卵巢浆液性癌中miR-203和miR-595表达与预后的关系
【摘要】 目的探讨卵巢浆液性癌组织中达与患者临床病理特征性癌预后的预测价值织样本(癌组织和癌旁正常组织)，应用织样本中表预后的关系，并分析其对卵巢浆液、。方法收集卵巢浆液性癌的手术组技术检测组的表达;分析癌组织中表达与患者预后的关系;miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系;miR-203、生存曲miR-595线分析回归模型分析卵巢浆液性癌的预后影响因素;受试者工作特征曲线分析表达对卵巢浆液性癌预后的预测。结果与癌旁正常组织相比，卵巢浆液性癌组织中价值P<均<分期)，表达与淋巴结转移表达与组织学分级表达降低(分期相关(miR-203、miR-595miR-203、miR-595表达增加(Kaplan-Meier。miR-203P<0.05miR-595miR-203CoxmiR-595均)P<0.05。Kaplan-Meier0.05));0.05相关(P、FIGO、FIGO淋巴结转移、生存曲线结果显示，miR-均较高、P<2030.05高表达组)分期。Cox低表达组患者的预后较差(、miR-595回归模型分析结果显示:淋巴结转移、miR-203GO预后的独立危险因素(结果表明，后的价值，异度分别为P。高表达、miR-595)均FI-低表达是卵巢浆液性癌受试者工作特征曲线<0.05有较好的预测卵巢浆液性癌预特、0.990、0.867。结论卵巢浆液性癌组织中低表达，且均与较差临床病理特可能是卵巢浆液性癌患联合检测的灵敏度CA125、miR-203、miR-595miR-203、miR-595miR-203、miR-595miR-595高表达，不良预后相关;、miR-203征者预后预测的潜在指标关键词:卵巢肿瘤;卵巢浆液性癌;中图分类号:文章编号:R737.31。(1001-73992020miR-203文献标志码:A)06-0703-04:doi10.13315/j.cnki.cjcep.2020.06.017(微小RNA侵袭、小亡前已发现多个如[]1miR-613，miRRNAmicroRNA分子，在转录后水平调节基因表达，在细胞增殖血管再生等多种生理病理过程中起重要作用、)是一类高度保守的非编码凋、目可作为卵巢浆液性癌的独立预后因子，定位于人染色体在不同类型在喉癌中表达降。miR-203，文献报道，为特异性上皮、miR-21miR-203]等miR。[214q32-33肿瘤中的表达水平存在差异，如miRmiR-203接受日期:2020-01-02作者单位:海南省海口市妇幼保健院1病理科、2检验科，海口570203作者简介:柯艺文，女，主治医师:。E-mailafkvuf@163.com543等[。TianmiR-203]，目前关于]研究发现，]，而在乳腺癌中表达增加[低[癌中的表达情况尚不明确卵巢癌组织样本及细胞株中均表达下降，而关于卵巢浆液性癌中的表达情况相关研究甚少在卵巢在在本实验采用技术检测卵巢浆液性癌组织中的RT-PCRmiR-203、miR-595表达情况，探讨其表达与患者病情进展预后的关系，并评估、其在卵巢浆液性癌预后预测中的应用价值miR-595miR-595。。1材料与方法14511。年月年2011~2014纳入标准:病历资料完整，术前未接受放1.1实验材料收集月海南省海口市妇幼保健院行手术治疗的卵巢浆液性癌手术组织样本(癌组织及癌旁正常组织)，共收集例符合标准的卵巢浆液性癌标本化疗、及激素治疗，术后病理诊断为卵巢浆液性癌，完成术后随访。排除标准:合并感染性疾病;合并严重器质性疾病;合并其他本实验经本院伦理委员会审核通过，组织样本采恶性肿瘤集符合采用门诊复查或电年的术后随访，直至随访时子通讯方式，对患者进行为期间截止或患者死亡，本组。世界医学协会赫尔辛基宣言例患者中位随访时间为(》。《548.09)个月45(美国。TrizolInvitrogen±7.49miRcutemiRNA提取分离试剂盒(北京天根生化公司)，反转录试剂盒(上海碧云天生物公司)，逆转录引物及引物(金斯瑞生物RT-PCR公司)，试剂盒(大连宝生物公司)，紫外分光光度计(美国公司)，仪(美国SYBRPrimeScriptRT-PCRThermoRT-PCR公司)，1.2RT-PCRmiRcutemiRNA，反转录试剂盒合成中的miRNA提取分离试剂盒提取组织逆转录引物，miR-203cDNA5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCTAG，TGGT-3'miR-595逆转录引物5'-GTCGTATCCAGTGCAGGPrimeScriptRT-PCR严格遵守试剂盒说明书，GTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACAAG-3'。SYBR试验，所有操作均正向引物，反向引RT-PCR引物:试剂盒进行5'-ACACTCCAGCTGGCGTGAAATGTTTAGGACCA-3'物正向引物miR-203RT-PCR5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'5'-;miR-595，反向引物GCGGCAACCCGTAGATCCGAA-3'5'-GTGCAGGG正向引物5'-CGCTTCGGCAGCACATATAU6TCCGAGGT-3';，反向引物C-3'反应条件:，合计94℃5'-TTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'。RT-PCR预变性个循环，以，72℃的相对，60℃15s94℃15s10min2-ΔΔCt计算miR-203、miR-595;4015s表达量1.3统计学分析所有数据采用。SPSS19.0软件进行统计;;预后miR-595公司)。ABI·407·临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2020Jun;36(6)。计量资料以珋x±s学分析检验，多组间比较采用单因素方差分析存曲线评估患者预后，归模型分析预后影响因素，受试者工作特征(表示，独立两组间比较采用双尾t生回检验分析生存率差异，Kaplan-MeierLog-rankCox以。，)曲线分析ROCingcharacteristic卵巢浆液性癌预后的预测价值意义。miR-203、miR-595receiveroperat-表达对为差异有统计学。P<0.052结果2.1卵巢浆液性癌中miR-203、miR-595的表达RT-PCR结果显示，与癌旁正常组织相比，卵巢浆液性癌组织中miR-相对表达量降低，差异均有相对表达量增加，而203统计学意义(均P<0.05miR-595，表)1。表1卵巢浆液性癌组织中miR-203、miR-595的表达(珋x±s相对相对)miR-203miR-595分组卵巢浆液性癌组织癌旁正常组织值值tPn4545表达量表达量3.19±1.571.21±0.318.300<0.050.29±0.181.24±0.3615.833<0.052.2卵巢浆液性癌中miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系卵巢浆液性癌中肿、)，与淋巴瘤直径结转移表达与患者表达与患者年龄均miR-203表达无关();均组织学分级、分期有关(、CA125>0.05PP<0.05miR-595、FIGO、)2PP。<0.05、FIGO>0.05、CA125miR-203均均肿瘤直径、无关(分期相关()，与组织学分级，表年龄淋巴结转移2.3miR-203、miR-595表达与卵巢浆液性癌患者预后的关)为界，将卵巢浆液性癌系以患者分为低表达组(例)，高表达组患者的23)，中位生存时间为术后年总生存率为个月，两组相比差年总生存率为5个月，表达量中位数(高表达组(低表达组患者的术后)，中位生存时间为结果显示，Kaplan-Meier例)和miR-203miR-203miR-203miR-20318.19%26.574/222.96225((39.5447.83%异有统计学意义(11/23以miR-595miR-595Log-rankχ2=5.306表达量中位数(高表达组(0.30例)和患者分为(例)，23术后Kaplan-Meier年总生存率为5个月，miR-59536.2722(结果显示，miR-59550.00%11/22低表达组患者的术后)1。，图miR-595，P=0.021)为界，将卵巢浆液性癌低表达组高表达组患者的)，中位生存时间为年总生存率为个月，两组相比差异5()，中位生存时间为30.28，P=0.038Log-rankχ2=4.31117.39%4/23有统计学意义(2.4Cox回归模型分析卵巢浆液性癌预后的影响因素建比例回归模型，因变量为卵巢浆液性癌预后状况，选立择组织学分级淋巴结转移、、miR-个指标为自变量，回归过程采用逐步后退法，、miR-203表达等、FIGO分期表达，图Cox。1)595以行自变量的选择和剔除，设定5剔除结果显示:淋巴结转移=高低表达是卵巢浆液性癌患者预后的独立危险=0.10分期α较高、miR-203FIGO、，α入选0.05。表达因素(、miR-595均P<0.05，表)3。临床病理参数年龄(岁)<50≥50肿瘤直径()cm<2≥2组织学分级低级别高级别淋巴结转移无有血清CA125()U/mL<35≥35分期FIGOⅠ+ⅡⅢ+Ⅳ临床病理参数淋巴结转移分期FIGOmiR-203miR-595表达表达表2卵巢浆液性癌中miR-203、miR-595表达与临床病理特征的关系nmiR-203相对表达量值t/F值PmiR-595相对表达量值t/F值P252023223872223291635103.32±1.623.03±1.523.21±1.593.17±1.563.20±1.643.16±1.592.63±1.433.73±1.753.18±1.603.21±1.552.38±1.546.03±2.130.6130.5430.0850.9330.0600.4762.3030.0260.0610.9526.057<0.0010.28±0.190.30±0.200.30±0.180.28±0.190.31±0.150.20±0.140.38±0.210.20±0.160.30±0.190.27±0.180.32±0.190.19±0.170.3430.7330.3630.7191.7990.0393.2430.0020.5160.6081.9490.048赋值说明转移，否1=1=Ⅲ+Ⅳ1=0=，0=Ⅰ+Ⅱ高表达，0=低表达，否否0=1=表3卵巢浆液性癌预后影响因素的分析结果B0.8550.7931.2920.761SE0.4140.3300.4390.293Waldχ24.2605.7638.6596.743值P0.0390.0160.0030.009RR2.3522.2103.6412.140(RR)95%CI1.044~5.2991.157~4.2231.540~8.6101.205~3.800临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2020Jun;36(6)·507·)24，图(表。0.7度也均大于2.5.2三指标联合应用对预后的预测价值以该三指标各自的阈值为诊断阈值，对各样本作阴性或阳性判断若三指标均为一致阳性或阴性时作出样本的阳或阴性诊断，有一个指标不一致时则对其进行复测，复测未改变时即认可两指标如此计算得:血清相同的诊断结果，同时与临床医师会商联合检测诊断的灵敏度癌组织中CA125、这说明三和特异度分别为指标联合应用较之于各指标单独应用，可使对卵巢浆液性癌的预后预测效能得到明显的提升(表miR-203、miR-59513/1527/300.8670.900)和。。。(())4。表4miR-203、miR-595对卵巢浆液性癌诊断的ROC结果特异度理论阈值灵敏度AUC指标35.0kU/L2.700.280.7350.7050.8250.7860.755()27/300.86713/15以上各自阈值0.900()0.724CA125miR-203miR-595CA125+miR-203+miR-5950.8200.7920.745-3讨论图1Kaplan-Meier曲线分析miR-203、miR-595表达与患者预后的关系:A.miR-203B.miR-595;30例)为阳性样本，生存病例(2.5联合检测miR-203、miR-595对卵巢浆液性癌的预后预测价值2.5.1各指标单独应用对预后的预测价值以本组中死亡例)为阴性样本，再病例(将卵巢浆液性癌组织中以及当前临床上个组段，等共已用的血清3分析结果显示:三指标均建立诊断分析模型具有一定的卵巢浆液性癌预后预测价值，曲线下面积在其理论阈值点处，敏感度和特异(个指标水平划分成经miR-203、miR-595)均在CA125以上7~9ROCROCROC。15AUC0.74。]62214。。。约90%万，严重威胁女性生命健康[卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，但病死率居妇科肿瘤的首位卵巢癌为卵巢浆液性癌，每年新发病例数约万，死亡病例数约目前的临床治疗方案可显著提高患者的生存质量，但晚期患者的年总生存率较此外，卵巢浆液性癌发病隐匿，临床上亟需寻找灵敏度低高的诊断及预后预测的生物标志物，以提高患者的早期诊断卵巢癌近年来，在肿瘤诊断及治疗方面率取得了较大进展，但卵巢癌患者的年存活率仍较低，缺乏有效的早期筛查敏感性和特异性均较高的生物标志物是重要原因之一是较为理想的卵巢癌生物标志物改善患者预后、近年研究发现，miR。。55CA125晚期患者中，其血清水平升高明显，但近者的血清高，且其血清水平易受多种生理(如妊娠等)是临床应用最广泛的血清肿瘤标志物，在卵巢癌早期卵巢癌患水平无变化，对早期患者的诊断灵敏度不病理(如子宫、CA12550%。图2miR-203、miR-595、CA125对卵巢浆液性癌预后预测的ROC曲线:A.miR-203;B.miR-595;C.CA125·607·临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2020Jun;36(6)内膜异位症等)状态影响，导致其临床应用受到限制[]7。9-]8]认为miR-203miR-203miR-203miR-203研究证实，子宫颈癌、。表达增加，提示与卵巢癌子宫内膜癌等、本实验结果显示，与癌旁正常组织相异常高表达可妇科肿瘤关系密切[比，癌组织中能参与了卵巢浆液性癌的发生，发挥促癌基因作用。Zhao等[间质转化过程，发挥抑癌基因功能，与本结论相悖，笔者初步分析，这可能是组织样本与细胞株之间的差异所致，后续研究将在细胞水平进一步论证本实验结论;此外，本实验结果发现，癌组织中可抑制卵巢癌细胞的上皮高表达与淋巴结转移miR-203高表达患者的术后FIGOmiR-中位生存时间短，初、高表达可诱发卵巢浆液性癌的发生及恶性高表达是影响患者具有作为卵巢203步证实进展miR-203预后的独立危险因素，以上结果证实，浆液性癌生物标志物的潜能回归模型结果显示，较高、年总生存率低分期相关，miR-203miR-203。Cox5。512111310]]。、miR等[、FIGOmiR-595miR-595]的生物标志物淋巴结转移、是近年研究发现的新]的研究结论一致;但有研究发现，miR-595]相关，且可作为肝硬化[分子，其功能尚未明异常表达与骨髓增生异常综合炎症性肠在卵巢浆液性癌分期确，有研究证实征[下颌前突[、本实验发现病[组织中表达降低，且与组织学分级及不良预后相关，是患者预后的独立危险因素，提示miR-595具有抑癌基因功能，且与卵巢浆液性癌的发生恶性进展及、不良预后关系紧密，可作为卵巢浆液性癌的生物标志物，与高表达可Tian促进胶质细胞瘤的细胞增导致白血病细胞的化疗耐药[、同时具有促癌基因笔殖[作为转录后调控因子，与靶基因间存在者初步分析，多对一的复杂调控网络，且不同肿瘤细胞中，不同基一对多、因的表达丰度存在较大差异，进而导致可能同时具有促癌和抑癌功能，后续研究将深入探究在卵巢浆液性癌中的分子作用机制，以期从分子生物学水平阐述并支持本研究结论对卵巢浆液性癌具有较好的预后预测价值，其灵敏度和特异度均，灵敏度和特在异度显著提升，提示在卵巢浆液性癌的预后判断中联合检测具有较好的临床应用价值抑癌基因功能、CA125、miR-203、miR-595曲线结果显示，以上，联合检测miR-203、miR-595]，提示miR-595miR-595miR-595miR-595miR-595。ROC0.7。]1514miR-203、miR-595CA125、。综上所述，卵巢浆液性癌组织中miR-低表达，两者均是患者不良预后的独立危险因素，具有作高表达，miR-203595为卵巢浆液性癌生物标志物的潜能;检测可能有助于卵巢浆液性癌患者的预后预测miR-203、miR-595。参考文献:[]1ZhangX，ZhangH.DiminishedmiR-613expressionasanovelprognosticbiomarkerforhumanovariancancer.EurRevMed[]JPharmacolSci[]2HuoW，，，20(5，2016，):837-841.ZhaoGYinJetal.LentiviralCRISPR/Cas9vectormediatedmiR-21geneeditinginhibitstheepithelialtomesenchy-):，(maltransitioninovariancancercells.JCancer[]J2017，8157-64.，JiangQZhouY，YangH，etal.AdirectlynegativeinteractionofmiR-203andZEB2modulatestumorstemnessandchemotherapy，7.Oncotarget[]Jresistanceinnasopharyngealcarcinoma(2016，4167288-67301.HeSZhangG，DongH，etal.miR-203facilitatestumorgrowth):，andmetastasisbytargetingfibroblastgrowthfactor2inbreast[]3[]4cancer.OncoTargetsTher[]5TianSZhangM，ChenX，[]J，，2016:，96203-6210.ancancercellstocisplatinbytargetingABCB1.Oncotargetetal.MicroRNA-595sensitizesovari-，[]J(，7):201687091-87099.[]杨洋，孙洁，朱光，等652卵巢癌中.Tiam1]临床病理学意义[J.临床与实验病理学杂志，蛋白过表达的):(，3320179945-949.[]栾梅，梅雪绯，翟光宇，等7.CA125清展，水平对疗效及预后的评估价值[]J.，17，2080-2082.[]张海花，平毅，郝敏8.miR-20320172071):11(动态监测上皮性卵巢癌患者血现代生物医学进靶向调控机制在妇科肿瘤]中的研究进展[J.山西职工医学院学报，2017，27(6):57-60.[]9ZhaoG，GuoY，ChenZ，etal.miR-203functionsasatumorsuppressorbyinhibitingepithelialtomesenchymaltransitionino-variancancer[]10AlkhatabiHA[].JCancerSciTherJ，，McLornanDP，2015(，72):34-43.，KulasekararajAGetal.RPL27AisatargetofmiR-595andmaycontributetothemyelo-dysplasticphenotypethroughribosomaldysgenesis.Oncotar-[]J，2016(，730):get47875-47890.[]谷妍，赵春洋，李琥11.miR-595]清中的表达水平[J.147.口腔生物医学，在生长期下颌前突患者血，):(3140-1422016，7[]12，，FornariFmiR-939FerracinM，miR-595[]JpatientswithHCC[]康颖，路又可，王震凯，等13]的表达及其意义[J.过表达与敲减胃肠病学，[14[15.]孔晓岩，王淑梅白血病细胞株，杂志，201935，]HaoYZhangSCEM/C1():5，SunS462-464.，TrerèD，etal.CirculatingmicroRNAs，，miR-519dandmiR-494(，.PLoSOne，10201510identifycirrhotic):e0141448..MicroRNA-595(，2182016在炎症性肠病中):465-469.MiR-595]细胞周期的作用[J.是否影响甲氨蝶呤对中国临床药理学，etal.MiR-595targetingregulationofSOX7expressionpromotedcellproliferationofhumanglioblastoma[]J.BiomedPharmacother121-126.，802016，:
