裂解液和磷酸酶抑制剂，匀浆后采用BCA法测定蛋白2结果2.1建模前后血清肌酐水平比较组大鼠建模后血清肌酐水平均较建模前显著升高3组大鼠建模前后血清肌酐水平比较，差异有统计学意义（F=146.910，P约0.001）。进一步两两比较发现，3组大鼠建模前血清肌酐水平比较，差异均无统计学意义（P均>0.05）;建模后，LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠血清肌酐水平均较LPS组显著降低，且阴性对照组大鼠血清肌酐水平较LPS+抑制剂组更低（P均<0.05）;LPS组及LPS+抑制剂（P均<0.05），而阴性对照组大鼠建模前后血清肌酐水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。提示脓毒症AKI模型建模成功。（mg/L，x軃依s）0.53依0.160.56依0.080.53依0.103组大鼠建模前后血清肌酐表达水平比较2.31依0.24a1.57依0.20ab0.54依0.39bcLPS+抑制剂组LPS组F值P值注:LPS.脂多糖;与同组建模前比较，aP<0.05;与LPS组比较，bP<0.05;与LPS+抑制剂组比较，cP<0.052.2血清IL鄄1茁、IL鄄18和TNF鄄琢表达水平比较146.910<0.001阴性对照组表1建模后组别例数建模前6663组大鼠血清IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢表达水平比较，差异均有统计学意义（F=217.015、20.590、168.766，P均<0.001）。进一步两两比较发现，LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢表达水平均较LPS组大鼠显著降低，且阴性对照组大鼠IL鄄18表达水平较LPS+抑制剂组更低（P均<0.05），见表2。中华危重症医学杂志（电子版）2020年2月第13卷第1期ChinJCritCareMed(ElectronicEdition),February2020,Vol.13,No.158··3组大鼠IL鄄1茁、IL鄄18和TNF鄄琢表达水平比较（ng/L，x軃依s）表2例数666组别LPS组F值P值LPS+抑制剂组阴性对照组IL鄄1823.8依2.819.6依1.5a16.6依1.2ab20.590<0.0012.3NLRP3、Caspase鄄1蛋白表达水平比较IL鄄1茁9.33依1.161.93依0.30a1.88依0.30a217.015<0.001此，本研究通过建立大鼠脓毒症AKI模型，检测脓毒症AKI大鼠中NLRP3及其他炎症指标的表达水平，发现脓毒症AKI可激活NLRP3，进而通过Caspase鄄1启动一系列炎症反应信号，造成肾脏组织损伤，为脓毒症AKI的研究提供实验依据[13]。TNF鄄琢42.3依2.123.9依2.5a23.5依1.3a168.766<0.001注:IL鄄1茁.白细胞介素1茁;TNF鄄琢.肿瘤坏死因子琢;LPS.脂多糖;与LPS组比较，aP<0.05;与LPS+抑制剂组比较，bP<0.053组大鼠NLRP3、Caspase鄄1蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（F=8.723、3.905，P=0.003、0.043）。进一步两两比较发现，阴性对照组大鼠NLRP3蛋白表达水平均较LPS组及LPS+抑制剂组显著降低，LPS+抑制剂组及阴性对照组大鼠Caspase鄄1蛋白表达水平均较LPS组显著降低（P均<0.05）;而LPS+抑制剂组大鼠NLRP3蛋白表达水平与LPS组比较，差异无统计学意义，阴性对照组大鼠Caspase鄄1蛋白表达水平与LPS+抑制剂组比较，差异亦无统计学意义（P均>0.05），见表3。3组大鼠NLRP3、Caspase鄄1蛋白比较（x軃依s）Caspase鄄10.62依0.070.51依0.09a0.50依0.09a3.9050.043NLRP32.04依0.252.04依0.271.49依0.28ab8.7230.003炎性小体作为胞内模式识别受体，在激发和调LPS+抑制剂组阴性对照组表3组别LPS组例数666节长期免疫及炎症反应中起着重要的调控作用。NLRP3炎性小体是由细胞内多种分子蛋白组成的复合体，在静止状态通常包含NLRs、细胞凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis鄄associatedspeck鄄likeproteincontainingacaspase鄄recruitmentdomain，ASC）和pro鄄Caspase鄄1[14]。NLRs是病原体及危险信号感受器，当感受到外界刺激时，NLRP3结构发生改变，ASC及pro鄄Caspase鄄1解聚，pro鄄Caspase鄄1通过自我剪切形成活性Caspase鄄1，进而激活IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢等炎症因子，攻击病原体及相关组织[15鄄22]。本研究通过腹腔注射LPS建立脓毒症AKI模型，通过检测血肌酐水平评价模型成功与否，建模后LPS组及LPS+抑制剂组大鼠NLRP3表达水平均较阴性对照组显著增高，说明AKI能够激活NLRP3炎性小体，进而增加Caspase鄄1的表达。Caspase鄄1的增加启动炎症反应，而加入Caspase鄄1抑制剂VX鄄765后相关炎症因子IL鄄1茁、IL鄄18及TNF鄄琢水平明显下降，提示Caspase鄄1是IL鄄1茁、IL鄄18及TNF鄄琢的启动因子。Caspase鄄1是一种半胱氨酸蛋白酶，参与诱导细胞凋亡，通过IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢发挥促炎作用，本研究提示脓毒症AKI可通过NLRP3-Caspase鄄1-IL鄄1茁、IL鄄18、TNF鄄琢这一信号通路发挥组织损伤的作用。IL鄄18是由抗原呈递细胞和T淋巴细胞（例如巨噬细胞、树突状细胞和CD4+T淋巴细胞）产生的促介体。本研究中，LPS+抑制剂组IL鄄18表达水平虽较LPS组显著降低，但较阴性对照组显著升高，提示IL鄄18可能通过其他途径被激活。IL鄄18和其他炎症细胞因子在LPS诱导的AKI中起重要作用，可作为今后AKI相关发生机制研究的方向。综上所述，炎细胞因子，也是内毒素血症引起器官衰竭的重要F值P值注:NLRP3.核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3;Caspase鄄1.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1;与LPS组比较，aP<0.05;与LPS+抑制剂组比较，bP<0.053讨论脓毒症是ICU常见疾病，其患病率及病死率逐年增高，尤其合并AKI者，已成为ICU死亡的重要原因之一[7鄄8]。目前脓毒症AKI的治疗方法主要是液体复苏及血管活性药物，目的是恢复肾脏血流量。然而，相关研究表明，即使早期有效地恢复肾脏血流，仍不能纠正AKI的发生[9]。有学者指出，脓毒症AKI的发病机制复杂，与炎症反应、缺血再灌注损伤、线粒体氧化应激等诸多因素密切相关[10鄄12]。本课题组预实验结果显示，一次向大鼠腹腔注活动变少，竖毛，并有发热、呼吸加快等症状，处死后射3.5mg/kg的LPS，2h后大鼠即出现精神变化，取出肾脏见皮质苍白，髓质暗红，肾组织经苏木素鄄伊红染色可见肾小球肿胀，肾小管上皮细胞凋亡，空泡变性，间质大量炎症细胞浸润，提示建模成功。因中华危重症医学杂志（电子版）2020年2月第13卷第1期ChinJCritCareMed(ElectronicEdition),February2020,Vol.13,No.1大鼠发生脓毒症时，可激活炎性小体NLRP3，进而通过Caspase鄄1通路造成组织损伤。59··鄄inducedacute鄄参考文献Campaign:SurvivingforadministrationtoFrontImmunol,2018(9):5DellingerRP,LevyMM,CarletJM,etal.international鄄327.EarlyvitaminCpatientswithseptic鄄basedJClin1刘晓原，裴源源，朱继红.脓毒性休克致急性肾损伤患者的危险因素分析[J/CD].中华危重症医学杂志（电子版），2018，11（6）:366鄄371.2玄红运，王彩丽.炎症小体NOD样受体蛋白3与肾脏疾病的研究进展[J].新医学，2018，49（9）:628鄄632.3姜华，闫宜青，江维，等.NLRP3炎症小体活化、调控机制及相关疾病机制[J].中国科学:生命科学，2017，47（1）:125鄄131.Inflammasome鄄ind鄄4KimSM,KimYG,KimDJ,etal.ependentofNLRP3mediatesmitochondrialroleregulationinrenalinjury[J].2563.Sepsisguidelinesmanagementofseveresepsisandsepticshock:2008[J].CritCareMed,2008,36(1):2966ShinTG,KimYJ,RyooSM,etal.andthiamineshockinemergencydepartments:propensityscoreanalysisofabefore鄄and鄄aftercohortstudy[J].Med,2019,8(1).7OppertM,EngelC,BrunkhorstFM,etal.AcuterenalfailureinpatientswithseveresepsisandsepticshockaindependentfactorresultsfromtheGermanPrevalenceStudy[J].DialTransplant,2008,23(3):904鄄909.SchrierRW,WangW.8[J].NEnglJMed,2004,351(2):159鄄169.Structureand9MaidenMJ,OttoS,BrealeyJK,etal.functionofthekidneyinsepticshock.Aprospectivecontrolledexperimentalstudy[J].CareMed,2016,194(6):69210UmbroI,GentileG,TintiF,etal.inpathophysiologyandbiomarkersofacutekidneyinjury[J].JInfect,2016,72142.attenuatesinhibitingactivation[J].CellDeathDis,2018,9(3):351.AmJRespirCritRecentadvancessepsis鄄induced(2):131鄄HydroxychloroquinebyrenalcathepsinmediatedNLRP3inflammasomeProtectiveeffects11TangTT,LvLL,PanMM,etal.ischemia12ZhaoWY,ZhangL,SuiMX,etal.鄄鄄formortality:NephrolAcuterenalfailureandsepsisreperfusionsignificantinjury鄄700.risk/by17鄄426.16YanY,JiangW,LiuL,etal.inflammation18YoumYH,NguyenKY,GrantRW,etal.茁鄄hydroxybutyrate13KomadaT,UsuiF,KawashimaA,etal.RoleofNSciRep,2015(5):10901.ofsirtuin3inamurinemodelofsepsiskidneyinjury[J].SciRep,2016(6):33201.LRP3inflammasomesforrhabdomyolysis鄄inducedacutekidneyinjury[J].14MartinonF,BurnsK,TschoppJ.Theinflammasome:amolecularplatformtriggeringactivationofinflammatorycaspasesandprocessingofproILMolCell,鄄beta[J].2002,10(2):41715MariathasanS,WeissDS,NewtonK,etal.Cryopyrinactivatestheinflammasomeinresponsetotoxinsand鄄232.ATP[J].Nature,2006,440(7081):228Dopaminecontrolssy鄄inhibitionstemicthroughofNLRP3inflammasome[J].Cell,2015,160(1鄄2):62鄄73.ActivationofShiCS,ShenderovK,HuangNN,etal.autophagyinflammatorysignalslimitsIL鄄1茁productionbytargetingubiquitinatedinflammasomesfordestruction[J].NatImmunol,2012,13(3):255metaboliteblocksinflammasome鄄mediatedinflammatorydisease[J].Med,2015,21(3):263activatedinAlzheimer'sdiseaseandpathologyinAPP/PS1mice[J].(7434):674鄄678.20WangP,HuangJ,LiY,etal.monoxidedecreasessepsisandinhibitsNLRP3inflammasomeactivationinrats[J].IntJMolSci,2015,16(9):20595TNF鄄alphamediateschemokineandcytokineexpressionandrenalinjurycisplatinnephrotoxicity[J].JClinInvest,2002,110(6):835鄄842.22HookVY,KindyM,HookG.BimprovememorytransgenicAlzheimerdiseasemiceexpressingthewildtype,butnottheSwedishmutant,betatheamyloidprecursorprotein[J].283(12):7745鄄263.TheketoneNLRP3NatNLRP3iscontributestoNature,2013,493Exogenouscarbon鄄inducedacutekidneyinjuryInhibitorsofcathepsinbeta鄄amyloid鄄secretasesiteofJBiolChem,2008,19HenekaMT,KummerMP,StutzA,etal.21RameshG,ReevesWB.鄄20608.reduce鄄7753.鄄269.and鄄inin鄄（收稿日期:2019鄄09鄄15）（本文编辑:于莉）张建楠，刘文，昌广平，等.核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在脓毒症急性肾损伤大鼠肾脏组织的表达及其影响[J/CD].中华危重症医学杂志（电子版），2020，13（1）:55鄄59.
乌鲁木齐市男男性行为人群HIV新发感染及影响因素分析

目的了解乌鲁木齐市男男性行为人群（MSM）HIV新发感染状况及影响因素，为制定艾滋病防控措施提供依据。方法于2010年6月-2015年3月在乌鲁木齐市建立HIV抗体检测阴性的MSM人群队列，定期进行随访调查和HIV抗体检测，采用Cox比例风险回归模型分析新发感染的影响因素。结果截至2015年3月共纳入619人，总观察670.03人年，HIV新发感染23例，新发感染率为3.43/100人年。多因素Cox比例风险回归分析结果显示，未吸食毒品（HR=0.281，95%CI:0.156~0.967）是MSM人群HIV新发感染的保护因素;近6个月同性性行为未坚持使用安全套（HR=2.632，95%CI:1.133~6.109）和近6个月有同性商业性性行为（HR=3.774，95%CI:1.632~8.768）是危险因素。结论乌鲁木齐市MSM人群HIV新发感染率为3.43/100人年，MSM人群HIV新发感染与安全套使用情况、同性商业性
暗室瞳孔直径下NdYAG激光后囊膜切开术后屈光状态及视觉质量的变化

目的探讨暗室瞳孔直径下Nd:YAG激光后囊膜切开术后的屈光状态、高阶像差（higherorderaberration，HOA）、视觉相关生活质量变化特点。方法收集2017年9月至11月在我院就诊的后发性白内障患者57例73眼。所有患者均行Nd:YAG激光后囊膜切开术治疗，切开直径为暗室下瞳孔直径（3~4mm），观察激光术前后最佳矫正视力（bestcorrectedvisualacuity，BCVA）、屈光状态及Catquest9SF量表总分和各问题得分的变化，应用KR1W视觉质量分析仪分别测量分析4mm和6mm瞳孔直径下激光术前后HOA的变化。结果Nd:YAG激光后囊膜切开术后BCVA（0.095±0.020）较术前（0.550±0.039）显著提高，差异有统计学意义（P<0.05）;术前球镜度数、等效球镜度数分别为（-0.938±0.209）D、（-1.581±0.207）D，术后分别为（-0.658±0.218）D、（-1.204±0.213）D，手术前后差异均有统计学意义（均为P<0.05）;术后Catquest9SF量表总分及各问题得分均较术前显著提高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）;4mm、6mm瞳孔直径下的全眼及眼内总HOA、三阶像差、四阶像差、三叶草像差、彗差、二阶像差术后较术前显著降低，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论暗室瞳孔直径下Nd:YAG激光后囊膜切开术后，屈光状态呈远视漂移，高阶像差明显降低，视力及视觉相关生活质量问卷评分显著提高，患者视觉质量明显改善。[关键词]后囊膜混浊;Nd:YAG激光后囊膜切开术;屈光;高阶像差[中图分类号]R776后囊膜混浊（posteriorcapsuleopacification，PCO）是白内障术后最常见的远期并发症。尽管手术技术以及人工晶状体（intraocularlens，IOL）材料或设计有所改善，成人PCO发病率仍为8.0%~http://www.ykxjz.com·085·343%，儿童高达100.0%[13]。Nd:YAG激光后囊膜切开术是目前PCO主要的治疗方法。后囊膜切口存在争议。Holladay等[4]指出，后囊膜切开孔径为3.9mm时并发症最少，且可获得最大视功能改善，为最佳切口直径。Yilmaz等[5]研究则倾向于行暗室直径大小对术后屈光状态及视觉质量改善的影响尚瞳孔直径下后囊膜切开术。而目前国内有关小孔径下后囊膜切开术对视觉质量及屈光状态影响的相关研究较少。因此，本研究观察暗室瞳孔直径后囊膜切开术后的屈光状态、高阶像差（higherorderaberration，HOA）变化及视觉相关生活质量改善情况，现报告如下。1资料与方法1.1一般资料前瞻性研究。收集2017年9月至11月于我院行Nd:YAG激光治疗的PCO患者56例73眼，其中男19例26眼、女37例47眼;年龄51~89（74.01±8.62）岁。纳入标准:（1）年龄相关性白内障术后6个月以上诊断为PCO且最佳矫正视力（bestcorrectedvisualacuity，BCVA）≤0.5;（2）统一行白内障超声乳化吸除+IOL植入术，手术顺利完成，IOL植入在囊袋中，且术后IOL位置居中。排除标准:（1）除PCO外其他会影响视觉质量的眼部疾病（如青光眼等）;（2）散瞳后瞳孔直径<6mm;（3）既往除外白内障手术的内眼手术史;（4）患有视神经或中枢系统疾病者;（5）不能配合问卷调查者。1.2检查术前行眼屈光检查、KR1W视觉质量分析仪检查并填写Catquest9SF量表。采用综合验光仪（日本Topcon公司）进行屈光检查。HOA测量前使用复方托吡卡胺散瞳，测量4mm、6mm瞳孔直径下IOL眼的全眼、角膜、眼内像差的RMS值，对焦后要求患者快速眨眼2~3次，使泪膜分布均匀，以排除泪膜对HOA的影响，均测量3次取平均值。Catquest9SF包含9个问题，2个总体评估问题和7个日常生活相关问题。每个问题有4个困难度级别选项;第2个问题的选项是:1=非常不满意、2=比较不满意、3=比较满意、4=非常满意。其他问题的选项是:1=非常困难、2=比较困难、3=有点困难、4=没有困难。所有检查均由同一位医师完成，以减1.3手术方法手术由同一位经验丰富的医师完成。使用德国Zeiss公司的VISULASYAGⅡ型激光少误差。机。采用开罐式激光后囊膜切开方法:自后囊膜暗室下瞳孔边缘上方方位处开始，分别沿顺时针方向瓣，使其向后下翻转，完整切开后囊膜后再修整切口和逆时针方向逐步环形切开后囊膜，在下方600方位保留约1mm“蒂”不切开;再击射游离的后囊膜边缘，切开直径为3~4mm。激光的单次脉冲能量为2.0~5.0mJ，脉冲次数为5~20次。1.4术后随访术后1周、1个月行主觉验光检查，眼科新进展2019年6月第39卷第6期RecAdvOphthalmolVol.39No.6June2019术后1个月行KR1W视觉质量分析仪检查并填写Catquest9SF量表。1.5统计学方法数据分析采用SPSS23.0软件。BCVA以最小角度的对数值（logMAR）表示。所有结果以均数±标准差表示。手术前后的结果比较使用非参数Wilcoxon符号秩检验。P<0.05为差异有统计学意义。SE/D时间术前2结果2.1手术前后视力变化术后1周、1个月视力分别为0.103±0.021、0.095±0.020，均较术前（0550±0.039）明显提高，差异均有统计学意义（均为P<0.05），术后1个月与术后1周比较，差异无统计学意义（P>0.05）。2.2手术前后的屈光度变化术后1周及1个月的球镜、等效球镜（sphericalequivalent，SE）度数均较术前增加，差异均有统计学意义（均为P<005），术后1个月与术后1周的球镜、SE度数比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）。术后1周、1个月的角膜散光、柱镜度数与术前以及术后1周、1个月之间比较差异均无统计学意义（均为P>005）。见表1。表1后囊膜切开术后的屈光度变化柱镜度数/D角膜散光/D差、二阶散光术后较术前明显降低，差异均有统计学球镜度数/D-0.938±0.209-1.288±0.123-0.829±0.074-1.581±0.207-0.650±0.205-1.046±0.089-0.833±0.073-1.173±0.209术后1周术后1个月-0.658±0.218-1.092±0.096-0.842±0.067-1.204±0.2132.3术后患者Catquest9SF量表总分的变化术后Catquest9SF量表总分为（34.00±0.89）分，较术前[（1848±0.75）分]提高，差异有统计学意义（P<0.05）。2.4手术前后4mm、6mm瞳孔直径下的HOA变化4mm、6mm瞳孔直径下的全眼及眼内球差术后与术前比较，差异均无统计学意义（均为P>0.05），全眼及眼内总HOA、三阶像差、四阶像差、三叶草、彗意义（均为P<0.05）;角膜HOA术后与术前比较差异均无统计学意义（均为P>0.05），见表2-表5。表2Nd:YAG激光术前后4mm瞳孔直径下全眼HOA比较P值0.471±0.0680.321±0.0350.000总HOA/μm0.421±0.0660.283±0.0320.000三阶像差/μm0.181±0.0160.141±0.0160.002四阶像差/μm0.285±0.0510.198±0.0300.010三叶草像差/μm0.278±0.0440.175±0.0150.012彗差/μm0.114±0.0130.089±0.0160.028四叶草像差/μm0.089±0.0090.066±0.0050.028二阶散光/μm球差/μm0.050±0.0090.053±0.0060.9232.5随访观察Nd:YAG激光后囊膜切开术后1周及1个月随访时所有患者眼压均在正常范围，IOL指标术前术后眼科新进展2019年6月第39卷第6期RecAdvOphthalmolVol.39No.6June2019无损伤，无虹膜睫状体炎、黄斑水肿、视网膜脱离、视网膜裂孔等并发症。术后指标术前表3Nd:YAG激光术前后4mm瞳孔直径下眼内HOA比较P值0.453±0.0650.306±0.0390.000总HOA/μm0.399±0.0640.270±0.0360.001三阶像差/μm0.171±0.0150.136±0.0170.002四阶像差/μm0.267±0.0500.169±0.0300.004三叶草像差/μm0.266±0.0420.192±0.0200.049彗差/μm0.106±0.0120.097±0.0170.343四叶草像差/μm0.090±0.0080.067±0.0060.012二阶散光/μm球差/μm-0.017±0.008-0.008±0.0060.405表4Nd:YAG激光术前后6mm瞳孔直径下全眼HOA比较P值1.883±0.2381.160±0.1100.000总HOA/μm1.385±0.1910.914±0.1020.001三阶像差/μm四阶像差/μm0.988±0.1310.601±0.0680.000三叶草像差/μm）0.946±0.1460.607±0.0940.001彗差/μm0.924±0.1260.592±0.0490.0060.561±0.0890.331±0.0640.000四叶草像差/μm0.507±0.0840.238±0.0260.000二阶散光/μm球差/μm0.372±0.0700.341±0.0260.375表5Nd:YAG激光术前后6mm瞳孔直径下眼内HOA比较术前指标术后术后术前P值1.829±0.2560.980±0.1140.0001.311±0.1980.773±0.1050.0010.952±0.1470.477±0.0690.0000.887±0.1510.462±0.0930.0000.890±0.1310.549±0.0510.0220.580±0.0960.320±0.0640.0000.526±0.0960.226±0.0270.0000.066±0.0790.037±0.0240.600指标总HOA/μm三阶像差/μm四阶像差/μm三叶草像差/μm彗差/μm四叶草像差/μm二阶散光/μm球差/μm3讨论PCO是由于残留晶状体上皮细胞增殖、迁移及转分化而形成的，可导致视力和对比敏感度下降、眩光及单眼复视。本研究显示，暗室瞳孔直径下后囊膜激光切开术后视力较术前显著提高，所有病例均未发生术中及术后并发症，因此小孔径Nd:YAG激光切开术是安全有效的。而许多研究也表明，最佳的激光后囊切开孔径应该等于或大于暗室下瞳孔大小，且不超过IOL光学面直径[68]。后囊膜切开术的并发症之一是IOL移位。Oztas等[9]运用Pentacam发现，Nd:YAG激光术后前房深度（anteriorchamberdepth，ACD）较术前减小，术后屈光状态呈近视漂移。Ozkurt等[10]报道，Nd:YAG激http://www.ykxjz.com·185·光术前后的ACD和SE未发生显著变化。Eliaik等[11]运用眼前节OCT发现，Nd:YAG激光术后ACD较术前加深。Karahan等[7]研究表明，Nd:YAG激光相关，切口直径大则IOL后移更明显。王燕等[12]报道，Nd:YAG激光术后ACD加深，呈远视漂移，远视术后屈光状态呈远视漂移，且切口大小与漂移程度视漂移。漂移程度与后囊膜切口大小无关。目前有关后囊膜激光切开术对屈光状态影响的研究结果尚不统一。的增加与角膜屈光手术后对比敏感度降低有差变化，结果发现术后除了四叶草像差外，其余各阶本研究发现，术后的球镜、SE较术前增加（均为P<005），由此可知术后屈光状态向远视漂移。推测其机制可能为，Nd:YAG激光的冲击波对悬韧带产生机械效应，引起IOL向玻璃体内移位，导致有效IOL位置增加，IOL成像焦点后移，故术后屈光状态呈远随着波前像差引入屈光学，有研究显示，眼HOA关[1314]。Oshika等[15]研究指出，对比敏感度与眼部HOA显著相关。Yotsukura等[16]的研究显示，视力≥1.0的PCO眼行后囊膜切开术后的HOA和彗差较术前显著降低，且总HOA和logMAR低对比度视力间（r=0.4978，P<0.05）及总HOA和logMAR功能性视力（r=0.5651，P<0.05）均有显著相关性。Wakamatsu等[17]研究发现，视力≥1.0的PCO眼行后囊膜切开术后的总HOA、球差较术前明显降低，且两者分别与logMAR功能性视力、logMAR低对比度视力间有明显相关性，表明PCO有可能引起球差和HOA增加，使视功能恶化。Levy等[18]运用NidekOPD测量PCO患者后囊膜切开术后的波前像像差均较术前显著降低。本研究发现术后4mm、6mm瞳孔直径下的全眼及眼内总HOA、彗差、三叶量明显改善，这与术后患者Catquest9SF量表总评分明显增高相一致，也与既往研究结果基本相符[1618]。然而本研究中的球差未发生明显变化，这与既往研究结果不统一[1618]，推测其原因可能是:首先，既往研究后囊膜切开孔径都在4mm以上，而本研究为3~4mm;其次，使用的测量仪器不同，使得两者间测量的HOA可能是不可比较的。且有研究报道运用HartmannShack方法和NidekOPD测量的HOA值是不可比的[19]。本研究存在局限性。首先，没有测量IOL偏心和倾斜，这可能会影响HOA。其次，未测量对比敏感度及比较其与HOA间的相关性。第三，未评估PCO的形态或严重程度及其与HOA间的相关性。综上所述，暗室瞳孔直径下Nd:YAG激光后囊膜切开术可显著提高PCO患者的视力及视觉质量，但将造成IOL在眼内位置的后移，术后呈远视漂移。参考文献[1]VASAVADAAR，PRAVEENMR.Posteriorcapsuleopacifica草像差均较术前显著降低，表明术后患者的视觉质·285·http://www.ykxjz.comtionafterphacoemulsification:annualreview[J].AsiaPacJOphthalmol，2014，29（8）:235240.[2]R?NBECKM，ZETTERSTR?MC，WEJDEG，KUGELBERGM.Comparisonofposteriorcapsuleopacificationdevelopmentwith3intraocularlenstypes:fiveyearprospectivestudy[J].JCataractRefractSurg，2009，35（11）:19351940.[3]AWASTHIN，GUOS，WAGNERBJ.Posteriorcapsularopacification:aproblemreducedbutnotyeteradicated[J].ArchOphthalmol，2009，127（4）:555562.[4]HOLLADAYJT，BISHOPJE，LEWISJW.Theoptimalsizeofaposteriorcapsulotomy[J].JAmIntraoculImplantSoc，1985，11（1）:1820.[5]YILMAZS，OZDILMA，BOZKIRN，MADENA.TheeffectofNd:YAGlasercapsulotomysizeonrefractionandvisualacuity[J].JRefractSurg，2006，22（7）:719721.[6]HAYASHIK，NAKAOF，HAYASHIH.Influenceofsizeofneodymium:yttriumaluminiumgarnetlaserposteriorcapsulotomyonvisualfunction[J].Eye，2010，24（1）:101106.[7]KARAHANE，TUNCERI，ZENGINMO.TheeffectofNd:YAGlaserposteriorcapsulotomysizeonrefraction，intraocularpressure，andmacularthickness[J].JOphthalmol，2014，2014:846385.[8]MONTENEGROGA，MARVANP，DEXLA，PIC?A，CANUTMI，GRABNERG，etal.Posteriorcapsuleopacificationassessmentandfactorsthatinfluencevisualqualityafterposteriorcapsulotomy[J].AmJOphthalmol，2010，150（2）:248253.[9]OZTASZ，PALAMARM，AFRASHIF，YAGCIA.TheeffectsofNd:YAGlasercapsulotomyonanteriorsegmentparametersinpatientswithposteriorcapsularopacification[J].ClinExpOptom，2015，98（2）:168171.[10]OZKURTYB，SENG?RT，EVCIMANT，HABOCˇLUM.Refraction，intraocularpressureandanteriorchamberdepthchangesafterNd:YAGlasertreatmentforposteriorcapsularopacificationinpseudophakiceyes[J].ClinExpOptom，2010，92（5）:412415.[11]ELIAIKM，BAYRAMLARH，ERDURSK，DEMIRCIG，GLKILIKG.Anteriorsegmentopticalcoherencetomographymeasurementafterneodymiumyttriumaluminumgarnetlasercapsulotomy[J].AmJOphthalmol，2014，158（5）:994998.[12]WANGY，OUY，YUANY，WANGL，PANGL.Changesofre眼科新进展2019年6月第39卷第6期RecAdvOphthalmolVol.39No.6June2019fractionandocularbiologicalparametersafterNd:YAGlasercapsulotomyforposteriorcapsuleopacification[J].RecAdvOphthalmol，2015，35（6）:569572.王燕，欧扬，袁远，王璐，庞龙.后发性白内障Nd:YAG激光后囊膜切开术后屈光状态及眼生物学参数的变化[J].眼科新进展，2015，35（6）:569572.[13]YAMANEN，MIYATAK，SAMEJIMAT，HIRAOKAT，KIUCHIT，OKAMOTOF，etal.Ocularhigherorderaberrationsandcontrastsensitivityafterconventionallaserinsitukeratomileusis[J].InvestOphthalmolVisSci，2004，45（11）:39863990.[14]TANABET，MIYATAK，SAMEJIMAT，HIROHARAY，MIHASHIT，OSHIKAT.Influenceofwavefrontaberrationandcornealsubepithelialhazeonlowcontrastvisualacuityafterphotorefractivekeratectomy[J].AmJOphthalmol，2004，138（4）:620624.[15]OSHIKAT，TOKUNAGAT，SAMEJIMAT，MIYATAK，KAWANAK，KAJIY.Influenceofpupildiameterontherelationbetweenocularhigherorderaberrationandcontrastsensitivityafterlaserinsitukeratomileusis[J].InvestOphthalmolVisSci，2006，47（4）:13341338.[16]YOTSUKURAE，TORIIH，SAIKIM，NEGISHIK，TSUBOTAK.Effectofneodymium:YAGlasercapsulotomyonvisualfunctioninpatientswithposteriorcapsuleopacificationandgoodvisualacuity[J].JCataractRefractSurg，2016，42（3）:399404.[17]WAKAMATSUTH，YAMAGUCHIT，NEGISHIK，KAIDOM，MATSUMOTOY，ISHIDAR，etal.Functionalvisualacuityafterneodymium:YAGlasercapsulotomyinpatientswithposteriorcapsuleopacificationandgoodvisualacuitypreoperatively[J].JCataractRefractSurg，2011，37（2）:258264.[18]LEVYJ，LIFSHITZT，KLEMPERERI，KNYAZERB，ASHKENAZYZ，KRATZA，etal.TheeffectofNd:YAGlaserposteriorcapsulotomyonocularwavefrontaberrations[J].CanJOphthalmol，2009，44（5）:529533.[19]BURAKGAZIAZ，TINIOB，BABABYANA，NIKSARLIKK，ASBELLP.Higherorderaberrationsinnormaleyesmeasuredwiththreedifferentaberrometers[J].JRefractSurg，2006，22（9）:898903.欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁《眼科新进展》杂志征订启事《眼科新进展》杂志是由新乡医学院主办的眼科学高级学术刊物，创刊于1980年，大16开，100页，国内外公开发行。1999年加入国家科技部《万方数据系统科技期刊群》和《中国学术期刊（光盘版）》，1997年被上海医科大学图书馆选定为医学类核心期刊，2000年被美国《化学文摘》收录，2001年被俄罗斯《文摘杂志》收录，自2002年连续入选中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊），自2008年连续入选中国中文核心期刊，并连续被评为河南省二十佳科技期刊。2009年入选WHO西太平洋地区医学索引（WPRIM），并被评为RCCSE中国核心学术期刊。国际标准连续出版物号为:ISSN10035141，国内统一刊号:CN411105/R，邮发代号:3642。本刊辟有名家讲坛（述评）（Editorial）、实验研究（Experimentalstudy）、应用研究（Aplliedstudy）、文献综述（Reviewarticle）、海外信息（Overseasinformation）、消息（News）、读者来信（Letters）等栏目。本刊读者对象主要是眼科学临床、科研和教学工作者。欢迎国内外眼科医学工作者踊跃投稿和订阅。国内每期定价1000元，全年定价12000元。如错过邮局订阅，可直接汇款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《实用医学杂志》稿约

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妙用经方从“因虚、积冷、结气”辨治产后抑郁症验案四则

产后抑郁症对产妇的生活与工作有着严重的影响。从中医角度思考和辨治产后抑郁症有着重要的意义并有较大的研究空间。笔者通过对临床中辨治产后抑郁症的四则验案进行分析，探讨运用经方治疗产后抑郁症的思路。
多回波Dixon技术在非酒精性脂肪肝中脂肪定量及铁沉积的应用进展

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）病人的肝脏脂肪含量和铁过载与其病情的进展密切相关。基于MRI的水脂分离技术即Dixon技术不仅可以测量肝脏脂肪分数，还可得出R2*弛豫图来反映铁沉积情况，其具有无创性、可重复性等优点，在NAFLD的早期诊断、病情评估及疗效评价中具有重要的临床价值。就多回波Dixon技术在肝脏脂肪定量及铁沉积中的研究进展予以综述。
混合型嗜酸性粒细胞性胃肠炎1例

目的:探讨嗜酸性粒细胞性胃肠炎(eosinophilicgastroenteritis，EG)的临床特点、诊断、治疗方法，以提高临床上对该病的诊治。方法:对本院1例以“腹泻、腹痛”为主要表现的35岁女性患者进行诊断治疗及随访，并结合相关文献，探讨EG患者的临床表现、实验室检查、影像学检查、内窥镜表现的特点及治疗方法。结果:结合患者临床表现、血清学检查、影像学检查及内窥镜检查，最终诊断为EG，经口服醋酸泼尼松片抗炎、抑酸、保护胃肠黏膜、止泻等治疗约2周后症状缓解，复查外周血嗜酸性粒细胞(eosinophils，Eos)明显下降，好转出院，出院后随访4月，复查外周血Eos恢复正常，无腹泻、腹痛等症状复发。结论:EG患者临床表现、实验室检查、影像学检查和内窥镜检查表现多样，缺乏特异性，外周血、骨髓及腹水中的Eos升高对本病有提示意义，确诊需组织病理学结果，大部分患者经糖皮质激素治疗预后较好。
3D打印与LCP分别联合MIPO技术治疗成人NeerⅡ、Ⅲ型肱骨近端骨折的临床效果

目的探讨3D打印与LCP分别联合MIPO技术治疗成人NeerⅡ、Ⅲ型肱骨近端骨折的临床效果.方法选取2017年1月-2018年6月在东莞康华医院创伤骨科住院并进行手术的肱骨近端骨折60例作为研究对象,随机分为试验组和对照组,每组各30例.试验组采用3D打印联合微创经皮接骨技术(MIPO)进行治疗,对照组采用锁定加压钢板(LCP)联合MIPO进行治疗.通过Neer评分对术后肩关节功能进行评估.观察并比较2组患者的手术时间、术中出血量、骨折愈合时间、术后并发症、Neer评分.结果试验组手术时间明显短于对照组,且术中出血量明显少于对照组,差异有统计学意义(t=2.631、4.167,P<0.05);2组骨折愈合时间差异无统计学意义(P>0.05);试验组手术后12个月时,Neer评分中4项均优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).2组术后均获愈合,试验组随访过程中均未出现无骨不连、内固定松动或断裂、切口感染等并发症,无肱骨头坏死及神经损伤.对照组有1例患者术后螺钉松脱,肩关节活动没有受到明显影响.结论3D打印联合MIPO技术是治疗成人NeerⅡ、Ⅲ型肱骨近端骨折合理可行的方法,可提高复位质量,便于手术操作,缩短手术时间以及减少术中出血量,有利于肩关节功能的恢复.关键词:肱骨近端骨折;3D打印技术;锁定加压钢板;微创经皮钢板内固定中图分类号:R683.41文献标识码:A文章编号:1009G5551(2019)07G0895G04doi:10.3969/j.issn.1009G5551.2019.07.015Clinicalvalueof3DprintingandLCPcombinedMIPOmethodinthetreatmentofadultNeerIIandIIIproximalCHENJin,MAJunchang,SONGZhihui,YUANJianbing,CHENSi(DepartmentofOrthopedics,DongguanKanghuaHospital,DongguanGuangdong523080,China)Abstract:ObjectiveToanalyzethevalueofclosedpryreductionandpercutaneoushollowscrewfixationcombinedwith3Dprintingtechniqueinthetreatmentofcalcanealfracture.Methods60hospitalizedpaGtientswithproximalhumeralfracturesinthedepartmentofOrthopaedicsofDongguanKanghuaHospitalfromJanuary2017toJune2018wererandomlydividedintoexperimentalgroupandcontrolgroupwith30casesineachgroup.Theexperimentalgroupwastreatedwith3DprintingcombinedwithminimallyinvaGsivepercutaneousosteosynthesis(MIPO),whilethecontrolgroupwastreatedwithlockingcompressionplate(LCP)combinedwithMIPO.TheshoulderfunctionwasassessedbyNeerscore.Theoperativetime,intraoperativebloodloss,fracturehealingtime,postoperativecomplicationsandNeerscorewereobserved基金项目:广东省东莞市社会科技发展一般项目(201650715000765)作者简介:陈进(1982-),男,本科,主治医师,研究方向:骨盆与复杂关节内骨折,EGmail:9328406@qq.com.新疆医科大学学报东莞康华医院创伤骨科住院并进行手术的肱骨近端698第42卷andcomparedbetweenthetwogroups.ResultsTheoperationtimeoftheexperimentalgroupwasshorterthanthatofthecontrolgroup,andtheamountofbleedingduringtheoperationwaslessthanthatofthecontrolgroup,thedifferencewasstatisticallysignificant(t=2.631,4.167,P<0.05).TherewasnosignifGicantdifferenceinfracturehealingtimebetweentwogroups(P>0.05).Intheexperimentalgroup,4NeerscoresinDecemberwerebetterthanthoseinthecontrolgroup,andthedifferencewasstatisticallysignifiGcant(P<0.05).Therewerenocomplicationssuchasnonunion,looseningorruptureofinternalfixation,infectionofincision,necrosisofhumeralheadandnerveinjuryduringfollowGupintheexperimentalgroup.Inthecontrolgroup,1patientshadscrewlooseningafteroperation,andshoulderjointactivitywasnotsignificantlyaffected.Conclusion3DprintingcombinedwithMIPOtechnologyisareasonableandfeasiblemethodfortreatingadultNeertypeIIandIIIproximalhumeralfractures.Itcanimprovethereductionquality,facilitatetheoperation,shortentheoperationtimeandreducetheamountofbleedingduringtheoperation,andisconducivetotherecoveryofshoulderjointfunction.Keywords:Proximalhumeralfractures;3Dprintingtechnology;lockingcompressionplate;minimallyinGvasivepercutaneousplateosteosynthesis肱骨近端骨折是临床常见创伤,大概占所有肱骨骨折的45%,而且以60岁以上患者大居多[1-2].临床上治疗肱骨近端骨折难度较大,特别是老年患者多合并基础疾病、骨质疏松症等,治疗更加棘手,难以确保术后疗效.现如今3D打印技术延伸到骨科领域,在术前评估、手术规划及术中导航得到了应用与发展[3-4].为此,本研究观察3D打印与锁定加压钢板(LCP)分别联合微创经皮接骨技术(MIPO)治疗成人NeerⅡ、Ⅲ型肱骨近端骨折的临床效果,现报道如下.1资料与方法1.1临床资料选取2017年1月-2018年6月在骨折60例作为研究对象.纳入标准:(1)均为NeerⅡ、Ⅲ型骨折;(2)年龄>18岁;(3)骨折时间<3周.排除标准:(1)开放性肱骨近段骨折;(2)伴有严重基础疾病;(3)伴有深经血管损伤者.本研究已获东莞康华医院医学伦理委员会批准,并与患者签订知情同意书.采用随机对照法,将入选患者根据入院顺序将患者分配到试验组和对照组,每组各30例.试验组患者中男性13例,女性17例,年龄51~75岁,平均年龄(64.3±1.5)岁;Neer分型Ⅱ型11例,Ⅲ型19例;致伤原因:高处坠落伤2例,交通伤22例,平地摔伤5例;合并高血压病、糖尿病基础疾病11例.对照组患者中男性11例,女性19例,年龄53~78岁,平均年龄(65.2±1.1)岁;Neer分型Ⅱ型10例,Ⅲ型20例;致伤原因:高处坠落伤3例,交通伤20例,平地摔伤7例;合并高血压病、糖尿病基础疾病12例.2组患者年龄、性别、Neer分型、合并基础疾病等一般资料之间差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性.1.2方法1.2.1术前准备常规获取2组患者患肩CT扫描数据.试验组采用3D打印联合MIPO进行治疗.将患肩薄层CT数据以DICOM格式保存,并导入Mimics软件进行三维重建;接着打印出患肩骨折模型及复位后骨折模型.由医生结合实体模型和所测数据用以参考术中钢板、螺钉放置.手术中患者取平卧位,采用颈丛+臂丛或全麻.经三角肌劈开入路,防止损伤腋神经,显露骨折端,保护软组织血供,剥离部分骨膜,以结节间沟、大结节的位置为参照点,复位肱骨头及大结节等骨折块并克氏针临时固定.C臂X线机透视监视下,依据术前模拟手术数据选取肱骨近端锁定接骨板(LPHP),钻孔,拧入术前所测的螺钉长度.钢板远端锁钉采用MIPO理念经皮置入,肩袖损伤者同期修复.检查肩关节活动情况,透视骨折复位及钢板螺钉位置满意后冲洗止血,逐层缝合.对照组采用LCP联合MIPO进行治疗.由同一专业组手术医生进行操作,通过手法推压使骨折块初步复位,采用1枚的同类型多孔的LCP钢板贴骨膜做潜行隧道,并使接骨板与肱骨大结节相贴附.把LCP钢板插入,近端位于结节间沟后外侧缘、大结节上缘向下5cm处,C臂机透视下证实钢板位于肱骨前外侧中心位置.在远端皮肤做2cm左右的接应切口并显露钢板远端.LCP钢板近端用克氏针作暂时固定,接着牵引复位,再用克氏针暂时固定.C臂机透视证实骨折复位及钢板贴附情况良好后,在LCP钢板近端安装导向器,用3~4枚锁定螺钉根据设计方向固定.肩袖损伤者同期修复.检查肩关节活动情况,透视骨折复位及钢板螺钉位置满意后冲洗止血,逐层缝合.1.2.2术后处理术后2组患者屈肘90°悬吊,常规应用抗生素预防感染,骨质疏松者采取抗骨质疏陈进,等:3D打印与LCP分别联合MIPO技术治疗成人NeerⅡ、Ⅲ型肱骨近端骨折的临床效果79840.12)mL,差异具有统计学意义(t=4.167,P<0.05).2组在骨折愈合时间上比较差异无统计学意义(P>0.05),见表1.2组典型病例手术前、后特征见图1和图2.表12组患者手术相关情况比较(Gx±s)例数手术时间/min术中出血量/mL骨折愈合时间/周16.80±1.2017.41±2.1084.41±24.44120.15±40.12组别试验组3061.09±15.09对照组3075.27±25.37t值P值2.6310.0114.167<0.0011.3810.172第7期松治疗.术后1d开始进行钟摆运动,被动肩关节外展、后伸及前屈活动,并逐步过渡到肩关节主动摆动锻炼及其它活动范围.1.3观察指标对患者进行6~12个月的随访.通过Neer评分对术后肩关节功能进行评估.记录2组患者的手术时间、术中出血量、术后并发症、Neer评分、复位情况、骨折愈合时间,并评估患者的影像学资料.Neer评分指标:包括疼痛、功能、活动度、解剖位置四个方面内容,总分为100分.愈合标准:X线片示骨折对位对线满意,骨折有连续性骨痂形成,功能完全或基本恢复.1.4统计学处理所有数据均采取SPSS22.0统计软件进行分析.计量资料用均数±标准差(Gx±s)表示,组间比较采用独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义.2结果2.12组患者手术相关情况比较本次研究结果中,试验组手术时间为(61.09±15.09)min,明显短于对照组的(75.27±25.37)min,差异具有统计学意义(t=2.631,P<0.05).试验组术中出血量为(84.41±24.44)mL,明显少于对照组的(120.15±a:术前X线片b:术后X线片图1LCP联合MIPO技术治疗肱骨近端骨折手术前、后图像a:术前CT三维重建图23D打印结合MIPO技术手术前、后图像b:3D骨折模型c:术后照片2.22组患者手术后12mNeer评分对比在治疗后第12个月试验组和对照组的失访例数分别为2和1例,失访率分别为6.67%和3.33%.如表2所示,试验组手术后12m在Neer评分中4项均优于对照组,经比较差异有统计学意义(P<0.05).试验组术后均获愈合,影像学资料显示各螺钉接骨板位置良好,随访过程中均未出现无骨不连、内固定松动或断裂、切口感染等并发症,无肱骨头坏死及神经损伤.对照组术后均获愈合,有1例患者术后螺钉松脱,肩关节活动没有受到明显影响,行锁定钢板内固定手术后愈合.3讨论肱骨近端是老年人常见的骨折部位,随着我国步入人口老龄化及交通事业的发展,其发病率呈现上升趋势,女性多于男性,受伤机制主要是为间接暴疼痛组别例数表22组患者手术后12月Neer评分对比(Gx±s,分)试验组2830.79±3.1926.61±3.7421.30±3.448.67±1.03对照组2927.27±3.3724.25±3.5218.51±3.187.53±1.68t值P值解剖位置功能活动度4.047<0.0012.4540.0173.1810.0023.0750.003力,以肱骨NeerⅡ、Ⅲ型骨折最多见[5-6].临床上对于NeerⅡ、Ⅲ型骨折的治疗主要是切开复位内固定.MIPO技术是骨折治疗生物学固定理念的一个新进展,作为微创技术的一种,其包括骨折远近端小切口,接骨板皮下插入、行骨折复位内固定[7].正是由于该理念的传播,开发出了一些适应MIPO的设计,例如LCP、LPHP等在临床应用[8-9].Farouk等[10]研究结果显示,经皮小切口钢板内固定术对股骨的穿支动脉损害明显低于而传统的切开钢板内固新疆医科大学学报898定手术,而且骨膜和骨髓依旧有良好的血流灌注.MIPO技术根据微创的原则,其优势在于不切开骨膜,不会对骨膜血运带来太大的影响,骨折局部内环境较为稳定,不影响干骺端粉碎区域,即便是对于复杂类型骨折也能获得较好治疗效果[11-12].如今3D打印技术在各行业飞速发展,其中也包括医学领域,是新型的快速成型及快速制造技术[13-14].在复杂四肢骨折的治疗中,凭借着实物模拟、个性化的优势使内固定材料准确置入,提高固定强度,弥补了常规显像模式缺陷,而且缩短了手术时间,获得了良好的手术效果[15-16].在骨科中利用3D打印技术打印出的1∶1的3D模型的可触真实的,便于医生与患者及家属交流,对疾病的诊断、术前准备的完善、术中辅助手术操作等方面发挥了重要的作用,其应用前景广阔.在切开复位内固定术中,借助于3D打印,术中复位时就心中有数,减少复位时间,而且可以评估术中风险,把术前所测的钢板、螺钉数据直接指导术中操作[17-18].但在手术中应用3D打印费用较高,会增加患者经济负担,而且对CT数据有着较高的要求[19].本研究结果显示,3D打印联合MIPO技术的试验组手术时间明显短于LCP联合MIPO技术的对照组,且试验组术中出血量明显少于对照组.试验组手术后12月在Neer评分中4项均优于对照组.提示3D打印联合MIPO技术治疗可以简化手术步骤,缩短手术时间以及减少术中出血量,有利于肩关节功能的恢复,在术中参照发挥了重要的作用.一方面3D打印模型可以帮助术者掌握患者肱骨近端骨折的解剖结构、骨折情况以及损伤程度,明确骨折复位前后的状况,以此制定精确的术前方案;借助钢板的长度比对模型,掌握钢板的长度与桡神经的关系,增加了手术的安全性.本研究中对照组中有1例术后螺钉松脱,可能是因为锁定螺钉垂直插入的角度问题.国外学者认为,螺钉应垂直钢板置入,如果垂直置入角度误差超过5°会明显降低稳定性[20],此外螺钉的作用长度也会影响轴向稳定性.考虑到骨质疏松患者骨量减少、骨强度降低,进而造成骨剪切强度降低,螺钉的把持力不够,而借助3D打印直接把螺钉数据用于指导操作,可以避免这个问题.综上所述,3D打印联合MIPO技术治疗成人NeerⅡ、Ⅲ型肱骨近端骨折可提高复位质量,便于手术操作,缩短手术时间以及减少术中出血量,有利于肩关节功能的恢复.参考文献:[1]郭伟军,赵友明,王新华,等.锁定钢板治疗肱骨近端骨折内侧柱支撑螺钉数量与其疗效的相关性研究[J].中华骨科杂志,2015,35(1):40G47.第42卷[2]向成浩,王诗波,明玉祥.内侧柱支撑重建结合锁定钢板内固定治疗老年肱骨近端骨折的临床疗效[J].中国矫形外科杂志,2015,23(4):289G294.[3]禹宝庆,敖荣广.3D打印技术在骨盆骨折术前评估和个体化钢板定制中的应用[J].中华创伤杂志,2016,32(12):1057G1059.[4]李新春,艾尼瓦尔􀅰艾力,赵岩,等.3D打印技术在Pilon骨折手术治疗中的应用研究[J].新疆医科大学学报,2018,41(8):975G978.[5]吴焘,张国秋.微创锁定加压钢板内固定改善老年肱骨近端骨折患者的肩关节功能:随机对照临床试验方案[J].中国组织工程研究,2016,20(44):6655G6660.[6]周雪峰,周家宁,马华松,等.不锈钢材质锁定钢板置入修复肱骨近端骨折:关节功能恢复及不良事件发生率[J].中国组织工程研究,2015,19(12):1812G1816.[7]赵东升.后方MIPO技术治疗肱骨干中下段骨折的初步临床报告[J].中国矫形外科杂志,2015,23(22):2099G2102.[8]刘鲁山,于国平,方俊英,等.微创锁定接骨板与传统切开复位内固定术治疗肱骨近端骨折的临床疗效研究[J].重庆医学,2017,46(27):3804G3807.[9]伏治国,张曦,施耀华,等.前方入路微创接骨板接骨术治疗肱骨干中段骨折[J].中华创伤杂志,2015,31(4):328G332.[10]FAROUKO,KRETTEKC,MIGLAUT,etal.Minimallyinvasiveplateosteosynthesis:doespercutaneousplatingdisGruptfemoralbloodsupplylessthanthetraditionaltechnique[J].JOrthopTrauma,1999,13(6):401G406.[11]STROHM,PETERC,KOSLER,etal.LockingplatefixGationofproximalhumerusfractures[J].TechShoulderElbowSurg,2005,6(1):8G13.[12]翟利锋,马苟平,沈立锋,等.MIPO技术治疗肱骨干骨折手术技巧与疗效[J].中华手外科杂志,2017,33(3):171G174.[13]邹伟民,冯学烽,庞祖才,等.3D打印技术在胸腰椎骨折椎弓根螺钉置入术中的应用[J].广东医学,2016,37(14):2130G2132.[14]吴东迎,袁峰,吴继彬,等.3D打印截骨导板在人工全膝关节置换术中的应用[J].中华骨科杂志,2015,35(9):921G926.[15]冒锋涌,姚庆强,郑朋飞,等.3D打印骨折模型在股骨转子间骨折治疗中的应用[J].中华创伤骨科杂志,2016,18(8):725G728.[16]张进,田晓滨,王少白,等.两种3D打印截骨导板在全膝关节置换模型预手术的应用探讨[J].中华创伤骨科杂志,2016,18(1):11G16.[17]黄华军,张国栋,欧阳汉斌,等.基于3D打印技术的复杂胫骨平台骨折内固定手术数字化设计[J].南方医科大学学报,2015,35(2):218G222.[18]唐盛辉,孙永建,赵汉民,等.3D打印技术辅助治疗高能量Pilon骨折的临床应用[J].中国矫形外科杂志,2015,23(22):2042G2046.[19]赵飞,李岩,毕龙,等.3D打印骨折模型辅助治疗复杂骨盆骨折的长期随访研究[J].中华创伤杂志,2016,32(11):967G973.[20]陈盛贵,孙振忠.基于生物相容性材料的3D打印骨骼修复技术的研究与应用[J].塑料工业,2017,45(3):165G167.[收稿日期:2018G11G15](本文编辑杨晨晨,尼丽帕尔􀅰亚热)
补骨脂肝毒性的研究进展

补骨脂PsoraleacorylifoliaL.为临床常用中药，具有免疫调节、抗炎、抗菌、抗肿瘤、调节雌激素水平和促进骨生长等多种药理作用。但近年来，关于补骨脂肝毒性的报道引起了国内外的高度关注。本文综述了国内外文献对补骨脂肝毒性的临床报道和实验研究，重点关注该药引发肝毒性的毒性成分以及毒理学机制，并总结了炮制与配伍对补骨脂肝毒性的影响，为补骨脂肝毒性研究和合理用药提供参考。
参考文献的写法_本刊编辑部

无摘要
卵巢浆液性癌中miR-203和miR-595表达与预后的关系

目的探讨卵巢浆液性癌组织中达与患者临床病理特征性癌预后的预测价值织样本(癌组织和癌旁正常组织)，应用织样本中表预后的关系，并分析其对卵巢浆液、。方法收集卵巢浆液性癌的手术组技术检测组的表达;分析癌组织中表达与患者预后的关系;miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系;miR-203、生存曲miR-595线分析回归模型分析卵巢浆液性癌的预后影响因素;受试者工作特征曲线分析表达对卵巢浆液性癌预后的预测。结果与癌旁正常组织相比，卵巢浆液性癌组织中价值P<均<分期)，表达与淋巴结转移表达与组织学分级表达降低(分期相关(miR-203、miR-595miR-203、miR-595表达增加(Kaplan-Meier。miR-203P<0.05miR-595miR-203CoxmiR-595均)P<0.05。Kaplan-Meier0.05));0.05相关(P、FIGO、FIGO淋巴结转移、生存曲线结果显示，miR-均较高、P<2030.05高表达组)分期。Cox低表达组患者的预后较差(、miR-595回归模型分析结果显示:淋巴结转移、miR-203GO预后的独立危险因素(结果表明，后的价值，异度分别为P。高表达、miR-595)均FI-低表达是卵巢浆液性癌受试者工作特征曲线<0.05有较好的预测卵巢浆液性癌预特、0.990、0.867。结论卵巢浆液性癌组织中低表达，且均与较差临床病理特可能是卵巢浆液性癌患联合检测的灵敏度CA125、miR-203、miR-595miR-203、miR-595miR-203、miR-595miR-595高表达，不良预后相关;、miR-203征者预后预测的潜在指标关键词:卵巢肿瘤;卵巢浆液性癌;中图分类号:文章编号:R737.31。(1001-73992020miR-203文献标志码:A)06-0703-04:doi10.13315/j.cnki.cjcep.2020.06.017(微小RNA侵袭、小亡前已发现多个如[]1miR-613，miRRNAmicroRNA分子，在转录后水平调节基因表达，在细胞增殖血管再生等多种生理病理过程中起重要作用、)是一类高度保守的非编码凋、目可作为卵巢浆液性癌的独立预后因子，定位于人染色体在不同类型在喉癌中表达降。miR-203，文献报道，为特异性上皮、miR-21miR-203]等miR。[214q32-33肿瘤中的表达水平存在差异，如miRmiR-203接受日期:2020-01-02作者单位:海南省海口市妇幼保健院1病理科、2检验科，海口570203作者简介:柯艺文，女，主治医师:。E-mailafkvuf@163.com543等[。TianmiR-203]，目前关于]研究发现，]，而在乳腺癌中表达增加[低[癌中的表达情况尚不明确卵巢癌组织样本及细胞株中均表达下降，而关于卵巢浆液性癌中的表达情况相关研究甚少在卵巢在在本实验采用技术检测卵巢浆液性癌组织中的RT-PCRmiR-203、miR-595表达情况，探讨其表达与患者病情进展预后的关系，并评估、其在卵巢浆液性癌预后预测中的应用价值miR-595miR-595。。1材料与方法14511。年月年2011~2014纳入标准:病历资料完整，术前未接受放1.1实验材料收集月海南省海口市妇幼保健院行手术治疗的卵巢浆液性癌手术组织样本(癌组织及癌旁正常组织)，共收集例符合标准的卵巢浆液性癌标本化疗、及激素治疗，术后病理诊断为卵巢浆液性癌，完成术后随访。排除标准:合并感染性疾病;合并严重器质性疾病;合并其他本实验经本院伦理委员会审核通过，组织样本采恶性肿瘤集符合采用门诊复查或电年的术后随访，直至随访时子通讯方式，对患者进行为期间截止或患者死亡，本组。世界医学协会赫尔辛基宣言例患者中位随访时间为(》。《548.09)个月45(美国。TrizolInvitrogen±7.49miRcutemiRNA提取分离试剂盒(北京天根生化公司)，反转录试剂盒(上海碧云天生物公司)，逆转录引物及引物(金斯瑞生物RT-PCR公司)，试剂盒(大连宝生物公司)，紫外分光光度计(美国公司)，仪(美国SYBRPrimeScriptRT-PCRThermoRT-PCR公司)，1.2RT-PCRmiRcutemiRNA，反转录试剂盒合成中的miRNA提取分离试剂盒提取组织逆转录引物，miR-203cDNA5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCTAG，TGGT-3'miR-595逆转录引物5'-GTCGTATCCAGTGCAGGPrimeScriptRT-PCR严格遵守试剂盒说明书，GTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACAAG-3'。SYBR试验，所有操作均正向引物，反向引RT-PCR引物:试剂盒进行5'-ACACTCCAGCTGGCGTGAAATGTTTAGGACCA-3'物正向引物miR-203RT-PCR5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'5'-;miR-595，反向引物GCGGCAACCCGTAGATCCGAA-3'5'-GTGCAGGG正向引物5'-CGCTTCGGCAGCACATATAU6TCCGAGGT-3';，反向引物C-3'反应条件:，合计94℃5'-TTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'。RT-PCR预变性个循环，以，72℃的相对，60℃15s94℃15s10min2-ΔΔCt计算miR-203、miR-595;4015s表达量1.3统计学分析所有数据采用。SPSS19.0软件进行统计;;预后miR-595公司)。ABI·407·临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2020Jun;36(6)。计量资料以珋x±s学分析检验，多组间比较采用单因素方差分析存曲线评估患者预后，归模型分析预后影响因素，受试者工作特征(表示，独立两组间比较采用双尾t生回检验分析生存率差异，Kaplan-MeierLog-rankCox以。，)曲线分析ROCingcharacteristic卵巢浆液性癌预后的预测价值意义。miR-203、miR-595receiveroperat-表达对为差异有统计学。P<0.052结果2.1卵巢浆液性癌中miR-203、miR-595的表达RT-PCR结果显示，与癌旁正常组织相比，卵巢浆液性癌组织中miR-相对表达量降低，差异均有相对表达量增加，而203统计学意义(均P<0.05miR-595，表)1。表1卵巢浆液性癌组织中miR-203、miR-595的表达(珋x±s相对相对)miR-203miR-595分组卵巢浆液性癌组织癌旁正常组织值值tPn4545表达量表达量3.19±1.571.21±0.318.300<0.050.29±0.181.24±0.3615.833<0.052.2卵巢浆液性癌中miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系卵巢浆液性癌中肿、)，与淋巴瘤直径结转移表达与患者表达与患者年龄均miR-203表达无关();均组织学分级、分期有关(、CA125>0.05PP<0.05miR-595、FIGO、)2PP。<0.05、FIGO>0.05、CA125miR-203均均肿瘤直径、无关(分期相关()，与组织学分级，表年龄淋巴结转移2.3miR-203、miR-595表达与卵巢浆液性癌患者预后的关)为界，将卵巢浆液性癌系以患者分为低表达组(例)，高表达组患者的23)，中位生存时间为术后年总生存率为个月，两组相比差年总生存率为5个月，表达量中位数(高表达组(低表达组患者的术后)，中位生存时间为结果显示，Kaplan-Meier例)和miR-203miR-203miR-203miR-20318.19%26.574/222.96225((39.5447.83%异有统计学意义(11/23以miR-595miR-595Log-rankχ2=5.306表达量中位数(高表达组(0.30例)和患者分为(例)，23术后Kaplan-Meier年总生存率为5个月，miR-59536.2722(结果显示，miR-59550.00%11/22低表达组患者的术后)1。，图miR-595，P=0.021)为界，将卵巢浆液性癌低表达组高表达组患者的)，中位生存时间为年总生存率为个月，两组相比差异5()，中位生存时间为30.28，P=0.038Log-rankχ2=4.31117.39%4/23有统计学意义(2.4Cox回归模型分析卵巢浆液性癌预后的影响因素建比例回归模型，因变量为卵巢浆液性癌预后状况，选立择组织学分级淋巴结转移、、miR-个指标为自变量，回归过程采用逐步后退法，、miR-203表达等、FIGO分期表达，图Cox。1)595以行自变量的选择和剔除，设定5剔除结果显示:淋巴结转移=高低表达是卵巢浆液性癌患者预后的独立危险=0.10分期α较高、miR-203FIGO、，α入选0.05。表达因素(、miR-595均P<0.05，表)3。临床病理参数年龄(岁)<50≥50肿瘤直径()cm<2≥2组织学分级低级别高级别淋巴结转移无有血清CA125()U/mL<35≥35分期FIGOⅠ+ⅡⅢ+Ⅳ临床病理参数淋巴结转移分期FIGOmiR-203miR-595表达表达表2卵巢浆液性癌中miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系nmiR-203相对表达量值t/F值PmiR-595相对表达量值t/F值P252023223872223291635103.32±1.623.03±1.523.21±1.593.17±1.563.20±1.643.16±1.592.63±1.433.73±1.753.18±1.603.21±1.552.38±1.546.03±2.130.6130.5430.0850.9330.0600.4762.3030.0260.0610.9526.057<0.0010.28±0.190.30±0.200.30±0.180.28±0.190.31±0.150.20±0.140.38±0.210.20±0.160.30±0.190.27±0.180.32±0.190.19±0.170.3430.7330.3630.7191.7990.0393.2430.0020.5160.6081.9490.048赋值说明转移，否1=1=Ⅲ+Ⅳ1=0=，0=Ⅰ+Ⅱ高表达，0=低表达，否否0=1=表3卵巢浆液性癌预后影响因素的分析结果B0.8550.7931.2920.761SE0.4140.3300.4390.293Waldχ24.2605.7638.6596.743值P0.0390.0160.0030.009RR2.3522.2103.6412.140(RR)95%CI1.044~5.2991.157~4.2231.540~8.6101.205~3.800临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2020Jun;36(6)·507·)24，图(表。0.7度也均大于2.5.2三指标联合应用对预后的预测价值以该三指标各自的阈值为诊断阈值，对各样本作阴性或阳性判断若三指标均为一致阳性或阴性时作出样本的阳或阴性诊断，有一个指标不一致时则对其进行复测，复测未改变时即认可两指标如此计算得:血清相同的诊断结果，同时与临床医师会商联合检测诊断的灵敏度癌组织中CA125、这说明三和特异度分别为指标联合应用较之于各指标单独应用，可使对卵巢浆液性癌的预后预测效能得到明显的提升(表miR-203、miR-59513/1527/300.8670.900)和。。。(())4。表4miR-203、miR-595对卵巢浆液性癌诊断的ROC结果特异度理论阈值灵敏度AUC指标35.0kU/L2.700.280.7350.7050.8250.7860.755()27/300.86713/15以上各自阈值0.900()0.724CA125miR-203miR-595CA125+miR-203+miR-5950.8200.7920.745-3讨论图1Kaplan-Meier曲线分析miR-203、miR-595表达与患者预后的关系:A.miR-203B.miR-595;30例)为阳性样本，生存病例(2.5联合检测miR-203、miR-595对卵巢浆液性癌的预后预测价值2.5.1各指标单独应用对预后的预测价值以本组中死亡例)为阴性样本，再病例(将卵巢浆液性癌组织中以及当前临床上个组段，等共已用的血清3分析结果显示:三指标均建立诊断分析模型具有一定的卵巢浆液性癌预后预测价值，曲线下面积在其理论阈值点处，敏感度和特异(个指标水平划分成经miR-203、miR-595)均在CA125以上7~9ROCROCROC。15AUC0.74。]62214。。。约90%万，严重威胁女性生命健康[卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，但病死率居妇科肿瘤的首位卵巢癌为卵巢浆液性癌，每年新发病例数约万，死亡病例数约目前的临床治疗方案可显著提高患者的生存质量，但晚期患者的年总生存率较此外，卵巢浆液性癌发病隐匿，临床上亟需寻找灵敏度低高的诊断及预后预测的生物标志物，以提高患者的早期诊断卵巢癌近年来，在肿瘤诊断及治疗方面率取得了较大进展，但卵巢癌患者的年存活率仍较低，缺乏有效的早期筛查敏感性和特异性均较高的生物标志物是重要原因之一是较为理想的卵巢癌生物标志物改善患者预后、近年研究发现，miR。。55CA125晚期患者中，其血清水平升高明显，但近者的血清高，且其血清水平易受多种生理(如妊娠等)是临床应用最广泛的血清肿瘤标志物，在卵巢癌早期卵巢癌患水平无变化，对早期患者的诊断灵敏度不病理(如子宫、CA12550%。图2miR-203、miR-595、CA125对卵巢浆液性癌预后预测的ROC曲线:A.miR-203;B.miR-595;C.CA125·607·临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2020Jun;36(6)内膜异位症等)状态影响，导致其临床应用受到限制[]7。9-]8]认为miR-203miR-203miR-203miR-203研究证实，子宫颈癌、。表达增加，提示与卵巢癌子宫内膜癌等、本实验结果显示，与癌旁正常组织相异常高表达可妇科肿瘤关系密切[比，癌组织中能参与了卵巢浆液性癌的发生，发挥促癌基因作用。Zhao等[间质转化过程，发挥抑癌基因功能，与本结论相悖，笔者初步分析，这可能是组织样本与细胞株之间的差异所致，后续研究将在细胞水平进一步论证本实验结论;此外，本实验结果发现，癌组织中可抑制卵巢癌细胞的上皮高表达与淋巴结转移miR-203高表达患者的术后FIGOmiR-中位生存时间短，初、高表达可诱发卵巢浆液性癌的发生及恶性高表达是影响患者具有作为卵巢203步证实进展miR-203预后的独立危险因素，以上结果证实，浆液性癌生物标志物的潜能回归模型结果显示，较高、年总生存率低分期相关，miR-203miR-203。Cox5。512111310]]。、miR等[、FIGOmiR-595miR-595]的生物标志物淋巴结转移、是近年研究发现的新]的研究结论一致;但有研究发现，miR-595]相关，且可作为肝硬化[分子，其功能尚未明异常表达与骨髓增生异常综合炎症性肠在卵巢浆液性癌分期确，有研究证实征[下颌前突[、本实验发现病[组织中表达降低，且与组织学分级及不良预后相关，是患者预后的独立危险因素，提示miR-595具有抑癌基因功能，且与卵巢浆液性癌的发生恶性进展及、不良预后关系紧密，可作为卵巢浆液性癌的生物标志物，与高表达可Tian促进胶质细胞瘤的细胞增导致白血病细胞的化疗耐药[、同时具有促癌基因笔殖[作为转录后调控因子，与靶基因间存在者初步分析，多对一的复杂调控网络，且不同肿瘤细胞中，不同基一对多、因的表达丰度存在较大差异，进而导致可能同时具有促癌和抑癌功能，后续研究将深入探究在卵巢浆液性癌中的分子作用机制，以期从分子生物学水平阐述并支持本研究结论对卵巢浆液性癌具有较好的预后预测价值，其灵敏度和特异度均，灵敏度和特在异度显著提升，提示在卵巢浆液性癌的预后判断中联合检测具有较好的临床应用价值抑癌基因功能、CA125、miR-203、miR-595曲线结果显示，以上，联合检测miR-203、miR-595]，提示miR-595miR-595miR-595miR-595miR-595。ROC0.7。]1514miR-203、miR-595CA125、。综上所述，卵巢浆液性癌组织中miR-低表达，两者均是患者不良预后的独立危险因素，具有作高表达，miR-203595为卵巢浆液性癌生物标志物的潜能;检测可能有助于卵巢浆液性癌患者的预后预测miR-203、miR-595。参考文献:[]1ZhangX，ZhangH.DiminishedmiR-613expressionasanovelprognosticbiomarkerforhumanovariancancer.EurRevMed[]JPharmacolSci[]2HuoW，，，20(5，2016，):837-841.ZhaoGYinJetal.LentiviralCRISPR/Cas9vectormediatedmiR-21geneeditinginhibitstheepithelialtomesenchy-):，(maltransitioninovariancancercells.JCancer[]J2017，8157-64.，JiangQZhouY，YangH，etal.AdirectlynegativeinteractionofmiR-203andZEB2modulatestumorstemnessandchemotherapy，7.Oncotarget[]Jresistanceinnasopharyngealcarcinoma(2016，4167288-67301.HeSZhangG，DongH，etal.miR-203facilitatestumorgrowth):，andmetastasisbytargetingfibroblastgrowthfactor2inbreast[]3[]4cancer.OncoTargetsTher[]5TianSZhangM，ChenX，[]J，，2016:，96203-6210.ancancercellstocisplatinbytargetingABCB1.Oncotargetetal.MicroRNA-595sensitizesovari-，[]J(，7):201687091-87099.[]杨洋，孙洁，朱光，等652卵巢癌中.Tiam1]临床病理学意义[J.临床与实验病理学杂志，蛋白过表达的):(，3320179945-949.[]栾梅，梅雪绯，翟光宇，等7.CA125清展，水平对疗效及预后的评估价值[]J.，17，2080-2082.[]张海花，平毅，郝敏8.miR-20320172071):11(动态监测上皮性卵巢癌患者血现代生物医学进靶向调控机制在妇科肿瘤]中的研究进展[J.山西职工医学院学报，2017，27(6):57-60.[]9ZhaoG，GuoY，ChenZ，etal.miR-203functionsasatumorsuppressorbyinhibitingepithelialtomesenchymaltransitionino-variancancer[]10AlkhatabiHA[].JCancerSciTherJ，，McLornanDP，2015(，72):34-43.，KulasekararajAGetal.RPL27AisatargetofmiR-595andmaycontributetothemyelo-dysplasticphenotypethroughribosomaldysgenesis.Oncotar-[]J，2016(，730):get47875-47890.[]谷妍，赵春洋，李琥11.miR-595]清中的表达水平[J.147.口腔生物医学，在生长期下颌前突患者血，):(3140-1422016，7[]12，，FornariFmiR-939FerracinM，miR-595[]JpatientswithHCC[]康颖，路又可，王震凯，等13]的表达及其意义[J.过表达与敲减胃肠病学，[14[15.]孔晓岩，王淑梅白血病细胞株，杂志，201935，]HaoYZhangSCEM/C1():5，SunS462-464.，TrerèD，etal.CirculatingmicroRNAs，，miR-519dandmiR-494(，.PLoSOne，10201510identifycirrhotic):e0141448..MicroRNA-595(，2182016在炎症性肠病中):465-469.MiR-595]细胞周期的作用[J.是否影响甲氨蝶呤对中国临床药理学，etal.MiR-595targetingregulationofSOX7expressionpromotedcellproliferationofhumanglioblastoma[]J.BiomedPharmacother121-126.，802016，:
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无摘要
上皮性卵巢癌组织miR-320a表达对SKOV3细胞增殖和侵袭性影响

生、进展及预后关系密切。本研究分析卵巢上皮性癌组织中RNA（microRNA，miRNA）类型之一，在多种恶性肿瘤组织中表达异常，与肿瘤发细胞中表达，并探讨上调人卵巢癌miR-320a作为微小miR-320aSKOV3在湖北省中医院妇产科收治的例94检测上皮性卵巢癌和正常卵巢组织表达对癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法选取2015-02-02-2018-03-21例正常卵巢组织标本。实时荧光定量42PCRmiR-320a患者的上皮性卵巢癌组织，选取同期中表达。培养miR-320aSKOV3PCRVimentinmiR-320amiR-320amiR-320a细胞并分为模拟组细胞中相对表达量为蛋白表达。结果模拟组、阴性对照组和空白组。实时荧光定量1.00±0.05，差异有统计学意义，t=32.448，P<0.001。上皮性卵巢癌组织中法和克隆形成实验检测细胞增殖力，Transwell卵巢癌组织中和检测细胞中表达，MTT法检测细胞侵袭力，蛋白质印迹法检测细胞中0.51±0.09，低于正常卵E-cadherin、N-cadherin巢组织的分期（t=4.450，P<0.001）、分化程度（t=2.348，P=0.021）和有无淋巴结转移（t=3.728，P<0.001）方面比较，差异有统计学意义。miR-320a相对表达量高于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=223.704，P<模拟组抑0.001。MTT制细胞活性高于其他模拟组细胞克隆数低于阴性对照组和空白组，差异有统模拟组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=计学意义，F=975.124，P<0.001;miR-320a模拟组细胞中蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，124•195，P<0.001;miR-320aE-cadherin值F=152.673，P<0.001;而在上皮性卵巢癌组织中呈低表达，且与肿瘤发生及恶性化进展55.251、62.054，均分别为有关。上调细胞中[关键词]SKOV3卵巢上皮性癌;miR-320a;细胞增殖;细胞侵袭;上皮-组细胞活力均值间差异有统计学意义，F组间=7259.713，P<0.001;miR-320a表达可抑制细胞增殖及细胞侵袭力，其机制可能与抑制上皮间质转化有关。-蛋白相对表达量低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，FN-cadherinP<0.001。结论miR-320a组。克隆形成实验结果显示，miR-320a实验结果显示，3miR-320a表达量在间质转化miR-320amiR-320aVimentinFIGO和2中华肿瘤防治杂志，2019，26（14）:1026-1030ExpressionofmiR-320ainepithelialovariancanceranditseffectonproliferationandinvasivenessofSKOV3cellsYUJun1，LIXiao-lan2，ZHANGQing-dong31.DepartmentofObstetricsandGynecology，HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine，TraditionalChineseMedicineHospitalofHubei，Wuhan430061，P.R.China2.DepartmentofObstetricsandGynecology，SecondPeopleHospitalofYichang，Yichang443000，P.R.China3.DepartmentofObstetricsandGynecology，HuangshiCentralHospital，AffiliatedHospitalofHubeiPolytechnicUniversity，EdongHealthcareGroup，Huangshi435000，P.R.China[ABSTRACT]OBJECTIVEmiR-320aisoneofthemiRNAtypes.Previousstudieshaveshownthatitisabnormallyexpressedinmanymalignanttumortissues，andiscloselyrelatedtotumorigenesis，progressionandprognosis.ThepurposeofthisstudywastoanalyzetheexpressionofmiR-320ainepithelialovariancancer，andtoexploretheeffectofup-regulate湖北省自然科学基金（2015CFB574）[基金项目][第一作者简介]Tel:86-27-88929379E-mail:3085149778@qq.com[通讯作者简介]Tel:86-27-88929379E-mail:zhangqingdongpp@163.com张青冬，女，湖北黃万方数据余俊，女，湖北武汉人，硕士，副主任医师，主要从事妇科内分泌临床和基础研究工作。石人，副主任医师，主要从事妇科肿瘤临床和基础研究工作。中华肿瘤防治杂志2019年7月第26卷第14期CHINJCANCERPREVTREAT，July2019，Vol.26No.14·7201·theexpressionofmiR-320aonproliferationandinvasivenessofhumanovariancancerSKOV3cells.METHODSAtotalof94casesofpatientswithepithelialovariancancerunderwentsurgeryinHubeiUniversityofTraditionalChineseMedi-cinewereselectedfromFebruary2015toMarch2018.Inthesameperiod，42casesofnormalovariantissuespecimenswereselected.TheexpressionsofmiR-320ainepithelialovariancancerandnormalovariantissuesweredetectedbyreal-timefluorescentquantitativePCR.SKOV3cellswereculturedanddividedintomiR-320amimicgroup，negativecontrolgroupandblankgroup.TheexpressionofmiR-320aincellswasdetectedbyreal-timefluorescentquantitativePCR.CellproliferationwasdetectedbyMTTassayandcolonyformationassay.CellinvasivenesswasdetectedbyusingTranswellassay.TheexpressionsofE-cadherin，N-cadherinandVimentinproteinsweredetectedbyWesternblot.RESULTSTherelativeexpressionlevelofmiR-320awas0.51±0.09inovariancancertissues，whichwaslowerthanthatinnormalovari-antissues，whichwas1.00±0.05，thedifferencewasstatisticallysignificant（t=32.448，P<0.001）.ComparisonontheexpressionlevelsofmiR-320ainepithelialovariancancertissuesinFIGOstage（t=4.450，P<0.001），degreeofdifferenti-ation（t=2•348，P=0.021）andlymphnodemetastasis（t=3.728，P<0.001），thedifferenceswerestatisticallysignifi-cant.TherelativeexpressionlevelofmiR-320ainmiR-320amimicgroupwashigherthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=223.704，P<0.001）.TheresultsofMTTassayshowedthatthedifferencesofcellviabilityamongthethreegroupswerestatisticallysignificant（Fgroup=7259.713，P<0.001）.ThecellviabilityinthemiR-320amimicgroupwashigherthanintheothertwogroups.TheresultsofcolonyformationassayshowedthatthenumberofcellclonesinmiR-320amimicgroupwaslowerthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=975.124，P<0.001）.ThenumberofinvasivecellsinmiR-320amimicgroupwaslowerthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=124.195，P<0.001）.TherelativeexpressionlevelofE-cadherinproteininmiR-320amimicgroupwashigherthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=152.673，P<0.001），whiletherelativeexpressionlevelsofN-cadherinandVimentinproteinswerelowerthanthoseinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferenceswerestatisticallysignificant（Fvalueswere55.251and62.054，P<0.001）.CONCLUSIONSmiR-320aislowlyexpressedinepithelialovariancancertissues，andisrelatedtotumorigenesisandmalignantprogression.Up-regu-lationexpressionofmiR-320ainSKOV3cellscouldinhibitcellproliferationandcellinvasion，anditsmechanismmayberelatedtoinhibitionofepithelial-mesenchymaltransition[KEYWORDS]epithelialovariancancer;miR-320a;cellproliferation;cellinvasion;epithelial-mesenchymaltransitionChinJCancerPrevTreat，2019，26（14）:1026-1030[中图分类号]R737.31[文献标识码]A[文章编号]1673-5269（2019）14-1026-05资料。材料与方法1标本来源1.15上皮性卵巢癌作为女性生殖系统常见的恶性肿瘤，近年来，发病率呈升高趋势且出现年轻化[1]。由于早期症状不典型，多数患者临床确诊时已出现转移或形成腹水，致死率位居生殖系统恶性肿瘤首位[2-3]。尽管现有诊疗技术不断改进，但由于易出现复发转移及化疗耐药，患者年生存率仍处于较低水平[4]。因此，积极探讨卵巢癌发生、进展相关分子机制，对早期诊疗及改善患者预后具有重要意义。微小RNA（microRNA，miRNA）作为广泛存在于生物体内的含有18~RNA，在与相应的靶基因结合后通22过调控翻译或降解而在多种生理、病理过程中类型之一，发挥重要作用[5]。miR-320a在多种恶性肿瘤组织中表达异常，与肿瘤发生、进展及预后关系密切[6]。但在卵巢癌中的作用鲜有报道。本研究分析了上皮性卵巢癌组织中表达，探讨其与临床指标间的关系，并对卵miR-320a模拟物，观察其对细胞增巢癌殖和侵袭力的影响，以期为卵巢癌机制研究提供参考转染万方数据个碱基的短链miR-320amiR-320amiRNASKOV3mRNA作为1694526选取34~772015-02-02-2018-03-21岁。浆液性癌例，透明细胞癌科收治的上皮性卵巢癌患者疗治疗，术后病理确诊。患者年龄龄（53.8±10.7）岁，中位年龄黏液性癌例，子宫内膜样癌根据国际妇产科联盟（FIGO）2014例，Ⅳ27例。淋巴结转移湖北省中医院妇产例，术前均未接受放化岁，平均年例，例。期例。低分化例。68选取同期因卵巢上皮性良性囊肿行手术治疗的正常卵岁，平均年龄巢组织标本33~79岁。术中留取肿瘤原发（55.1±11.8）岁，中位年龄灶组织和正常卵巢组织，快速置于液氮中，-70℃保存。本研究通过医院伦理委员会批准（伦理编号:FCK201410230068），所有研究对象均知情同意。3年分期标准，Ⅰ期例，Ⅲ46例，高分化例，Ⅱ期例，中分化例。患者年龄期18204265369323·8201·余俊，等上皮性卵巢癌组织miR-320a表达对SKOV3细胞增殖和侵袭性影响主要试剂和设备RNARoche法）和1.2总转染试剂购自美国提取试剂（TrizolHyclone公司，miR-320aInvitrogen公司，miR-320aLipofectamineTM公司，逆转录和扩2000增试剂盒购自瑞士和内参引物由上海英骏生物技术有限公司设计合成，人卵巢癌细胞购自中科院上海生科院细胞资源中心，SKOV3改良杜氏伊格尔培养基（Dulbecco'smodifiedeaglemedium，DMEM）培养基、胰蛋白酶和胎牛血清购自模拟物（miR-320amim-美国ics）和阴性对照序列由上海吉玛制药技术有限公司设计合成，四唑盐（methylthiazolyltetrazolim，MTT）和二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）购自美国公司，基Sigma钙黏蛋白（E-cadher-质胶购自美国钙黏蛋白（N-cadherin）多克隆抗体均购自美国in）和公司、兔抗人波形蛋白（Vimentin）多克隆抗SantaCruz体购自美国公司，实时荧光定量聚合酶链式反Abcam应（polymerasechainreaction，PCR）仪购自美国公司。公司，凝胶电泳分析系统购自美国检测公司，Transwell公司，兔抗人小室购自美国Bio-RadGenesisCostar表达N-BDE-1.3miR-320aPCR取卵巢癌和正常卵巢组织，切碎并研磨，用总提取试剂提取组织中总RNA，分光光度计对其浓RNA度和纯度进行检测。分别按照逆转录和扩增试剂盒说上游引物序列明进行反转录和为5'-AAAAGCTGGGTTGAGAGG-3'，下游为扩增。miR-320aPCR5'-GTGCTCGCTTCGGCAGCACATATAC-3'，ACATGTACAGTCCATGGATG-3';U6列为下游为TG-3'。每个样品设个复孔。95℃6退火30s，55℃30s，73℃95℃次。2-ΔΔCt法计算5'-AAAAATATGGAACGCTTCACGAATT-3min，30s，循环相对表达量。预变性延伸miR-320a变性365'-A-上游引物序细胞培养和分组1.4将10%5%CO2细胞置于含体积分数SKOV3培养基中，37℃、体积分数胎牛血清的培养。待DMEM细胞融合度>70%，胰酶消化，传代培养。取对数生长期细胞，按转染试剂盒说明进行分组转染:miR-320a模拟组转染5'-AAAAGCU-GGGUUGAGAGGGCGA-3'，阴性对照组转染阴性对照序列为5'-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3'，空白组不作任何处理。各组处理后继续于培养箱中培养。的模拟序列为miR-320a表达实时荧光定量检测PCR细胞，胰酶消化，加入细48h1.5miR-320a取组转染后培养3胞裂解液，其余步骤同上。1.6细胞增殖活力取细胞，胰酶消化，接种于5×103个/孔，每组设万方数据MTT6为法检测96孔板，细胞密度调整培个复孔，37℃、5%CO212、24、48、72养。分别在培养20μL5mg/mL150μLDMSO，用酶标仪在光度MTT的和96h液，培养时，向各孔加入2h，各孔加入波长处对各孔吸1.7490nm值检测，评价细胞增殖活力。A细胞增殖能力克隆形成实验组细胞转染后继续培养，待融合度在3时，胰酶消化，1000r/min完全培养基制备细胞悬液，取于离心35mm多聚甲醛固定，0.1%塑料培养皿中，37℃、5%CO2结晶紫染色，PBS4%用倒置显微镜观察，计数克隆形成数，以的聚团作为80%左右10min（r=13cm），用1×103个细胞均匀平铺14d。次，个细胞培养冲洗3>50个克隆。1细胞侵袭力法检测348hMatrigelTranswellTranswell基质胶用预冷的无血清培养液稀释，小室上室，过夜风干备用。取组细胞，消化，1000r/min1.8将平铺于转染后培养10min（r=13cm），取细胞沉淀，用无血清培养液重悬细胞，密度调整为加入小室上室，胎牛血清的培养液加入小室下室，将结晶紫染37℃、5%CO2色，并将散落细胞去除，显微镜下随机取周边上、下、左、右及中心位置1×105个/mL，取含20%个视野计数穿膜细胞数。1d。甲醛固定，0.1%600μL200μL培养离心5蛋白表达检测1.9取350μg组转染后培养总蛋白，行细胞，裂解液裂解，提取48h总蛋白并检测蛋白浓度。取聚SDS-丙烯酰胺凝胶电泳，电转至聚偏氟乙烯膜，室温下脱脂奶粉封闭E-cadherin（1∶500）、Vimentin（1∶800）多克隆抗体，N-cadherin（1∶1200）和1∶2000），室温孵育4℃60min，显影，拍照，用计算各蛋白电泳条带相对分子质量。过夜孵育，加入二抗（稀释比例60min，加入一抗兔抗人QuantityOne4.62统计学方法1.10采用SPSS21.0对数据进行统计学分析。通过法对计量资料进行正态性分布检验，均表示。通过检验比较均数之间差异，其余比较采用单检验，不同时点细胞增殖数据Shaopiro-Wilk符合正态分布。计量资料结果采用独立样本因素方差分析和采用两因素方差分析。检验水准α=0.05（双侧）。LSD-tx-±st结果2上皮性卵巢癌和正常卵巢组织表达2.1卵巢癌组织中miR-320a相对表达量为miR-320a0.51±1.00±0.05，差异有统计学0•09，正常卵巢组织则为意义，t=32.448，P<0.001。2.2表表达量在1分期（t=4.450，P<0.001）、分化程度（t=示，上皮性卵巢癌组织中表达与临床参数关系miR-320amiR-320a癌组织FIGO中华肿瘤防治杂志2019年7月第26卷第14期CHINJCANCERPREVTREAT，July2019，Vol.26No.14·9201·2•348，P=0.021）和有无淋巴结转移（t=3.728，P<0.001）方面比较，差异有统计学意义。性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=975.124，P<0.001。例上皮性卵巢癌组织中表达miR-320a）与临床参数关系（nmiR-320ax-±s表达量2.5SKOV3细胞侵袭力1图示，miR-320a模拟组、阴性对照组和空白组侵袭细胞数分别为（70.73±4.22）、（128.06±6.75）和（121.57±8.92）个，模拟组低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=124.195，P<0.001。表194指标年龄（岁）≥55<55组织学类型浆液性癌其他肿瘤分布单侧卵巢双侧卵巢肿瘤直径（cm）≥10<10FIGO分期（期）Ⅰ~ⅡⅢ~Ⅳ分化程度低分化中高分化淋巴结转移是否腹腔积液有无值t值P1.8970.0610.5290.5981.4450.1521.6130.1104.450<0.0012.3480.0213.728<0.0011.3230.189563869256133435145496826326258360.48±0.090.52±0.090.50±0.090.51±0.100.50±0.090.53±0.100.52±0.090.49±0.100.55±0.090.47±0.080.49±0.090.54±0.100.46±0.070.53±0.100.50±0.090.52±0.10表达miR-320amiR-320a2.3SKOV3相对表达量分别为细胞模拟组、阴性对照组和空白组细胞中2.08±0.06、1.04±0.111.02±0.10，模拟组高于阴性对照组和空白组，差miR-320a和异有统计学意义，F=223.704，P<0.001。2.4SKOV3示，3细胞增殖能力组细胞细胞活力均值间差异有统计学意义，F组间=7259.713，P<0.001。5个时间点间的差异也有统计学意义，F时间=1663.747，P<0.001;而且处理药物与时间因素间存在协同作用，F组间时间=模拟组抑制细胞活性高28.302，P<0.001;miR-320a于其他表2×组。2表组别组23SKOV3细胞不同时点增殖活力均值比较（）x-±s12h24h48h72h96hmiR-320a模拟组阴性对照组空白组0.15±0.050.33±0.040.40±0.080.49±0.080.64±0.040.17±0.030.47±0.060.60±0.050.70±0.040.92±0.060.13±0.040.42±0.050.63±0.040.68±0.060.89±0.03克隆形成实验结果显示，miR-320a模拟组、阴性对照组和空白组细胞克隆数分别为（119.40±5.33）、（283.93±9.60）和（292.17±7.41）个，模拟组低于阴万方数据注:A.miR-320a模拟组;B.阴性对照组;C.空白组法检测组细胞侵袭力（结晶紫图1Transwell3）×200细胞蛋白表达示，miR-320a22.6SKOV3和图模拟组细胞中表3E-cad-蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白组，F=蛋白相值分别为herin152.673，P<0.001;N-cadherin对表达量低于阴性对照组和空白组，F55•25162.054，均P<0.001。Vimentin和和讨论3上皮性卵巢癌约占卵巢癌的左右，早期诊断率低，病程进展快，极易发生转移，且复发及耐药发生率高，尽管临床诊治水平不断进步，但患者总体预后依90%·0301·余俊，等上皮性卵巢癌组织miR-320a表达对SKOV3细胞增殖和侵袭性影响<40%年生存率然不佳，5[7]。研究表明，侵袭转移是导致上皮性卵巢癌患者预后差的主要因素[8]。miR-作为机体内广泛存在且在病理生理过程中发挥重NA要作用的短小RNA，可作为癌基因或抑癌基因而参与多种恶性肿瘤发生、进展过程，且与肿瘤侵袭、转移和预后密切相关[9]。微阵列分析结果发现，miRNA在上皮性卵巢癌进展中发挥至关重要的作用，可作为其新的治疗或诊断生物标志物的靶标[10]。表细胞3SKOV3和E-cadherin蛋白表达（Vimentin）x-±s、N-cadherin组别E-cadherin蛋白N-cadherin蛋白Vimentin蛋白模拟组miR-320a阴性对照组空白组注:avs0.82±0.07ab0.37±0.10ab0.44±0.04ab0.34±0.040.77±0.060.75±0.060.37±0.06空白组，P<0.05;bvs0.71±0.040.78±0.07阴性对照组，P<0.05细胞中组，说明上调SKOV3制细胞增殖能力，提示能而参与了细胞增殖过程。有研究指出，miR-320amiR-320amiR-320a表达可有效抑可能发挥抑癌基因功参与了肝癌细胞侵袭和转移，对肝癌具有抗转移作用[16]。本研究结果显示，模拟组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白表达可抑制细细胞中SKOV3miR-320amiR-320a组，说明上调胞侵袭力。上皮间质转化过程参与了上皮性卵巢癌发生、进-展过程，且与细胞恶性增殖及侵袭转移密切相关[17]。是上皮细胞标志物，与减少细胞间黏附力E-cadherin密切相关，而则是间质细胞Vimentin标志物，其表达升高预示发生了上皮间质转化，且可-作为肿瘤转移的导火索[18-19]。本研究结果显示，蛋白相对表达量模拟组细胞中N-cadherin和miR-320a高于阴性对照组和空白组，而蛋白相对表达量则降低，说明上调E-cadherinN-cadherin和SKOV3表达可抑制上皮间质转化，提示-间质转化过程而参与了miR-320a可能通过调控上皮-细胞侵袭转移过程。Vimentin细胞中miR-320aSKOV3图2蛋白质印迹法检测和及N-cadherinVimentin细胞蛋白表达SKOV3E-cadherin作为分期FIGOmiR-320miR-320amiR-320amiR-320a家族成员，在机体多个组miR-320a织器官中存在。近年来发现，其在前列腺癌[11]、乳腺癌[12]和结直肠癌[13]等多种恶性肿瘤组织中表达异常，且与肿瘤细胞侵袭转移关系密切[14]。本研究结果显示，上皮性卵巢癌组织中相对表达量低于正常卵巢组织，说明在上皮性卵巢癌组织中呈低表达，可能作为抑癌基因参与了该肿瘤发生过程。在与病理指标间关系分析发现，在Ⅲ~Ⅳ呈低表期、低分化和发生淋巴结转移组织中低表达可能与上皮性卵巢癌恶性化达，说明特性有关，提示可能发挥抑癌基因功能，而在上皮性卵巢癌发生及恶性化进展中发挥重要作用。模拟物的方式特异性表达，结果显示，细胞中相对表达量高于阴模拟组细胞中miR-320a性对照组和空白组，提示细模拟组异胞中位过表达抑制了非小细胞肺癌细胞的增殖[15]。本研究实验结果显示，miR-320a和值低于阴性对照组和空白组，且A96h模拟组细胞克隆数低于阴性对照组和空白万方数据SKOV3表达升高。有研究指出，miR-320a本研究采用转染模拟组细胞时吸光度24、48、72miR-320amiR-320amiR-320amiR-320amiR-320amiR-320amiR-320aSKOV3提高miR-320a综上所述，miR-320a在上皮性卵巢癌组织中呈低表达，且与肿瘤发生及恶性化进展有关，上调细胞中其机制可能与抑制上皮程尚需进一步开展相关研究以明确。SKOV3表达可抑制细胞增殖及细胞侵袭力，间质转化有关，但具体作用过-miR-320a参考文献[1]JessmonP，BoulangerT，ZhouW，etal.Epidemiologyandtreat-mentpatternsofepithelialovariancancer[J].ExpertRevAnti-cancerTher，2017，17（5）:427-437.[2]WeiW，LiN，SunY，etal.Clinicaloutcomeandprognosticfac-torsofpatientswithearly-stageepithelialovariancancer[J].Oncotarget，2017，8（14）:23862-23870.[3]YangQ，YangY，ZhouN，etal.Epigeneticsinovariancancer:premise，properties，andperspectives[J].MolCancer，2018，17[4]（1）:109-115.孙婷，王伟，何向蕾及临床意义[J].卵巢癌中和的表达水平.SGK3医学研究杂志，2018，47（9）:81-86.miR-144-3p[5]ZouL，XiongX，WangK，etal.MicroRNAsintheintestine:roleinrenewal，homeostasis，andinflammation[J].CurrMolMed，[6]2018，18（3）:190-198.洪善超，殷皓，王婷婷，等及其功能[J].微小.RNA-320a在前列腺癌中的表达中华实验外科杂志，2018，35（5）:944-947.[7]VetterMH，HaysJL.Useoftargetedtherapeuticsinepithelialovariancancer:Areviewofcurrentliteratureandfuturedirec-tions[J].ClinTher，2018，40（3）:361-371.[8]vanDamPA，CoelhoA，RolfoC.Istherearoleforurokinase-typeplasminogenactivatorinhibitorsasmaintenancetherapyin?[J].EurJSurgOncol，2017，43patientswithovariancancer（2）:252-257.（下转第页）1035中华肿瘤防治杂志2019年7月第26卷第14期CHINJCANCERPREVTREAT，July2019，Vol.26No.14·5301·Survivin并减少巨孔的形成，从而抑制细胞凋亡。凋亡抑制基仅在肿瘤和胚胎组织表达，且与肿瘤细胞的因增殖、转移密切相关。本研究为了探讨蛋白如何技术分析抑制细胞凋亡，采用蛋白质印迹法和和组细胞表达水平低于蛋白在宫颈癌细胞蛋白表达水平，结果发现，HeLa-shTAZXIAP、Bcl-2、SurvivinSurvivin中XIAP、Bcl-2HeLa-shTAZ组细胞的HeLa-NC蛋白和mRNAq-PCR组和TAZ组，XIAP、Bcl-2、Survivin上调，其机制仍需进一步深入研究。TAZTAZ综上所述，本研究表明在宫颈癌中高表达，可促进宫颈癌细胞的增殖并抑制细胞凋亡，并可能成为某些类型宫颈癌的潜在治疗靶点。基于以往文献及抑制细胞凋亡的机制可能与本实验的研究结果，TAZ蛋白的水平有关，但是仍上调需深入研究其具体作用机制。XIAP、Bcl-2、SurvivinHeLa-NC中被参考文献[1]Stevanovi■S，DraperLM，LanghanMM，etal.Completeregres-sionofmetastaticcervicalcanceraftertreatmentwithhumanpapillomavirus-targetedtumor-infiltratingTcells[J].JClinOn-[2]col，2016，33（14）:1543-1550.王小霞，康佳丽，朱莉达及其与临床病理特征的关系[J].（10）:642-647..宫颈癌患者外周血和组织表中华肿瘤防治杂志，2016，23IL-22Th22与[3]SaavedraKP，BrebiPM，RoaJCS.Epigeneticalterationsinpre-neoplasticandneoplasticlesionsofthecervix[J].ClinEpigenet-tumorigenicroleofTAZinhumannon-smallcelllungcancer[J].[6][7]结直肠癌中.ClinCancerRes，2014，20（17）:4660-4672.吴健，范钦和临床与实验病理学杂志，2014，30（12）:1346-1349.王静查指南及筛查中存在的问题[J].指南---2014.β-catenin标准方案TAZ和..的表达及意义[J].年美国癌症学会最新宫颈癌筛中国全科医学，2014，17（27）:3163-3164.[8]MiW，LinQ，ChildressC，etal.GeranylgeranylationsignalstotheHippopathwayforbreastcancercellproliferationandmigra-tion[J].Oncogene，2015，34（24）:3095-3106.[9]XiaoH，JiangN，ZhouB，etal.TAZregulatescellproliferationandepithelial-mesenchymaltransitionofhumanhepatocellular[10][11][12]及TAZcarcinoma.[J].CancerSci，2015，106（2）:151-159.杨海波，黄定强，姜粱在头颈鳞癌中的表达及.YAP、LPA其与临床病理特征的关系[J].实用医学杂志，2018，34（1）:39-43.贾楠，张迎龙，刘涛，等在骨肉瘤组织中的表达及和临床意义[J].陈鹏，赵景岚，鲁瑞珍，等表达变化及意义[J].现代肿瘤医学，2015，23（22）:3330-3333.山东医药，2018，58（21）:61-63.非小细胞肺癌组织中.TAZ、YAP.YAP蛋白TAZ[13]SorrentinoG，RuggeriN，SpecchiaV，etal.MetaboliccontrolofYAPandTAZbythemevalonatepathway.[J].NatCellBiol，2014，16（4）:357-366.[14]ChenM，ZhangY，ZhengPS.Tafazzin（TAZ）promotesthetu-morigenicityofcervicalcancercellsandinhibitsapoptosis[J/CD].PLoSOne，2017，12（5）:e0177171.[15]PathakS，MengWJ，ZhangH，etal.TafazzinproteinexpressionisassociatedwithtumorigenesisandradiationresponseinrectalCancer:Astudyofswedishclinicaltrialonpreoperativeradio-ics，2012，4（1）:13.[16][4]KirwinSM，ManolakosA，BarnettSS，etal.Tafazzinsplicevari-antsandmutationsinBarthsyndrome[J].MolGenetMetab，2014，111（1）:26-32.[5]NoguchiS，SaitoA，HorieM，etal.Anintegrativeanalysisofthetherapy[J/CD].PLoSOne，2014，9（5）:e98317.唐薇薇，郑洪，厉国慧，等人抑制细胞凋亡及周期的影响[J].连锁凋亡抑制蛋白基因对X山东医药，2016，56（33）:22-24..siRNAHeLa收稿日期:2019-01-28修回日期:2019-06-06（编辑:杨靖）（上接第[9]DetassisS，GrassoM，DelVescovoV，etal.microRNAsmake[15]WangJ，ShiC，WangJ，etal.MicroRNA-320aisdownregulateds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肝移植术后人类细小病毒B19感染的二代测序筛查及其相关危险因素分析

目的总结肝移植术后人类细小病毒（HPV）B19感染的筛查方法并分析相关危险因素。方法回顾性分析86例受者的临床资料。根据二代测序（NGS）结果分为HPVB19感染组和对照组，分析HPVB19感染患者的临床特点、治疗方案及预后，采用单因素和多因素Logistic回归向前LR逐步法分析HPVB19感染的危险因素。结果86例受者中9例受者肝移植术后2周左右出现不明原因发热伴进行性贫血，NGS检测提示HPVB19阳性，诊断为HPVB19感染引起的纯红细胞再生障碍性贫血（PRCA）。所有患者给予静脉注射用免疫球蛋白（IVIG）治疗及免疫抑制方案调整后，血红蛋白水平明显回升。多因素分析结果显示，患者术后7d外周血清球蛋白水平低[比值比（OR）=0.749，P=0.040]、年轻患者（OR=0.937，P=0.038）是肝移植术后HPVB19感染的独立危险因素。结论对于肝移植术后早期出现不明原因的血红蛋白水平下降的相对年轻患者，需考虑HPVB19感染。NGS筛查是早期诊断HPVB19感染的有效方法。患者术后7d外周血清球蛋白水平低和年龄（年轻患者）可能是其发生的独立危险因素。[关键词]肝移植;人类细小病毒B19;纯红细胞再生障碍性贫血;二代测序;危险因素;感染;免疫排斥反应;心脏死亡器官捐献;静脉注射用免疫球蛋白;人类疱疹病毒[中图分类号]R617，R619.3[文献标志码]A[文章编号]1674-7445（2019）06-0011-06NextgenerationsequencingscreeningforhumanparvovirusB19infectionafterlivertransplantationandtheanalysisofrelatedriskfactorsChenTuo*,LiRuidong,YingYue,TaoYifeng,ShenConghuan,JinYanting,WangZhengxin.*DepartmentofGeneralSurgery,LiverTransplantationCenter,HuashanHospitalAffiliatedtoFudanUniversity,Shanghai200040,ChinaCorrespondingauthor:WangZhengxin,Email:wangzhengxin@huashan.org.cn[Abstract]ObjectiveTosummarizethescreeningmethodsforhumanparvovirus(HPV)B19infectionafterlivertransplantationandanalyzetherelatedriskfactors.MethodsClinicaldataof86recipientswereretrospectivelyanalyzed.Accordingtotheresultsofnextgenerationsequencing(NGS),allrecipientsweredividedintotheHPVB19infectiongroupandcontrolgroup.Clinicalcharacteristics,treatmentregimeandclinicalprognosisofpatientsinfectedwithHPVB19wereanalyzed.TheriskfactorsofHPVB19infectionwereanalyzedusingunivariateandmultivariateLogisticregressionmodelbyforwardLRstepmethod.ResultsNineofthe86recipientsdevelopedfeverandprogressiveanemiawithunexplainedreasonsatapproximately2weeksafterlivertransplantation.NGSdetectiondemonstratedthatHPVB19waspositiveandtheywerediagnosedwithpureredcellaplasia(PRCA)causedbyHPVB19infection.Afterintravenousimmunoglobulins(IVIG)wasgivenandtheimmunosuppressanttherapywasadjusted,thehemoglobinlevelsinallpatientsDOI:10.3969/j.issn.1674-7445.2019.06.011基金项目:国家自然科学基金面上项目（81873874、81773089）;国家重大科技专项（2017ZX10203205）作者单位:200040上海，复旦大学附属华山医院普外科肝移植中心（陈拓、李瑞东、陶一峰、沈丛欢、金嫣婷、王正昕），感染科（应悦）作者简介:陈拓，男，1994年生，硕士研究生，研究方向为肝胆肿瘤与肝移植的基础和临床研究，Email:zjwzct@163.com通信作者:王正昕，男，1968年生，博士，主任医师，博士研究生导师，研究方向为肝胆肿瘤与肝移植的基础和临床研究，Email:wangzhengxin@huashan.org.cn第10卷第6期2019年11月Vol.10No.6Nov.2019器官移植OrganTransplantation陈拓等.肝移植术后人类细小病毒B19感染的二代测序筛查及其相关危险因素分析·697·weresignificantlyincreased.Theresultsofmultivariateanalysisrevealedthatlowserumglobulinlevelinperipheralbloodatpostoperative7d[oddsratio(OR)=0.749,P=0.040]andyoungage(OR=0.937,P=0.038)weretheindependentriskfactorsofHPVB19infectionafterlivertransplantation.ConclusionsHPVB19infectionshouldbeconsideredinrelativelyyoungpatientswithunexplainedhemoglobindeclineearlyafterlivertransplantation.NGSscreeningisaneffectivemethodforearlydiagnosisofHPVB19infection.Lowserumglobulinlevelinperipheralbloodatpostoperative7dandyoungagemaybeindependentriskfactorsoftheincidenceofHPVB19infection.[Keywords]Livertransplantation;HumanparvovirusB19;Pureredcellaplasia;Nextgenerationsequencing;Riskfactor;Infection;Immunerejection;Donationaftercardiacdeath;Intravenousimmunoglobulins;Humanherpesvirus人类细小病毒（humanparvovirus，HPV）B19中男7例，女2例，年龄（39±10）岁。对照组共为一种单链DNA病毒，已有研究表明HPVB19感染可导致移植受者术后纯红细胞再生障碍性贫血（pureredcellaplasia，PRCA）[1-3]。对于免疫功能正常者，HPVB19感染多无表现或症状轻微且具有自限性，而对于免疫功能不全或免疫抑制的感染者，如器官移植受者，临床表现多为发热伴进行性贫血。由于肝移植术后HPVB19检测并未形成常规，所以相关病例报道并不多。近来随着二代测序（nextgenerationsequencing，NGS）检测手段的临床应用[4-5]，复旦大学附属华山医院普外科肝移植中心在对不明原因发77例受者，其中男56例，女21例，年龄（50±11）岁。1.3二代测序检测收集受者外周血标本（均为出现不明原因发热伴进行性贫血后2周内采集），以1000×g离心10min后，提取上层血清，将0.5mL血清置入1.5mL微量离心管中，固定在涡流混合器上的水平平台上，放入玻璃微珠（1g，0.5mm），以800~1200×g离心30min。抽取0.3mL样品使用TIANAmp微量DNA试剂盒（北京天根生物公司）提取DNA。通过对DNA片段化、末端修复、添加A尾、适配体连接和热伴非溶血性贫血进行筛查时发现HPVB19感染是聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）扩其主要原因，本文结合以往文献报道，对肝移植术后增这些步骤构建DNA文库，再使用Agilent2100对HPVB19感染的临床特点进行了总结，并探讨其相关DNA文库进行质量控制。通过BGISEQ-100平台对危险因素。1资料与方法1.1一般资料质量合格的文库进行测序。得到的测序结果根据每个属的属特异序列数进行排序。筛选排序前5名的病原体属，并取每个属中排名第1的作为最终结果。1.4治疗方案回顾性分析2018年5月至2019年3月本中心施所有受者术后常规使用他克莫司（tacrolimus，行的86例心脏死亡器官捐献（donationaftercardiacFK506）+甲泼尼龙进行免疫抑制治疗。对确诊为death，DCD）肝移植受者的临床资料。其中男63例，HPVB19感染相关的PRCA患者，其核心治疗方女23例，年龄15~72岁，中位年龄49岁。原发病包案为早期应用静脉注射用免疫球蛋白（intravenous括肝脏恶性肿瘤42例，良性终末期肝病44例。所有患者手术顺利，术后均接受常规抗排斥治疗。1.2筛选标准及分组immunoglobulins，IVIG），同时联合其他辅助治疗，具体方案如下[6]:（1）予以大剂量IVIG冲击治疗，400mg/（kg·d），连续应用5~10d;（2）根据患者纳入标准:（1）术后出现明显贫血表现;（2）实免疫功能，调节免疫抑制剂用量;（3）给予吸氧、验室检查提示外周血血红蛋白水平短期内进行性下降;（3）大便隐血试验阴性;（4）NGS提示输血等对症支持治疗。1.5统计学方法HPVB19DNA阳性。排除标准:（1）存在血液系统疾病者;（2）存在失血者;（3）存在药物影响因素者。根据纳入标准和排除标准将受者分为HPVB19感染组（感染组）和对照组。感染组共9例受者，其采用SPSS20.0软件进行统计学分析。非正态分布的计量资料以中位数（全距）表示，比较采用Mann-WhitneyU秩和检验。计数资料以率表示，比较采用连续校正的χ2检验或Fisher确切概率法。采用Logistic回归向前LR逐步法进行多因素分析。第6期·698·P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1临床特点9例HPVB19感染患者术后2周左右出现不同程度发热、自诉头晕、乏力，贫血貌，无皮疹、关节痛;血红蛋白进行性下降，最低血红蛋白水平为50~86g/L;白细胞、血小板水平接近正常;NGS提示HPVB19DNA阳性，部分患者合并其他感染（表1），实验室检查排除其他贫血诱因，确诊为HPVB19感染相关PRCA。2.2治疗过程及预后Logistic回归向前LR逐步法进行多因素分析表明，术后7d外周血清球蛋白水平[比值比（oddsratio，OR）=0.749，P=0.040]、年龄（OR=0.937，P=0.038）是引起肝移植术后HPVB19感染的独立危险因素。3讨论近年来，随着检测技术的发展，肝移植术后HPVB19感染相关PRCA的报道逐渐增多[7-11]。HPVB19属于细小病毒科红细胞病毒属，由Cossart等[12]首次发现，其与多种疾病的临床表现相关[1-2,13-14]。对于肝移植受者而言，HPVB19感染可能源自以下3种在确诊HPVB19感染以前，9例患者术后均接途径:（1）受者来源，受者处于亚临床感染状态，受FK506+甲泼尼龙免疫抑制治疗，予以输血、补充术后免疫功能降低，HPVB19再燃;（2）供者来源，人促红细胞素和铁剂等对症治疗，难以改善患者贫血捐献者处于HPVB19活跃期;（3）血液和（或）血状态。确诊HPVB19感染后，9例患者均接受IVIG液制品来源。HPVB19因其特殊理化性质，常规方法冲击治疗，并调整免疫抑制方案，患者贫血状态显著改善，血红蛋白水平升高至92~122g/L，均康复出院。2.3感染因素分析经Mann-WhitneyU检验、连续校正的χ2检验及Fisher确切概率法检验，提示两组间年龄、术前胆红素水平、术前凝血酶原时间国际标准化比值不能有效去除，潜在污染的血液及血液制品可能被用于肝移植手术[15]。国内报道的肝移植术后HPVB19感染多发生在术后早期，主要表现为进行性严重贫血伴发热;少数患者可有红斑、皮疹、关节炎等表现[16]。本文9例患者，均在术后2周左右出现血红蛋白进行性下降，（prothrombintimeinternationalnormalizedratio，伴不同程度发热，且对症治疗效果不佳。肝移植术后PT-INR）、终末期肝病模型（modelforend-stageHPVB19感染的确诊主要根据骨髓细胞学检查、血liverdisease，MELD）评分、术后7d外周血清球蛋白水平比较，差异有统计学意义（均为P<0.05，表2），上述因素为肝移植术后HPVB19感染的可能危险因素。清学检查及病毒DNA检测结果（扫描二维码可见国内肝移植术后HPVB19感染相关PRCA的临床诊疗特点）[7-11]。对受者而言，由于免疫功能受抑制，体内特异性抗体减少，血清特异性抗体检测难以有效反表1肝移植术后HPVB19感染患者一般情况Table1GeneralsituationofpatientswithHPVB19infectionafterlivertransplantation例序年龄（岁）性别合并感染情况治疗前血常规治疗后血常规HbWBCPLTHbWBCPLT（g/L）（×109/L）（×109/L）（g/L）（×109/L）（×109/L）123456789394618393835514738男男女男男女男男男HHV5型–HHV5型–HHV6B型–HHV5型–HHV5型5086647185546678777322310829259100811872127018946113921161161201109612111212265569144510207108150253224235221111182–表示无;HHV为人类疱疹病毒;Hb为血红蛋白;WBC为白细胞;PLT为血小板第10卷器官移植陈拓等.肝移植术后人类细小病毒B19感染的二代测序筛查及其相关危险因素分析·699·表2肝移植术后受者HPVB19感染的单因素分析Table2UnivariateanalysisofHPVB19infectioninrecipientsafterlivertransplantation变量性别[n(%)]男女年龄[M(R)，岁]术前消化道出血情况[n(%)]有否术前胆红素水平[M(R)，μmol/L]术前血清肌酐水平[M(R)，μmol/L]术前PT-INR[M(R)]术前PT[M(R)，s]术前淋巴细胞绝对值[M(R)，×109/L]MELD评分[M(R)，分]手术时间[n(%)]≥7h<7h术中出血量[n(%)]≥1L<1L术中输血量[n(%)]≥1.5L<1.5L术后7d外周血清球蛋白水平[M(R)，g/L]住院时间[n(%)]≥30d<30d感染组（n=9）对照组（n=77）7（78）2（22）39（10）1（11）8（89）260（379）63（18）2.1（1.4）22（14）1.3（0.5）25（21）2（22）7（78）7（78）2（22）6（67）3（33）22（3）6（67）3（33）56（73）21（27）50（12）3（4）74（96）31（123）64（24）1.3（0.6）15（8）1.0（0.5）11（13）33（43）44（57）57（74）20（26）35（45）42（55）23（5）34（44）43（56）P值1.000a0.003c0.363b0.041c0.849c0.034c0.061c0.076c0.043c0.404a1.000a0.394a0.006c0.353aa使用连续校正的χ2检验;b使用Fisher确切概率法;c使用Mann-WhitneyU秩和检验;PT为凝血酶原时间映HPVB19感染情况，存在假阴性可能[17]。不同于PCR难以检测未知病原体的缺点[18]，NGS可通过高通量测序，相对全面获取病原体信息，有助于术后不参考意义。本研究发现肝移植受者术后7d外周血清球蛋白水平低和年龄是HPVB19感染的独立危险因素。外明原因发热的早期鉴别，对后续抗感染治疗具有重要周血清球蛋白中包含多种抗体，一定程度上可反映机体免疫状态。有研究报道肝移植术后早期外周血清球蛋白水平降低程度与术中失血量相关[19]，因此术中大量失血可导致免疫球蛋白水平下降。另外，肝移植受者术中及术后应用大剂量糖皮质激素，也可造成免疫球蛋白水平下降[20]。此外，年龄与HPVB19感染风险呈负相关。由于HPVB19普遍易感，随着年龄的增长，机体发生获得性免疫进而产生HPVB19IgG的可能性越大，血清抗体阳性率随年龄增大而累积升高，这与国内外相关文献报道相符[21-22]。因此，对扫描二维码可见国内肝移植术后HPVB19感染相关PRCA的临床诊疗特点第6期·700·于移植术后低外周血清球蛋白血症伴不明原因发热的年轻受者，需警惕HPVB19感染风险。HPVB19感染尚无特效抗病毒药物。近来发现，羟基脲、西多福韦、香豆素衍生物及吡莫西特等药物可体外抑制HPVB19活性或阻碍其扩增，具有潜在治疗价值[23-24]。目前主要治疗措施为大剂量IVIG冲击治疗，可能与IVIG中含有特异性IgG抗体可有效中和病毒有关[25]。常用剂量为400mg/（kg·d），持续5~10d，但最佳用药方案尚无标准，我们推测，其用量应与IVIG中特异性抗体滴度有关。研究显示，93%的PRCA患者对IVIG治疗敏感，但约1/3患者平均4.3个月后出现复发[17]。对于复发患者，仍可采用IVIG治疗。另有文献指出将术后PRCA患者的免疫抑制剂FK506调整为环孢素[26]，可促进机体产生中和抗体，增进治疗效果。本研究中，感染患者仍维持FK506为基础的免疫抑制方案，个体化调整剂量并减少糖皮质激素用量，并均予以400mg/（kg·d）IVIG冲击治疗，持续5~7d，患者血红蛋白水平显著升高（表1）。其中，例6患者术后53d血红蛋白再度下降，低至67g/L，再次予以IVIG治疗5d后，血红蛋白水平升高。综上所述，相对年轻的患者在肝移植术后发生不明原因发热伴血红蛋白持续下降，需警惕HPVB19感染风险，应注意术后维持免疫球蛋白水平。NGS有利于早期筛查HPVB19感染。目前治疗方法仍以大剂量IVIG冲击及个体化免疫治疗为主。早期诊断和及时治疗有助于肝移植术后HPVB19感染患者获得良好预后。参考文献:[4]DEURENBERGRH,BATHOORNE,CHLEBOWICZMA,etal.Applicationofnextgenerationsequencinginclinicalmicrobiologyandinfectionprevention[J].JBiotechnol,2017,243:16-24.DOI:10.1016/j.jbiotec.2016.12.022.[5]PARKERJ,CHENJ.Applicationofnextgenerationsequencingforthedetectionofhumanviralpathogensinclinicalspecimens[J].JClinVirol,2017,86:20-26.DOI:10.1016/j.jcv.2016.11.010.[6]李瑞东,王正昕.肝移植术后免疫抑制剂的个体化用药[J/CD].中华临床医师杂志（电子版）,2013,7(1):5-6.DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2013.01.003.LIRD,WANGZX.ofimmunosuppressantsafterlivertransplantation[J/CD].ChinJClin(ElectrEdit),2013,7(1):5-6.DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2013.01.003.Individualizeduse[7]ORAMASDM,SETTYS,YELDANDIV,etal.AcasereportofparvovirusB19infectioninarenalallograft[J].IntJSurgPathol,2017,25(7):648-651.DOI:10.1177/1066896917712452.[8]ZHANGM,ZHONGX,ZHANGW,etal.HumanparvovirusB19infectioninducedpureredcellaplasiainlivertransplantrecipients[J].IntJClinPractSuppl,2015(183):29-34.DOI:10.1111/ijcp.12664.[9]任庆旗,鞠卫强,王东平,等.肝移植后人细小病毒B19感染导致单纯红细胞再生障碍性贫血一例[J].中华器官移植杂志,2016,37(3):144-149.DOI:10.3760/cma.j.issn.0254-1785.2016.03.004.RENQQ,JUWQ,WANGDP,etal.DiagnosisandtreatmentofpureredcellaplasiacausedbyhumanparvovirusB19afterreportofonecaseandliteraturereview[J].ChinJOrganTransplant,2016,37(3):144-149.DOI:10.3760/cma.j.issn.0254-1785.2016.03.004.transplantation:liver[1]TSCHÖPEC,ELSANHOURYA,SCHLIEKERS,etal.ImmunosuppressionininflammatorycardiomyopathyandparvovirusB19persistence[J].EurJHeartFail,2019,DOI:10.1002/ejhf.1560[Epubaheadofprint].[2]SHINH,PARKS,LEEGW,etal.ParvovirusB19infectionpresentingwithneutropeniaandthrombocytopenia:threecasereports[J].Medicine(Baltimore),2019,98(35):e16993.DOI:10.1097/MD.0000000000016993.[3]EIDAJ,ARDURAMI,ASTInfectiousDiseasesCommunityofPractice.HumanparvovirusB19insolidorgantransplantation:guidelinesfromtheAmericanSocietyofTransplantationInfectiousDiseasesCommunityofPractice[J].ClinTransplant,2019,33(9):e135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