上皮性卵巢癌组织miR-320a表达对SKOV3细胞增殖和侵袭性影响
【摘要】 生、进展及预后关系密切。本研究分析卵巢上皮性癌组织中RNA（microRNA，miRNA）类型之一，在多种恶性肿瘤组织中表达异常，与肿瘤发细胞中表达，并探讨上调人卵巢癌miR-320a作为微小miR-320aSKOV3在湖北省中医院妇产科收治的例94检测上皮性卵巢癌和正常卵巢组织表达对癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法选取2015-02-02-2018-03-21例正常卵巢组织标本。实时荧光定量42PCRmiR-320a患者的上皮性卵巢癌组织，选取同期中表达。培养miR-320aSKOV3PCRVimentinmiR-320amiR-320amiR-320a细胞并分为模拟组细胞中相对表达量为蛋白表达。结果模拟组、阴性对照组和空白组。实时荧光定量1.00±0.05，差异有统计学意义，t=32.448，P<0.001。上皮性卵巢癌组织中法和克隆形成实验检测细胞增殖力，Transwell卵巢癌组织中和检测细胞中表达，MTT法检测细胞侵袭力，蛋白质印迹法检测细胞中0.51±0.09，低于正常卵E-cadherin、N-cadherin巢组织的分期（t=4.450，P<0.001）、分化程度（t=2.348，P=0.021）和有无淋巴结转移（t=3.728，P<0.001）方面比较，差异有统计学意义。miR-320a相对表达量高于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=223.704，P<模拟组抑0.001。MTT制细胞活性高于其他模拟组细胞克隆数低于阴性对照组和空白组，差异有统模拟组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=计学意义，F=975.124，P<0.001;miR-320a模拟组细胞中蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，124•195，P<0.001;miR-320aE-cadherin值F=152.673，P<0.001;而在上皮性卵巢癌组织中呈低表达，且与肿瘤发生及恶性化进展55.251、62.054，均分别为有关。上调细胞中[关键词]SKOV3卵巢上皮性癌;miR-320a;细胞增殖;细胞侵袭;上皮-组细胞活力均值间差异有统计学意义，F组间=7259.713，P<0.001;miR-320a表达可抑制细胞增殖及细胞侵袭力，其机制可能与抑制上皮间质转化有关。-蛋白相对表达量低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，FN-cadherinP<0.001。结论miR-320a组。克隆形成实验结果显示，miR-320a实验结果显示，3miR-320a表达量在间质转化miR-320amiR-320aVimentinFIGO和2中华肿瘤防治杂志，2019，26（14）:1026-1030ExpressionofmiR-320ainepithelialovariancanceranditseffectonproliferationandinvasivenessofSKOV3cellsYUJun1，LIXiao-lan2，ZHANGQing-dong31.DepartmentofObstetricsandGynecology，HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine，TraditionalChineseMedicineHospitalofHubei，Wuhan430061，P.R.China2.DepartmentofObstetricsandGynecology，SecondPeopleHospitalofYichang，Yichang443000，P.R.China3.DepartmentofObstetricsandGynecology，HuangshiCentralHospital，AffiliatedHospitalofHubeiPolytechnicUniversity，EdongHealthcareGroup，Huangshi435000，P.R.China[ABSTRACT]OBJECTIVEmiR-320aisoneofthemiRNAtypes.Previousstudieshaveshownthatitisabnormallyexpressedinmanymalignanttumortissues，andiscloselyrelatedtotumorigenesis，progressionandprognosis.ThepurposeofthisstudywastoanalyzetheexpressionofmiR-320ainepithelialovariancancer，andtoexploretheeffectofup-regulate湖北省自然科学基金（2015CFB574）[基金项目][第一作者简介]Tel:86-27-88929379E-mail:3085149778@qq.com[通讯作者简介]Tel:86-27-88929379E-mail:zhangqingdongpp@163.com张青冬，女，湖北黃万方数据余俊，女，湖北武汉人，硕士，副主任医师，主要从事妇科内分泌临床和基础研究工作。石人，副主任医师，主要从事妇科肿瘤临床和基础研究工作。中华肿瘤防治杂志2019年7月第26卷第14期CHINJCANCERPREVTREAT，July2019，Vol.26No.14·7201·theexpressionofmiR-320aonproliferationandinvasivenessofhumanovariancancerSKOV3cells.METHODSAtotalof94casesofpatientswithepithelialovariancancerunderwentsurgeryinHubeiUniversityofTraditionalChineseMedi-cinewereselectedfromFebruary2015toMarch2018.Inthesameperiod，42casesofnormalovariantissuespecimenswereselected.TheexpressionsofmiR-320ainepithelialovariancancerandnormalovariantissuesweredetectedbyreal-timefluorescentquantitativePCR.SKOV3cellswereculturedanddividedintomiR-320amimicgroup，negativecontrolgroupandblankgroup.TheexpressionofmiR-320aincellswasdetectedbyreal-timefluorescentquantitativePCR.CellproliferationwasdetectedbyMTTassayandcolonyformationassay.CellinvasivenesswasdetectedbyusingTranswellassay.TheexpressionsofE-cadherin，N-cadherinandVimentinproteinsweredetectedbyWesternblot.RESULTSTherelativeexpressionlevelofmiR-320awas0.51±0.09inovariancancertissues，whichwaslowerthanthatinnormalovari-antissues，whichwas1.00±0.05，thedifferencewasstatisticallysignificant（t=32.448，P<0.001）.ComparisonontheexpressionlevelsofmiR-320ainepithelialovariancancertissuesinFIGOstage（t=4.450，P<0.001），degreeofdifferenti-ation（t=2•348，P=0.021）andlymphnodemetastasis（t=3.728，P<0.001），thedifferenceswerestatisticallysignifi-cant.TherelativeexpressionlevelofmiR-320ainmiR-320amimicgroupwashigherthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=223.704，P<0.001）.TheresultsofMTTassayshowedthatthedifferencesofcellviabilityamongthethreegroupswerestatisticallysignificant（Fgroup=7259.713，P<0.001）.ThecellviabilityinthemiR-320amimicgroupwashigherthanintheothertwogroups.TheresultsofcolonyformationassayshowedthatthenumberofcellclonesinmiR-320amimicgroupwaslowerthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=975.124，P<0.001）.ThenumberofinvasivecellsinmiR-320amimicgroupwaslowerthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=124.195，P<0.001）.TherelativeexpressionlevelofE-cadherinproteininmiR-320amimicgroupwashigherthanthatinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（F=152.673，P<0.001），whiletherelativeexpressionlevelsofN-cadherinandVimentinproteinswerelowerthanthoseinnegativecontrolgroupandblankgroup，thedifferenceswerestatisticallysignificant（Fvalueswere55.251and62.054，P<0.001）.CONCLUSIONSmiR-320aislowlyexpressedinepithelialovariancancertissues，andisrelatedtotumorigenesisandmalignantprogression.Up-regu-lationexpressionofmiR-320ainSKOV3cellscouldinhibitcellproliferationandcellinvasion，anditsmechanismmayberelatedtoinhibitionofepithelial-mesenchymaltransition[KEYWORDS]epithelialovariancancer;miR-320a;cellproliferation;cellinvasion;epithelial-mesenchymaltransitionChinJCancerPrevTreat，2019，26（14）:1026-1030[中图分类号]R737.31[文献标识码]A[文章编号]1673-5269（2019）14-1026-05资料。材料与方法1标本来源1.15上皮性卵巢癌作为女性生殖系统常见的恶性肿瘤，近年来，发病率呈升高趋势且出现年轻化[1]。由于早期症状不典型，多数患者临床确诊时已出现转移或形成腹水，致死率位居生殖系统恶性肿瘤首位[2-3]。尽管现有诊疗技术不断改进，但由于易出现复发转移及化疗耐药，患者年生存率仍处于较低水平[4]。因此，积极探讨卵巢癌发生、进展相关分子机制，对早期诊疗及改善患者预后具有重要意义。微小RNA（microRNA，miRNA）作为广泛存在于生物体内的含有18~RNA，在与相应的靶基因结合后通22过调控翻译或降解而在多种生理、病理过程中类型之一，发挥重要作用[5]。miR-320a在多种恶性肿瘤组织中表达异常，与肿瘤发生、进展及预后关系密切[6]。但在卵巢癌中的作用鲜有报道。本研究分析了上皮性卵巢癌组织中表达，探讨其与临床指标间的关系，并对卵miR-320a模拟物，观察其对细胞增巢癌殖和侵袭力的影响，以期为卵巢癌机制研究提供参考转染万方数据个碱基的短链miR-320amiR-320amiRNASKOV3mRNA作为1694526选取34~772015-02-02-2018-03-21岁。浆液性癌例，透明细胞癌科收治的上皮性卵巢癌患者疗治疗，术后病理确诊。患者年龄龄（53.8±10.7）岁，中位年龄黏液性癌例，子宫内膜样癌根据国际妇产科联盟（FIGO）2014例，Ⅳ27例。淋巴结转移湖北省中医院妇产例，术前均未接受放化岁，平均年例，例。期例。低分化例。68选取同期因卵巢上皮性良性囊肿行手术治疗的正常卵岁，平均年龄巢组织标本33~79岁。术中留取肿瘤原发（55.1±11.8）岁，中位年龄灶组织和正常卵巢组织，快速置于液氮中，-70℃保存。本研究通过医院伦理委员会批准（伦理编号:FCK201410230068），所有研究对象均知情同意。3年分期标准，Ⅰ期例，Ⅲ46例，高分化例，Ⅱ期例，中分化例。患者年龄期18204265369323·8201·余俊，等上皮性卵巢癌组织miR-320a表达对SKOV3细胞增殖和侵袭性影响主要试剂和设备RNARoche法）和1.2总转染试剂购自美国提取试剂（TrizolHyclone公司，miR-320aInvitrogen公司，miR-320aLipofectamineTM公司，逆转录和扩2000增试剂盒购自瑞士和内参引物由上海英骏生物技术有限公司设计合成，人卵巢癌细胞购自中科院上海生科院细胞资源中心，SKOV3改良杜氏伊格尔培养基（Dulbecco'smodifiedeaglemedium，DMEM）培养基、胰蛋白酶和胎牛血清购自模拟物（miR-320amim-美国ics）和阴性对照序列由上海吉玛制药技术有限公司设计合成，四唑盐（methylthiazolyltetrazolim，MTT）和二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）购自美国公司，基Sigma钙黏蛋白（E-cadher-质胶购自美国钙黏蛋白（N-cadherin）多克隆抗体均购自美国in）和公司、兔抗人波形蛋白（Vimentin）多克隆抗SantaCruz体购自美国公司，实时荧光定量聚合酶链式反Abcam应（polymerasechainreaction，PCR）仪购自美国公司。公司，凝胶电泳分析系统购自美国检测公司，Transwell公司，兔抗人小室购自美国Bio-RadGenesisCostar表达N-BDE-1.3miR-320aPCR取卵巢癌和正常卵巢组织，切碎并研磨，用总提取试剂提取组织中总RNA，分光光度计对其浓RNA度和纯度进行检测。分别按照逆转录和扩增试剂盒说上游引物序列明进行反转录和为5'-AAAAGCTGGGTTGAGAGG-3'，下游为扩增。miR-320aPCR5'-GTGCTCGCTTCGGCAGCACATATAC-3'，ACATGTACAGTCCATGGATG-3';U6列为下游为TG-3'。每个样品设个复孔。95℃6退火30s，55℃30s，73℃95℃次。2-ΔΔCt法计算5'-AAAAATATGGAACGCTTCACGAATT-3min，30s，循环相对表达量。预变性延伸miR-320a变性365'-A-上游引物序细胞培养和分组1.4将10%5%CO2细胞置于含体积分数SKOV3培养基中，37℃、体积分数胎牛血清的培养。待DMEM细胞融合度>70%，胰酶消化，传代培养。取对数生长期细胞，按转染试剂盒说明进行分组转染:miR-320a模拟组转染5'-AAAAGCU-GGGUUGAGAGGGCGA-3'，阴性对照组转染阴性对照序列为5'-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3'，空白组不作任何处理。各组处理后继续于培养箱中培养。的模拟序列为miR-320a表达实时荧光定量检测PCR细胞，胰酶消化，加入细48h1.5miR-320a取组转染后培养3胞裂解液，其余步骤同上。1.6细胞增殖活力取细胞，胰酶消化，接种于5×103个/孔，每组设万方数据MTT6为法检测96孔板，细胞密度调整培个复孔，37℃、5%CO212、24、48、72养。分别在培养20μL5mg/mL150μLDMSO，用酶标仪在光度MTT的和96h液，培养时，向各孔加入2h，各孔加入波长处对各孔吸1.7490nm值检测，评价细胞增殖活力。A细胞增殖能力克隆形成实验组细胞转染后继续培养，待融合度在3时，胰酶消化，1000r/min完全培养基制备细胞悬液，取于离心35mm多聚甲醛固定，0.1%塑料培养皿中，37℃、5%CO2结晶紫染色，PBS4%用倒置显微镜观察，计数克隆形成数，以的聚团作为80%左右10min（r=13cm），用1×103个细胞均匀平铺14d。次，个细胞培养冲洗3>50个克隆。1细胞侵袭力法检测348hMatrigelTranswellTranswell基质胶用预冷的无血清培养液稀释，小室上室，过夜风干备用。取组细胞，消化，1000r/min1.8将平铺于转染后培养10min（r=13cm），取细胞沉淀，用无血清培养液重悬细胞，密度调整为加入小室上室，胎牛血清的培养液加入小室下室，将结晶紫染37℃、5%CO2色，并将散落细胞去除，显微镜下随机取周边上、下、左、右及中心位置1×105个/mL，取含20%个视野计数穿膜细胞数。1d。甲醛固定，0.1%600μL200μL培养离心5蛋白表达检测1.9取350μg组转染后培养总蛋白，行细胞，裂解液裂解，提取48h总蛋白并检测蛋白浓度。取聚SDS-丙烯酰胺凝胶电泳，电转至聚偏氟乙烯膜，室温下脱脂奶粉封闭E-cadherin（1∶500）、Vimentin（1∶800）多克隆抗体，N-cadherin（1∶1200）和1∶2000），室温孵育4℃60min，显影，拍照，用计算各蛋白电泳条带相对分子质量。过夜孵育，加入二抗（稀释比例60min，加入一抗兔抗人QuantityOne4.62统计学方法1.10采用SPSS21.0对数据进行统计学分析。通过法对计量资料进行正态性分布检验，均表示。通过检验比较均数之间差异，其余比较采用单检验，不同时点细胞增殖数据Shaopiro-Wilk符合正态分布。计量资料结果采用独立样本因素方差分析和采用两因素方差分析。检验水准α=0.05（双侧）。LSD-tx-±st结果2上皮性卵巢癌和正常卵巢组织表达2.1卵巢癌组织中miR-320a相对表达量为miR-320a0.51±1.00±0.05，差异有统计学0•09，正常卵巢组织则为意义，t=32.448，P<0.001。2.2表表达量在1分期（t=4.450，P<0.001）、分化程度（t=示，上皮性卵巢癌组织中表达与临床参数关系miR-320amiR-320a癌组织FIGO中华肿瘤防治杂志2019年7月第26卷第14期CHINJCANCERPREVTREAT，July2019，Vol.26No.14·9201·2•348，P=0.021）和有无淋巴结转移（t=3.728，P<0.001）方面比较，差异有统计学意义。性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=975.124，P<0.001。例上皮性卵巢癌组织中表达miR-320a）与临床参数关系（nmiR-320ax-±s表达量2.5SKOV3细胞侵袭力1图示，miR-320a模拟组、阴性对照组和空白组侵袭细胞数分别为（70.73±4.22）、（128.06±6.75）和（121.57±8.92）个，模拟组低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义，F=124.195，P<0.001。表194指标年龄（岁）≥55<55组织学类型浆液性癌其他肿瘤分布单侧卵巢双侧卵巢肿瘤直径（cm）≥10<10FIGO分期（期）Ⅰ~ⅡⅢ~Ⅳ分化程度低分化中高分化淋巴结转移是否腹腔积液有无值t值P1.8970.0610.5290.5981.4450.1521.6130.1104.450<0.0012.3480.0213.728<0.0011.3230.189563869256133435145496826326258360.48±0.090.52±0.090.50±0.090.51±0.100.50±0.090.53±0.100.52±0.090.49±0.100.55±0.090.47±0.080.49±0.090.54±0.100.46±0.070.53±0.100.50±0.090.52±0.10表达miR-320amiR-320a2.3SKOV3相对表达量分别为细胞模拟组、阴性对照组和空白组细胞中2.08±0.06、1.04±0.111.02±0.10，模拟组高于阴性对照组和空白组，差miR-320a和异有统计学意义，F=223.704，P<0.001。2.4SKOV3示，3细胞增殖能力组细胞细胞活力均值间差异有统计学意义，F组间=7259.713，P<0.001。5个时间点间的差异也有统计学意义，F时间=1663.747，P<0.001;而且处理药物与时间因素间存在协同作用，F组间时间=模拟组抑制细胞活性高28.302，P<0.001;miR-320a于其他表2×组。2表组别组23SKOV3细胞不同时点增殖活力均值比较（）x-±s12h24h48h72h96hmiR-320a模拟组阴性对照组空白组0.15±0.050.33±0.040.40±0.080.49±0.080.64±0.040.17±0.030.47±0.060.60±0.050.70±0.040.92±0.060.13±0.040.42±0.050.63±0.040.68±0.060.89±0.03克隆形成实验结果显示，miR-320a模拟组、阴性对照组和空白组细胞克隆数分别为（119.40±5.33）、（283.93±9.60）和（292.17±7.41）个，模拟组低于阴万方数据注:A.miR-320a模拟组;B.阴性对照组;C.空白组法检测组细胞侵袭力（结晶紫图1Transwell3）×200细胞蛋白表达示，miR-320a22.6SKOV3和图模拟组细胞中表3E-cad-蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白组，F=蛋白相值分别为herin152.673，P<0.001;N-cadherin对表达量低于阴性对照组和空白组，F55•25162.054，均P<0.001。Vimentin和和讨论3上皮性卵巢癌约占卵巢癌的左右，早期诊断率低，病程进展快，极易发生转移，且复发及耐药发生率高，尽管临床诊治水平不断进步，但患者总体预后依90%·0301·余俊，等上皮性卵巢癌组织miR-320a表达对SKOV3细胞增殖和侵袭性影响<40%年生存率然不佳，5[7]。研究表明，侵袭转移是导致上皮性卵巢癌患者预后差的主要因素[8]。miR-作为机体内广泛存在且在病理生理过程中发挥重NA要作用的短小RNA，可作为癌基因或抑癌基因而参与多种恶性肿瘤发生、进展过程，且与肿瘤侵袭、转移和预后密切相关[9]。微阵列分析结果发现，miRNA在上皮性卵巢癌进展中发挥至关重要的作用，可作为其新的治疗或诊断生物标志物的靶标[10]。表细胞3SKOV3和E-cadherin蛋白表达（Vimentin）x-±s、N-cadherin组别E-cadherin蛋白N-cadherin蛋白Vimentin蛋白模拟组miR-320a阴性对照组空白组注:avs0.82±0.07ab0.37±0.10ab0.44±0.04ab0.34±0.040.77±0.060.75±0.060.37±0.06空白组，P<0.05;bvs0.71±0.040.78±0.07阴性对照组，P<0.05细胞中组，说明上调SKOV3制细胞增殖能力，提示能而参与了细胞增殖过程。有研究指出，miR-320amiR-320amiR-320a表达可有效抑可能发挥抑癌基因功参与了肝癌细胞侵袭和转移，对肝癌具有抗转移作用[16]。本研究结果显示，模拟组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白表达可抑制细细胞中SKOV3miR-320amiR-320a组，说明上调胞侵袭力。上皮间质转化过程参与了上皮性卵巢癌发生、进-展过程，且与细胞恶性增殖及侵袭转移密切相关[17]。是上皮细胞标志物，与减少细胞间黏附力E-cadherin密切相关，而则是间质细胞Vimentin标志物，其表达升高预示发生了上皮间质转化，且可-作为肿瘤转移的导火索[18-19]。本研究结果显示，蛋白相对表达量模拟组细胞中N-cadherin和miR-320a高于阴性对照组和空白组，而蛋白相对表达量则降低，说明上调E-cadherinN-cadherin和SKOV3表达可抑制上皮间质转化，提示-间质转化过程而参与了miR-320a可能通过调控上皮-细胞侵袭转移过程。Vimentin细胞中miR-320aSKOV3图2蛋白质印迹法检测和及N-cadherinVimentin细胞蛋白表达SKOV3E-cadherin作为分期FIGOmiR-320miR-320amiR-320amiR-320a家族成员，在机体多个组miR-320a织器官中存在。近年来发现，其在前列腺癌[11]、乳腺癌[12]和结直肠癌[13]等多种恶性肿瘤组织中表达异常，且与肿瘤细胞侵袭转移关系密切[14]。本研究结果显示，上皮性卵巢癌组织中相对表达量低于正常卵巢组织，说明在上皮性卵巢癌组织中呈低表达，可能作为抑癌基因参与了该肿瘤发生过程。在与病理指标间关系分析发现，在Ⅲ~Ⅳ呈低表期、低分化和发生淋巴结转移组织中低表达可能与上皮性卵巢癌恶性化达，说明特性有关，提示可能发挥抑癌基因功能，而在上皮性卵巢癌发生及恶性化进展中发挥重要作用。模拟物的方式特异性表达，结果显示，细胞中相对表达量高于阴模拟组细胞中miR-320a性对照组和空白组，提示细模拟组异胞中位过表达抑制了非小细胞肺癌细胞的增殖[15]。本研究实验结果显示，miR-320a和值低于阴性对照组和空白组，且A96h模拟组细胞克隆数低于阴性对照组和空白万方数据SKOV3表达升高。有研究指出，miR-320a本研究采用转染模拟组细胞时吸光度24、48、72miR-320amiR-320amiR-320amiR-320amiR-320amiR-320amiR-320aSKOV3提高miR-320a综上所述，miR-320a在上皮性卵巢癌组织中呈低表达，且与肿瘤发生及恶性化进展有关，上调细胞中其机制可能与抑制上皮程尚需进一步开展相关研究以明确。SKOV3表达可抑制细胞增殖及细胞侵袭力，间质转化有关，但具体作用过-miR-320a参考文献[1]JessmonP，BoulangerT，ZhouW，etal.Epidemiologyandtreat-mentpatternsofepithelialovariancancer[J].ExpertRevAnti-cancerTher，2017，17（5）:427-437.[2]WeiW，LiN，SunY，etal.Clinicaloutcomeandprognosticfac-torsofpatientswithearly-stageepithelialovariancancer[J].Oncotarget，2017，8（14）:23862-23870.[3]YangQ，YangY，ZhouN，etal.Epigeneticsinovariancancer:premise，properties，andperspectives[J].MolCancer，2018，17[4]（1）:109-115.孙婷，王伟，何向蕾及临床意义[J].卵巢癌中和的表达水平.SGK3医学研究杂志，2018，47（9）:81-86.miR-144-3p[5]ZouL，XiongX，WangK，etal.MicroRNAsintheintestine:roleinrenewal，homeostasis，andinflammation[J].CurrMolMed，[6]2018，18（3）:190-198.洪善超，殷皓，王婷婷，等及其功能[J].微小.RNA-320a在前列腺癌中的表达中华实验外科杂志，2018，35（5）:944-947.[7]VetterMH，HaysJL.Useoftargetedtherapeuticsinepithelialovariancancer:Areviewofcurrentliteratureandfuturedirec-tions[J].ClinTher，2018，40（3）:361-371.[8]vanDamPA，CoelhoA，RolfoC.Istherearoleforurokinase-typeplasminogenactivatorinhibitorsasmaintenancetherapyin?[J].EurJSurgOncol，2017，43patientswithovariancancer（2）:252-257.（下转第页）1035中华肿瘤防治杂志2019年7月第26卷第14期CHINJCANCERPREVTREAT，July2019，Vol.26No.14·5301·Survivin并减少巨孔的形成，从而抑制细胞凋亡。凋亡抑制基仅在肿瘤和胚胎组织表达，且与肿瘤细胞的因增殖、转移密切相关。本研究为了探讨蛋白如何技术分析抑制细胞凋亡，采用蛋白质印迹法和和组细胞表达水平低于蛋白在宫颈癌细胞蛋白表达水平，结果发现，HeLa-shTAZXIAP、Bcl-2、SurvivinSurvivin中XIAP、Bcl-2HeLa-shTAZ组细胞的HeLa-NC蛋白和mRNAq-PCR组和TAZ组，XIAP、Bcl-2、Survivin上调，其机制仍需进一步深入研究。TAZTAZ综上所述，本研究表明在宫颈癌中高表达，可促进宫颈癌细胞的增殖并抑制细胞凋亡，并可能成为某些类型宫颈癌的潜在治疗靶点。基于以往文献及抑制细胞凋亡的机制可能与本实验的研究结果，TAZ蛋白的水平有关，但是仍上调需深入研究其具体作用机制。XIAP、Bcl-2、SurvivinHeLa-NC中被参考文献[1]Stevanovi■S，DraperLM，LanghanMM，etal.Completeregres-sionofmetastaticcervicalcanceraftertreatmentwithhumanpapillomavirus-targetedtumor-infiltratingTcells[J].JClinOn-[2]col，2016，33（14）:1543-1550.王小霞，康佳丽，朱莉达及其与临床病理特征的关系[J].（10）:642-647..宫颈癌患者外周血和组织表中华肿瘤防治杂志，2016，23IL-22Th22与[3]SaavedraKP，BrebiPM，RoaJCS.Epigeneticalterationsinpre-neoplasticandneoplasticlesionsofthecervix[J].ClinEpigenet-tumorigenicroleofTAZinhumannon-smallcelllungcancer[J].[6][7]结直肠癌中.ClinCancerRes，2014，20（17）:4660-4672.吴健，范钦和临床与实验病理学杂志，2014，30（12）:1346-1349.王静查指南及筛查中存在的问题[J].指南---2014.β-catenin标准方案TAZ和..的表达及意义[J].年美国癌症学会最新宫颈癌筛中国全科医学，2014，17（27）:3163-3164.[8]MiW，LinQ，ChildressC，etal.GeranylgeranylationsignalstotheHippopathwayforbreastcancercellproliferationandmigra-tion[J].Oncogene，2015，34（24）:3095-3106.[9]XiaoH，JiangN，ZhouB，etal.TAZregulatescellproliferationandepithelial-mesenchymaltransitionofhumanhepatocellular[10][11][12]及TAZcarcinoma.[J].CancerSci，2015，106（2）:151-159.杨海波，黄定强，姜粱在头颈鳞癌中的表达及.YAP、LPA其与临床病理特征的关系[J].实用医学杂志，2018，34（1）:39-43.贾楠，张迎龙，刘涛，等在骨肉瘤组织中的表达及和临床意义[J].陈鹏，赵景岚，鲁瑞珍，等表达变化及意义[J].现代肿瘤医学，2015，23（22）:3330-3333.山东医药，2018，58（21）:61-63.非小细胞肺癌组织中.TAZ、YAP.YAP蛋白TAZ[13]SorrentinoG，RuggeriN，SpecchiaV，etal.MetaboliccontrolofYAPandTAZbythemevalonatepathway.[J].NatCellBiol，2014，16（4）:357-366.[14]ChenM，ZhangY，ZhengPS.Tafazzin（TAZ）promotesthetu-morigenicityofcervicalcancercellsandinhibitsapoptosis[J/CD].PLoSOne，2017，12（5）:e0177171.[15]PathakS，MengWJ，ZhangH，etal.TafazzinproteinexpressionisassociatedwithtumorigenesisandradiationresponseinrectalCancer:Astudyofswedishclinicaltrialonpreoperativeradio-ics，2012，4（1）:13.[16][4]KirwinSM，ManolakosA，BarnettSS，etal.Tafazzinsplicevari-antsandmutationsinBarthsyndrome[J].MolGenetMetab，2014，111（1）:26-32.[5]NoguchiS，SaitoA，HorieM，etal.Anintegrativeanalysisofthetherapy[J/CD].PLoSOne，2014，9（5）:e98317.唐薇薇，郑洪，厉国慧，等人抑制细胞凋亡及周期的影响[J].连锁凋亡抑制蛋白基因对X山东医药，2016，56（33）:22-24..siRNAHeLa收稿日期:2019-01-28修回日期:2019-06-06（编辑:杨靖）（上接第[9]DetassisS，GrassoM，DelVescovoV，etal.microRNAsmake[15]WangJ，ShiC，WangJ，etal.MicroRNA-320aisdownregulateds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