登录 | 注册
医学
-
培美曲塞、顺铂联合盐酸埃克替尼对表皮生长因子受体突变 晚期肺癌的治疗效果
摘要::目的目的探讨培美曲塞、顺铂联合盐酸埃克替尼对表皮生长因子受体（EGFR）突变晚期肺癌的治疗效果。方法方法按照治疗方案的不同将60例晚期肺癌患者分为观察组和对照组，各30例。观察组患者使用培美曲塞加顺铂联合盐酸埃克替尼进行治疗，对照组患者仅使用培美曲塞加顺铂进行治疗。观察治疗后两组患者的临床疗效，比较治疗前后两组患者的血清细胞角质蛋白19片段抗原21-1（CYFRA21-1）、癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平及治疗期间的不良反应发生情况。观察并比较两组患者随访18个月的生存情况。结果结果观察组患者的总有效率高于对照组患者，差异有统计学意义（P﹤0.05）。治疗后，观察组患者的血清CY-FRA21-1、CEA、NSE水平均低于对照组患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。观察组患者的不良反应发生率均低于对照组患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。截至随访结束，观察组患者的总生存率高于对照组患者，差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论结论培美曲塞加顺铂联合盐酸埃克替尼治疗可明显提高对EGFR突变晚期肺
-
医科院校公共事业管理专业发展的边缘化及其化解战略
医科院校公共事业管理专业承担着培养卫生事业管理人才的重任，但是在发展的过程中深陷边缘化的困境。医科院校公共事业管理专业发展边缘化主要体现在两个方面，一是在教育中被医学类专业边缘化，二是工作后被医疗类岗位边缘化。针对医科院校公共事业管理专业发展边缘化的问题，既要推动医科院校医学类专业与管理类专业的共同发展，又要推动医疗机构医疗岗位和管理岗位的协同配置。
-
大鼠重度创伤后感染与胰岛素抵抗的相关机制研究
目的探索大鼠重度创伤感染后出现的急性胰岛素抵抗和高血糖的特点及相关机制，为临床危重患者诊疗提供参考。方法以30只SD大鼠为基础组，另选取90只SD大鼠接受盲肠穿孔术制作感染模型，通过测定造模大鼠创伤感染后12h内各个时间点血糖、胰高血糖素、皮质醇及胰岛素浓度，计算创伤感染组胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;分别在创伤感染后3~10h内通过胰岛素敏感性实验（IST）测定胰岛素敏感性和腹腔注射葡萄糖耐量实验（IPGTT）。用Western-blot测定创伤组在创伤感染后大鼠pAkt、pGSK3β和peNOS在各时间点的表达量与活性变化。结果创伤感染大鼠在伤后12h内出现血糖双峰现象。与基础组比较，创伤组大鼠血清胰高血糖素、皮质激素、胰岛素在创伤后12h内均有升高现象（P<0.05）。HOMA-IR值显示创伤感染后出现胰岛素抵抗;腹腔糖耐量和胰岛素敏感性实验提示在创伤后3h胰岛素敏感性最低（P<0.05）。Western-blot结果显示感染组大鼠pAkt、pGSK3β和peNOS蛋白水平升高，且1h后达到峰值（P<0.05）随后下降趋以稳定。结论大鼠在重度创伤感染12h内会出现两个
-
2018年度“林贵-刘子江优秀介入论文奖”
无摘要
-
封堵卵圆孔未闭预防卒中的国外发展及中国现状
20经过近年的争议和大量研究，封堵卵圆孔未闭(本文从循证医学证据入手，回顾近年来国内外经导管封堵patentforamenovale，)在卒中二级预防中的作用已预防卒中的研究成果，旨在明确能从封堵治疗PFOPFO经明确。中获益的。人群卵圆孔未闭;封堵;卒中;随机对照研究[文献标志码]APFO
-
阿柏西普玻璃体腔内注射联合激光光凝治疗视网膜大动脉瘤伴发黄斑水肿效果观察
目的观察阿柏西普玻璃体腔内注射联合激光光凝治疗视网膜大动脉瘤(RAM)伴发黄斑水肿的临床疗效。方法选取RAM伴发黄斑水肿患者15例(眼)，先行患眼阿柏西普玻璃体腔内注射，1周后行激光光凝治疗;观察记录治疗前和治疗后1、3、6个月患眼最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心凹厚度(CMT)，治疗后3个月时观察瘤体萎缩程度、眼底出血及渗出情况。结果与治疗前比较，治疗后各时点BCVA升高、CMT降低(P均<0.05)。治疗后3个月时，眼底出血完全吸收11例、少量残留4例，硬性渗出均减少;瘤体均有不同程度萎缩，无渗漏13例、轻度渗漏2例。结论阿柏西普玻璃体腔内注射联合激光光凝治疗RAM伴发黄斑水肿，可控制RAM发展并提高视力。
-
康复疗养中心防控新型冠状病毒肺炎疫情传播的工作体会
无摘要
-
多期MR血管成像侧支图_评价急性前循环缺血性脑卒中后的功能预后_H_J
侧支循环决定了急性缺血性脑卒中病人脑组织的命运，也影响着治疗效果，利用最佳成像技术准确评估侧支循环的情况对于急性缺血性脑卒中治疗方案的选择至关重要。目的验证由动态增强MRA采集的多期侧支血管影像数据集（MRA侧支图）预测急性缺血性脑卒中功能预后的价值。材料与方法对一项进行中的前瞻性观察研究进行二次分析，对单侧颈内动脉和/或大脑中动脉M1段阻塞或狭窄的急性缺血性脑卒中病人的影像数据进行评估，评估均在症状显示通常有轻度或中度的疾病进展，表现为肺内病变范围和密度增加。原文载于Radiology，2020，295（1）:202-207.武明豪译叶兆祥校○胸部成像2019新型冠状病毒（2019-nCoV）肺炎(DOI:10.19300/j.2020.r0413)Emerging2019NovelCoronavirus(2019-nCoV)Pneumo-nia(DOI:10.1148/radiol.2020200274)F.Song,N.Shi,F.Shan,Z.Zhang,J.Shen,H.Lu,etal.Contactaddress:DepartmentofRadiology,ShanghaiPublicHealthClin-icalCenter,No.2501CaolangRoad,JinshanDistrict,Shanghai201508,出现后8h内完成。数据采集时间为2016年3月-2018年China.e-mail:shiyuxin@shphc.org.cn8月。利用6分制MR急性缺血性脑卒中侧支（MAC）评分，评摘要2019新型冠状病毒（2019-nCoV）肺炎病人的胸部估基于MRA侧支图的侧支分级。为了确定最佳功能预后的CT表现此前未被详细描述。目的探讨新发2019-nCoV肺炎独立预测因素，对年龄、性别、危险因素、基线NIHSS评分、基病人的临床、实验室和影像表现。材料与方法纳入51例行线DWI病变体积、狭窄闭塞部位、侧支分级、治疗方式和早实时逆转录聚合酶链反应检测证实2019-nCoV感染的病人期再灌注进行多因素logistic回归分析。结果共有154例病（男25例，女26例;年龄16~76岁）进行胸部薄层CT扫描。人接受评估[年龄（69±13）岁;男99例]。在多变量分析中，较之后对其影像表现、临床资料和实验室检查结果进行评估。小年龄（OR,0.45;95%CI:0.29~0.70,P<0.001）、较低基线结果51例病人中50例（98%）有与来自中国武汉流行病NIHSS评分（OR,0.85;95%CI:0.78~0.94,P<0.001）、MAC评地区个体的接触史。最常见的临床症状为发热（49/51,96%）分3分（OR,27;95%CI:4.0~179,P<0.001)、MAC评分4分和咳嗽（24/51,47%）。大多数病人外周血白细胞计数正常（OR,17;95%CI:2.1~134,P=0.007）、MAC评分5分（OR,27;（37/51,73%）、中性粒细胞计数正常（44/51,86%）、淋巴细胞95%CI:2.5~306,P=0.007）以及早期成功再灌注（OR,7.5;计数正常（17/51,35%）或减少（33/51，65%）。CT示51例病人95%CI:2.6~22,P<0.001）均与良好的功能预后独立相关，而中39例（77%）表现为纯磨玻璃密度影，38例（75%）表现为侧支循环灌注分级与功能预后呈线性负相关（P<0.001）。结磨玻璃密度影伴网状影和/或小叶间隔增厚。30例（59%）病论利用MRA侧支图评估急性缺血性脑卒中病人的侧支循人磨玻璃密度影伴有实性成分，28例（55%）病人表现为纯实环具有临床可靠性，该影像为病人脑缺血情况提供了具有特性病灶。51例中44例（86%）的病变累及双肺，41例（80%）的异性的决定性信息。病灶位于背侧，44例（86%）病灶位于外周。发病≥5d的病人原文载于Radiology，2020，295（1）:192-201.较发病≤4d者肺内出现更多的实性病灶（431/712和129/612;吴冰杰译叶兆祥校P<0.001）。>50岁的病人比≤50岁者肺内存在更多的实性病○特别报道灶（212/470和198/854;P<0.001）。13例病人的随访CT显示7例（54%）病情改善，4例（31%）病情进展。结论出现发热2019新型冠状病毒（2019-nCoV）的CT影像特征(DOI:和/或咳嗽的病人，CT上可见肺野的外周和背侧有明显的磨10.19300/j.2020.r0412)玻璃密度病灶，同时伴有白细胞计数正常或减低及流行病暴CTImagingFeaturesof2019NovelCoronavirus(2019-露史，高度怀疑感染2019-nCoV肺炎。nCoV)（DOI:10.1148/radiol.2020200230）原文载于Radiology，2020，295（1）:210-217.M.Chung,A.Bernheim,X.Y.Mei,N.Zhang,M.Q.Huang,X.J.Zeng,张耀丹译叶兆祥校etal.Contactaddress:DepartmentofDiagnostic,Molecular,andIntervention-alRadiologyandBioMedicalEngineeringandImagingInstitute,IcahnSchoolofMedicineatMountSinai,NewYork,NY.e-mail:Shan-吸烟者合并或不合并慢性阻塞性肺疾病的肺气肿及空气滞留CT影像的5年进展:来自COPDGene研究的结果(DOI:hong@mail.sysu.edu.cn10.19300/j.2020.r0414)摘要回顾性分析来自中国的21例感染2019年新型冠Five-yearProgressionofEmphysemaandAirTrappingat状病毒（2019-nCoV）且有症状病人的胸部CT，重点是识别最CTinSmokerswithandThosewithoutChronicObstructive366
-
肝移植术后腹腔干动脉狭窄闭塞的诊治附4例病例报告
目的探讨肝移植术后腹腔干动脉狭窄/闭塞的诊断与治疗。方法对4例肝移植术后腹腔干动脉狭窄/闭塞患者的临床资料、诊断及治疗情况进行回顾性分析。结果本组4例肝移植术后腹腔干动脉狭窄/闭塞的患者，临床表现无特异性表现，术后早期常规超声检查均提示:移植后肝动脉阻力指数（RI）<0.5，可疑肝动脉狭窄。后均通过肝动脉CT血管成像技术（CTA）明确诊断（前3例患者诊断腹腔扩张治疗，手术成功率100%，血流完全恢复通畅，术后未出现与介入手术及腹腔干动脉狭窄/闭塞等相关异常。结论对于肝移植术后腹腔干动脉狭窄/闭塞的患者，临床通常无特征性表现，彩色多普勒超声对腹腔干动脉狭窄有早期提示的作用，肝动脉CTA检查可以明确狭窄部位、程度，且一旦诊断明确，介入治
-
不同层次护理专业实习生自主学习能力和评判性思维能力的相关性分析
无摘要
-
复方鱼腥草对高糖高脂联合低剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠干预研究
目的研究复方鱼腥草对高糖高脂联合低剂量链脲佐菌素（型糖尿病大鼠的治疗作用。）大鼠模型。然后，将模型复制成功型糖尿病（方法利用高糖高脂饲料联合腹腔注射低剂量大鼠随机分为罗格列酮组、复方鱼腥草组和模型组，另设正常对照组。各给药组大鼠灌胃给予相应的药物，正周。药物治疗常组与模型组仅给予等量过程中观察大鼠的体质量、饮水量以及饮食量并记录数据，用尾部采血法检测大鼠空腹血糖值（）。治疗周后，大鼠进行腹主动脉取血并且测定其各项血液生化指标。采用不同的试剂盒分别测定空腹胰岛素（）。结果在给予相应药物治疗后，各治疗组糖尿病大鼠的空腹血糖、体质量、水和食物摄入量均有改善。复方鱼腥组能明显降低大鼠血）（P清肌酐（）。复方鱼腥）（P）。组能明显提高结论复方鱼腥草对水平并改善血清大鼠有较好的治疗作用，通过改善各项血液生化指标，降低GLP-1BUNGLP-1<0.01HOMA-IRFBG）以及降低胰岛素抵抗指数（）、尿素氮（水平和）、还原型谷胱甘肽（<0.05FINSGSHGSP）、胰高血糖素样肽）、糖化血清蛋白（4mL·kg-1溶液，每周给药<0.05<0.05<0.05）、血尿酸（<0.05<0.05T2DMFINSSUAFBGGSP水平（P6dScr-1，共）（P）（P，P）和（P8）（FINS2GLP-1和关键词:中图分类号:doi:水平以及胰岛素抵抗发挥作用。R285.5A10.19378/j.issn.1003-9783.2020.06.003文献标志码:型糖尿病;复方鱼腥草;空腹血糖;空腹胰岛素;胰高血糖素样肽;胰岛素抵抗;大鼠1003-9783202006-0637-05（）文章编号:-1（），（，，，），ChinaZHOULihongTANMenghuiWANGHaiyingShanghai201203ratsinducedbyhigh-sugarandhigh-fatdietpluslow-dosestreptozotocinTheInterventionStudyofCompoundHouttuyniaeHerbaonType2DiabeticRatsInducedbyHigh-sugarandFatDietCombinedwithLow-doseStreptozotocinSHAOSaicongShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicineAbstract:ObjectiveToinvestigatethetherapeuticeffectofCompoundHouttuyniaherbaontype2diabeticmellitesT2DMT2DMSTZT2DMmodelratswereratmodelwasestablishedbyhigh-sugarandhigh-fatdietcombinedwithlow-doseSTZRosiglitazonerandomlydividedinto3groupCHgroupwasalsoset.RatsineachtreatmentgroupweregivencorrespondinggroupNormalanormalcontroltheNormalgroupandmodelgroupweregivensamedoseof0.5%sodiummedicinebygavageadministrationcarboxymethylcelluloseCMC-Na6daysaweekfor8weeks.Thebodyweightwaterintakeanddietaryintakeof4ratswereobservedandrecordedat2weredetectedbythethebloodwastakenfromtheabdominalaortaforbloodportablebloodglucosedetection.AttheeighthweekGSHbiochemicaltests.Glucagon-likepeptide-1andglycatedserumproteinwaterandfastinginsulin.MethodsAtfirstCompoundHouttuyniaeherbaFBGreducedglutathionebodyweightweretestedusingcorrespondentcommercialkits.ResultsTheFBG6and8weekGLP-1andfastingbloodsugarmodelgroup），），groupFINSGSPRsg），;（（，，，，（），（（））（），，:（），，（，，（）（）2019-10-02收稿日期:作者简介:邵赛聪，女，硕士研究生，研究方向:中医药减轻糖尿病肾损害研究。硕士研究生，研究方向:中医药减轻糖尿病肾损害研究。向:中医药减轻糖尿病肾损害研究。1090328308@qq.comEmail:mimidiandian1@126.comEmail:wanghaiying_7@hotmail.comA1-GY01020901。基金项目:上海中医药大学预算内项目（）。Emailshaosaicong@163.com:。共同第一作者:周丽红，女，。通信作者:王海颖，博士，硕士研究生导师，研究方Email:。谭梦晖，副教授，博士，研究方向:中药药理与毒理研究。638，，（··），2020JuneuricacidTraditionalChineseDrugResearch&ClinicalPharmacologyVol.31No.6foodintakeofdiabeticratsineachdrugtreatmentgroupwereimprovedaftergivingcorrespondingmedicine.CHgroupcouldsignificantlyreducethelevelsofserumcreatinine<<0.05inserumofrats.AndCHgrouphavetheeffectofimproving0.05thelevelofFINSandGLP-1anddecreasinghomeostasismodelassessmentofinsulinresistance<0.05havebettertreatmenteffectonregulateFBGandelevatetheT2DMratslevelsofserumGLP-1andFINSinT2DMrats.fastinginsulinglucagon-likeKeywords:peptide-1;SUAHOMA-IRCHwhichcanimprovethebloodbiochemicalindexesandinsulinresistanceType2diabetesfastingbloodsugarinsulinresistanceandGSP<0.05.ConclusionCompoundHouttuyniaherbaCompoundHouttuyniaeherbaratsbloodureanitrogen<0.01<0.05<0.05（P，P）），BUN;;Scr）（P）（P）（P）（P），（P;（，（（（），））;;2T2DM(β)型糖尿病（细胞功能受损为主要特征的复杂代谢紊乱疾病）是一种以胰岛素抵抗和胰岛[1-2]，包括肾病、视网膜病变、神经，其中糖尿病肾病就是由型糖尿和大血管相关的并发症同时会出现与微血管病糖尿病引起的慢性肾脏疾病。目前，中国[4]。病患者合并慢性肾脏发病率也逐步上升2[3]糖尿病属于中医范畴里的“消渴症”，中医认为[5]，因先天不足或后该病是“阴虚为本，燥热为标”天饮食不洁、情志不畅导致体内食积，一方面郁而化火，耗伤内阴，表现出多饮多食;另一方面机体缺乏水谷精微物质的濡养而形体消瘦。中医治疗糖尿病一般采用清热解毒、滋阴润燥的药物。2STZ复方鱼腥草是由牛蒡子（具有疏散风热的功效）与鱼腥草（具有清热解毒的功效）两味中药配伍组成，我们制备得到本复方合并液（含挥发油、水提物、醇提物），并探究其对高糖高脂联合低剂量链脲佐菌素型糖尿病大鼠的体质量、饮水量、饮（食量、空腹血糖（）水平、各项血液生化指标及血）水中胰高血糖素样肽（平的影响，以期为开发预防和治疗的新方剂提供科学依据。）、空腹胰岛素（FBG-1GLP-1T2DMFINS）诱导的只（大鼠级雄性，上海西普尔SPF180~220gSD-SCXKSPF20402018-00061材料与方法1.1实验动物龄），体质量有限公司，动物许可证号:饲养于上海中医药大学实验中心境条件为:室温暗周期进行实验。1.2药物及试剂鱼腥草，上海康桥饮片有限公司，批号:;牛蒡子，上海康桥饮片有周必凯实验动物，级实验室。环，明周后，自由进食、饮水。适应性喂养40%~70%120~22℃181108190110，相对湿度12h（沪）、180314180314冰箱保存，公司，批号:20180702生药·30gkg-14℃Sigma20181211）配制，，美国∶、51h倍量水、1/2504h111h50%配比，加入，挥发油提取器提取限公司，批号:。所有药材经上海中医药大学生药教研室副教授吴靳荣鉴定，与《中国药典》规定一致。复方鱼腥草的制备:牛蒡子打粉与鱼腥草按的乙，得挥发酸乙酯，冷浸后过滤，滤液为水提液;油成分;圆底烧瓶冷浸滤渣加，过滤，得醇提液。将水提液、醇提液制成干燥药粉。挥发油、水提物、醇提物混合即得复方鱼腥草，按照成人每日鱼给药量进行换算，大鼠的给药腥草、牛蒡子各剂量为羧甲基纤维素钠周内使用。（0.5%14.5g乙醇回流2h，用倍量5CMC-NaSTZWXBC8740V）、测试盒（批号:）、糖化血清蛋白201904222019051420190527）、还原型谷胱甘肽）均来自南京建成生物工程研究所。GLP-1GSPGSH20190228(Insulin)20190424K100AXP205;羧）、罗格列酮片（爱）、氨基甲酸乙酯（乌来糖，批），国药集团化学试剂有限公司;胰岛检测试测试盒测试盒（批甲基纤维素钠（批号:能，批号:号:素剂盒（批号:（批号:号:1.3仪器型高速中药粉碎机，上海新诺仪器设备有限公司;活力型罗氏血糖仪，上海罗氏制药有限公司;旋转蒸型酶标仪，天津市发器，上海亚荣生化仪器厂;型高速冷冻泰斯特仪器有限公司;离心机，赛多利斯科学仪器有限公司;型自动生化分析仪，日立（中国）有限公司。1.4分组、T2DM大鼠模型复制及给药方法SPF1010%只只，正常组动物模型制备方法，基础饲料∶，模型复制组大鼠给予高糖高脂饲料（CentrisartG-26CT2DM4雄性大鼠分为模型复制组3070%RE-52AA周后，禁食不禁水精密电子天平、只。参考文献717012h20%糖）饲养脂肪∶报道的K3SD40级[6]年6月第20203130mg·kg-18h中药新药与临床药理1%STZ3d103010（后禁食不禁水），给予糖水以防低血，对大鼠尾部进行采血，并用≥11.1mmol·L-13腹腔注射糖;血糖仪测定空腹血糖。当空腹血糖时，并出现多饮、多食、多尿即糖尿病模型复制成组:模型组功。将造模成功的只、罗格列酮组只。正常组给正常饲料，其余各组均给高糖高脂饲料。罗格列酮组、复方鱼腥组分别给予罗格列酮（），正常组与模型组仅给予等量灌胃给药，每周给药只大鼠随机分为只、复方鱼腥草组0.5%CMC-Na0.075mg·mL-11.125g·mL-1）、复方鱼腥草合剂（周。上述药物均用4mL·kg-1，共108以配制而成。0.5%CMC-Na1.5样本收集治疗第20%5℃1h后，乌来糖腹腔注射，腹主动脉取血，于室温静置，，冷冻离心机于4000r·min-1周，禁食不禁水离心、8h15min6d8与21FBGSUAGSHGSHBUN、血尿酸（）、血尿素氮（ScrGSPGSP）测试盒，还原型谷胱甘肽（取上层血清，用于生化指标检测。1.6一般情况观察每日观察记录大鼠饮食量、饮水次体质量并记量、精神状态、活动情况。每周测录，采用尾部采血法，每周用血糖仪检测大鼠的空腹血糖。1.7生化指标检测大鼠经腹主动脉取血后，血液样品用自动生化分析仪检测）、血肌）水平。采用糖化血清蛋白酐（）测试盒测定血（中试水平。并计算胰岛剂盒分别测定血中素抵抗指数（空腹胰岛素（1.8统计学处理方法用统计软件分析实s）形式表示。各组验数据，数据以均值LSD数据通过方差齐性检验，组间比较采用单因素方差分析（法）;药物间的交互效应用分析采用析因设计方差分析（表示差异有统计学意义。±One-WayANOVAGLP-1HOMA-IR=/22.5mmol·L-1SPSS21.0±FINSHOMA-IR×FactorialdesignANOVA、），公式为:含量。采用胰岛素测试盒与）加最小明显差数法（mU·L-1GLP-1空腹血糖（标准差（x0.05）。P<））。6期卷第639··0.05STZ2结果2.1大鼠一般情况观察在模型复制期间，正常组大鼠精神状况良好，双目有神，反应敏捷，毛发有光泽，无糖尿病临床表现，大鼠体质量逐渐增加。模型复制组大鼠注射低剂量后，出现生长迟缓、身体消瘦、精神萎靡、倦怠懒动、嗜睡、反应迟钝、臀尾出汗潮湿、臀毛枯黄、拉尾排便，伴有多食、多饮、多尿等典型的糖尿病临床表现，正常组大鼠则无该现象。2.2体质量、饮食量、饮水量见表。从体质量来看，刚刚模型复制成功之后，与正常组比，各组大鼠体质量明显上升（P周期间，模型组体质量较正常组明显下降（P），给药组大鼠体质量较模型组呈缓慢增长趋势（P4~8<0.05<0.05）;在给药1~3<4~8<0.05）。从饮食量和饮水量来看，与正常组比，模型）;与模型组比，给，P<0.05<0.014~6<周内每日饮食量明显减少（P组明显增加（P药组大鼠在0.05和、、、，P，PScr4~52~8GSPBUN<0.01<0.05<0.01），罗格列酮组在），罗格列酮组能明显降低血清中），复方鱼腥草组在）。周内每日饮水量明显减少周内对饮水量均明<0.05（P显降低（P2.3空腹血糖及血液生化指标见表SUA。与正常组比，模型组的空腹血糖、明显增加（P）;与模型组比较，复方<0.05鱼腥草组与罗格列酮组的空腹血糖水平明显降低ScrSUA（P、）;复方鱼腥草组能明显降0.012.4血清GLP-1与FINS水平以及胰岛素抵抗指数6FINS水平以见表及水平明显升高（P）;与模型组比较，复方鱼腥草组与罗格列酮组的血清水平均明显升高（P），且复方鱼腥组和罗格列酮组均能明显降低<0.01水平明显降低（PGLP-1<0.05HOMA-IRGLP-1HOMA-IRFINS。与正常组比，模型组的血清BUN<<0.05SUABUN含量（P、<0.05<0.01<0.05这一指标（P低血清中水平以及）水平。GSPScr，P），）。（P、、表1各组对2型糖尿病模型大鼠体质量的影响（xTable1Theeffectsofeachgrouponbodyweightoftype2diabeticrats（x;n）正常组模型组罗格列酮组复方鱼腥草组注:与正常组比，#P模型复制前172.00±2.83176.33±1.51172.67±3.67176.00±1.26<0.05;与模型组比，模型复制后302.00±3.16349.17±23.13#355.50±7.31#360.00±12.58#*P<0.05±gs，=102周后给药353.80±8.41374.83±12.45408.50±15.83#*383.83±9.15#±周后给药=104gs，;n）382.20±15.90368.17±17.42#439.00±23.07#*424.33±12.94*6周后给药433.40±20.01381.00±20.28#436.50±28.08*450.50±13.58*8周后给药440.60±21.37373.17±19.97#470.50±42.78*458.67±10.39*TraditionalChineseDrugResearch&ClinicalPharmacology640··正常组模型组罗格列酮组复方鱼腥草组g·d-1Theeffectsofeachgrouponfoodintakeoftype2表2各组对2型糖尿病模型大鼠进食量的影响（x=10）Table2ndiabeticratss，±;（x=10）4周后给药;n29.35±1.9061.32±7.42#52.00±3.08#*43.33±2.91#*±周后给药g·d-1s，224.20±1.5145.15±2.66#41.11±5.83#39.83±9.05#<0.05#P8周后给药23.54±1.3743.25±1.97#44.21±4.77#46.67±1.29#6周后给药21.26±2.1152.31±2.28#43.63±8.08#*42.50±3.58#*<0.05*P注:与正常组比，;与模型组比，2020JuneVol.31No.6±mL·d-1Theeffectsofeachgrouponwaterintakeoftype2表3各组对2型糖尿病模型大鼠饮水量的影响（x=10）Table3ndiabeticratsmL·d-1s，±，，;周后给药（xs，245.32±7.42173.03±10.45##169.10±10.83##100.93±5.65##**<0.05#P=104周后给药;n）41.20±4.90283.27±13.12##221.35±13.07##*125.43±7.90##**<0.01##P，6周后给药64.40±10.01267.02±9.48##245.47±15.08##*130.24±3.58##**8周后给药55.60±11.38142.61±9.95##100.52±12.78##*86.21±10.19#*<0.05*;与模型组比，P，表4各组对2型糖尿病模型大鼠空腹血糖的影响（xTable4TheeffectsofeachgrouponFBGintype2diabeticratss，正常组模型组罗格列酮组复方鱼腥草组注:与正常组比，#P模型复制前5.44±0.215.45±0.145.41±0.245.33±0.18<0.05##P，<0.01模型复制后5.54±0.5617.94±6.24##17.67±9.25##16.60±4.98##*P;与模型组比，<0.05±（x2mmol·L-1±;ns，5.56±0.2920.56±1.29#10.43±1.08#*8.16±1.13#*给药周后±=10s，n正常组BUN/表5各组对2型糖尿病模型大鼠血液生化指标的影响（xTable5Theeffectsofeachgrouponbloodbiochemicalparametersintype2diabeticratsScr/μmol·L-132.33±4.0439.33±5.13#26.71±2.63*33.63±5.07*<0.05）SUA/μmol·L-154.00±16.0586.67±10.21##60.17±20.44*60.00±16.69*mmol·L-14.64±0.1512.98±1.87##8.06±1.41*7.72±0.87*<0.01复方鱼腥草组<0.01<0.05罗格列酮组模型组（））（）（注:与正常组比，#P##P，;与模型组比，*P**P，（x6周后给药5.80±0.3924.52±0.88#10.40±8.50#*6.28±0.82*8周后给药5.63±0.3023.82±1.09#10.20±2.43#*12.10±1.72*（=10±s，n）mmol·L-1GSP/0.48±0.050.75±0.05##0.71±0.05##0.55±0.08**））（GSH/μmol·L-187.21±11.0085.59±22.0493.04±10.9478.37±15.94正常组模型组罗格列酮组复方鱼腥草组<0.01=10mmol·L-1）注:与正常组比，**P周后给药=10;n）45.32±0.6424.02±4.22#9.20±2.76#*7.78±1.08*）s，nTheeffectofeachgrouponGLP-1表6各组对2型糖尿病模型大鼠血液中GLP-1与FINS±含量及HOME-IR的影响（xTable6FINSandHOME-IRintype2diabeticratsGLP-1/pmol·L-129.37±3.9911.95±3.15##16.49±3.51*19.61±6.93*<0.05##=10=10±s，n）mU·L-1FINS/100.82±22.5959.25±15.62##81.48±11.60*80.69±18.01*，HOME-IR25.23±1.1670.00±22.44##46.81±13.56*43.47±16.72**复方鱼腥草组<0.05<0.01罗格列酮组正常组模型组（x（）（）注:与正常组比，，P;与模型组比，P#P3讨论T2DMSTZSTZT2DM2由高脂高糖联合低剂量）大鼠模型是一种新的诱导型糖尿病（模型。其首先用高脂高糖引起大鼠胰岛素抵抗，然后再结合注射小剂量，在这种胰岛素分泌不受到完全影响的情况下，最后导致大鼠。采用高脂诱导可获得重复性、高糖膳食结合小剂量注射细胞轻度功能障碍STZβ[6]2稳定性较好的型糖尿病实验大鼠模型。[7-8]2[9][12][10]。ScrUAGSHGSHBUN。血清中[11]。同时，通过检测血清中从中医的角度来看，伴有高尿酸血症的型糖，并伴随水平与胰岛素抵抗呈水平的升高与胰岛素使尿病患者证候多见以痰（湿）热互结型为主高脂血症与胰岛素抵抗，且明显正相关用风险增加呈正相关可以了解糖尿病的肾损害程度是存在于细胞内的天然抗氧化物质，糖尿病合并微血管并发症的患者更容易出现水平是糖尿病疗效评价的监测指标和糖尿病血管病变。本研究发现通过复方鱼腥草干预的危险因素之一治疗，可改善型糖尿病大鼠的体质量、进食量和、饮水量，并且明显降低模型大鼠血清中的水平。但实验中显示复方鱼腥草组在第周血糖有所回升，因此可见复方药不能够长期有效地控制血糖，实验后期研究可联合应用西药通过多靶点、多通路、多环节地对血糖进行长效控制。SUA8。而血清中的BUNGSPGSP缺乏症Scr2、、[14][13]中药新药与临床药理20206年月第316卷第期T2DMHOMA-IRGLP-1[17][15][16]。。γ胰岛素分泌相对不足与胰岛素抵抗是要特征岛素分泌和餐后胰岛素的释放反映胰岛素抵抗以及受体敏感改善情况通过与过氧化酶体增殖活化受体的主是一种促胰岛素因子，可以促进胰常用来。罗格列酮（peroxisomeproliferator-activatedreceptor）结合并激活这一受体，增加外周组织对胰岛素敏感而增强对葡萄糖的摄取以及利用，减少肝糖原输出，最终改善。我们发现复方鱼腥草组除了的水平，同时能降这一指标，说明复方鱼腥草可以改善的胰岛素抵抗。综上所述，复方鱼腥草干预治可明显提高血清中低HOMA-IRPPAR-γ的胰岛素抵抗GLP-1T2DMT2DMFINS，和[18]UA诱发的BUNGLP-1疗可以改善由高脂高糖结合小剂量大鼠的空腹血糖水平和胰岛素抵抗，并降低血清中和作用。水平，从而起到治疗和预防水平以及提高血清中的型糖尿病的GSP2、和T2DMFINSSTZ参考文献:[1]HURF，SUNXB.DesignofnewtraditionalChinesemedicineherbalformulaefortreatmentoftype2diabetesmellitusbasedonnetworkpharmacology[J].ChineseJournalofNaturalMedicines2017436-441.，JIAW.Causesoftype2diabetesinChina[J].The15[2]MARC，（6LINX）:LancetDiabetes&Endocrinology，，2014212980-991.，，，[3]AFSARBdiabetesDiabetes&MetabolicSyndrome2017ELSURERR.Increasedrenalresistiveindexintype2mechanismsandfuturedirections[J].ClinicalrelevanceClinicalResearch&Reviews11）:4（，::，，（）:[J].中国科学:[J].四川中医，曹东维，朱大龙我国糖尿病患者合并肾病的现状866-871.生命科学，，（）:孙玉姣，魏华“釜底加薪”在糖尿病辨治中的运用201937734-37.（，）:NOLLC[6]BARRIEREDAROUSSYGetal.Combinationofhigh-fat/high-fructosedietandlow-dosestreptozotocintomodellong-termtype-2diabetescomplications[J].ScientificReports822018424.，，，，，（）:[4][5]291-296..4882018.641··[7][9]290-93.20144.[J].WANGY[J].），邵俊伟，蔡逊高脂饮食联合链脲佐菌素建立型糖尿病大鼠模型，[8]GUOXX的研究进展WANGK中国实验动物学报，etal.Stabilityofatype2diabetesratmodelinducedbyhigh-fatdietfeedingwithlow-dosestreptozotocininjection[J].JournalofZhejiangUniversity-SCIENCEB559-569.201819）:7（，，，，（）:.20191114221-23.魏桂梅，赵璐，任锟血尿酸水平与型糖尿病中医证型分析，，，:，，，，，（，（（，）:）:21.中医临床研究，SAINIVTINGTINGL1BENJAMINB[10]MOUZQ.Thestudyofthecorrelationbetweenserumuricacidandinsulinresistanceinmiddle-agedandelderlyhospitalizedpatientswithtype2diabetes[J].ChinaMedicalAbstractsInternalMedicine342017[11]YANXetal.Bloodureanitrogenandriskofinsulinuseamongpeoplewithdiabetes[J].DiabetesandVascularDiseaseResearch409-416.etal.AntidiabeticandantioxidantpotentialofEmblicaofficinalisGaertn.leavesextractinstreptozotocin-inducedtype-2diabetesmellitus(T2DM)rats[J].JournalofEthnopharmacology201815(5)SHARMAS[12]NAINP[13]LUTCHMANSINGHFK13(6)[14]RODRIGUEZ-CAPOTEKetal.Glutathionemetabolismintype2diabetesanditsrelationshipwithmicrovascularcomplicationsandglycemia[J].ThePublicLibraryofScienceONEetal.AnalyticalevaluationofthediazymeglycatedserumproteinassayonComparisonofresultsagainstHbA1cforthesiemensADVIA1800diagnosisandmanagementofdiabetes[J].JournalofDiabetesScienceandTechnologye0198626.TOVELLK1BENNETTFI1422012HSUJWHOLMESD192-199.65-71.20182015）:9，，，，，:，，，:，，（张晗，张睿，章莹，等小檗碱对型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影22，（）:18352019DEACONCF）:，（2027-2029.etal.Secretionofwhatisup，）2011.，154intype2diabetes10-18.2382019）:，（针药并用对早期:，型糖尿病患者胰992-996.9岛素抵抗指数的影响上海针灸杂志，，（）:于文君罗格列酮治疗型糖尿病患者的安全性、有效性与经济性.[D].2017.的系统评价济南:山东大学，[J].响[16]NAUCKMA中国临床药理学杂志，VARDARLII，glucagon-likepeptide-1whatisdown?[J].Diabetologia（，GLP-1葛玲玲，蔡德锋，邢建平，等，.[J].2[15][17][18]（编辑:修春）
-
他山之石稿约
翻译，旨在为广大读者提供国际研究资讯，了解学科前沿动态。现面向广大读者征稿。1.原文选择范围:涉及创伤或急诊内容的英文刊物文章摘要（2篇起，不超过10篇）。2.格式:每篇摘要译文按照以下顺序书写，若原文无
-
c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束逆转脑胶质瘤对多西他赛的耐药性
目的:构建c(RGDyk)环肽修饰的纳米胶束包载多西他赛（DTX），体外评价其逆转人脑胶质瘤U87细胞对DTX耐药性。方法:以泊洛沙姆-188（PL-188）为原材料，经琥珀酸酐羧基化后，键合c(RGDyk)环肽，合成c(RGDyk)-PL-188靶向材料并进行结构确证;c(RGDyk)-PL-188为包裹材料，利用纳米共沉淀法制备载DTX的纳米胶束[c(RGDyk)DTX-NPs]并进行处方优化筛选;透射电镜（TEM）、差示扫描量热法（DSC）以及动态透析法对c(RGDyk)DTX-NPs形态、药物晶型和体外药物释放行为进行详细表征;体外CCK8细胞存活率检测、细胞摄取以及肿瘤球生长抑制，评价c(RGDyk)DTX-NPs对DTX耐药的人脑胶质瘤U87细胞逆转效果。结果:1H-NMR和FT-IR表明成功合成c(RGDyk)-PL-188材料，该材料能自发组装成粒径为115.6nm的胶束;c(RGDyk)-PL-188/DTX质量比10:1时，该胶束对DTX载药量可达7.88%±0.02%，包封率高达85.50%±2.78%，粒径稍增大，为（159.2±0.2）nm，Zeta电位为（-19.2±0.4）mV，TEM显示具有球形微观结构;体外释放表明c(RGDyk)DTX-NPs展现缓释释放行为，48h内DTX累积释放仅为78%;细胞摄取表明c(RGDyk)-NPs能特异靶向耐药的人脑胶质瘤U87细胞，显著提高荧光探针ICG在细胞内荧光分布，其靶向性被游离c(RGDyk)竞争抑制;与DTX溶液和DTX-NPs相比，c(RGDyk)DTX-NPs对DTX耐药的人脑胶质瘤U87细胞具有更强的细胞毒性;体外U87人脑胶质瘤细胞球模型研究表明c(RGDyk)DTX-NPs能更有效渗透至肿瘤球深部，抑制肿瘤球生长。结论:c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束能有效装载DTX，具有较高的载药量和包封率，能特异性靶向人脑胶质瘤U87细胞，逆转其对DTX的耐药性。[关键词]多西他赛;胶束;泊洛沙姆;神经胶质瘤;细胞球;多药耐药[中图分类号]R94DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2019.11.001Thereversingeffectofc(RGDyk)modifiedNano-micellesonthedocetaxel-resistanceofgliomaWUQilong1,CAIJinhua1,XUHelin2,LIHui1,ZHAOYingzheng2,CHENBin1.1.DepartmentofUltrasonography,theFirstAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325015,China;2.SchoolofPharmaceuticalSciences,WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325035,ChinaAbstract:Objective:Topreparec(RGDyk)cyclicpeptidemodifiedNano-micellesencapsulatingdocetaxel(DTX)andtoevaluateitsabilitytoreversetheresistanceofU87gliomacellsagainstDTX.Methods:UsingPoloxamer188(PL-188)asrawmaterial,aftercarboxylationofsuccinicanhydride,thec(RGDyk)cyclicpeptidewasbondedtosynthesizec(RGDyk)-PL-188targetingmaterialanditsstructurewasconfirmedby1H-NMRandFT-IR.c(RGDyk)-PL-188wasusedasthecoatingmaterial;theNano-micellesencapsulatingDTX[c(RGDyk)DTX-NPs]werepreparedbyNanocoprecipitationmethodandtheprescriptionwasoptimized.Trans-missionelectronmicroscope(TEM),differentialscanningcalorimetry(DSC)anddynamicdialysismethodwereusedtocharacterizethemorphology,drugcrystalformanddrugreleasebehaviorofc(RGDyk)DTX-NPsinvitro.CCK8cellularviabilityassayinvitro,cellularuptakeandU87cellsspheroidsgrowthinhibitiontestwereappliedtoevaluatethereversaleffectofc(RGDyk)DTX-NPsonhumangliomaU87cellsresistancetoDTX.Results:1H-NMRandFT-IRshowedthatc(RGDyk)-PL-188wassuccessfullysynthesized,whichcouldbespontane-本文引用:吴其隆,蔡锦华,徐荷林,等.c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束逆转脑胶质瘤对多西他赛的耐药性[J].温州医科大学学报,2019,49(11):781-790.·论 著·-782-第49卷温州医科大学学报第11期成胶束的能力以及其对DTX的包载性能，评价其对耐药的人脑胶质瘤U87细胞的靶向性与抗肿瘤效果。1材料和仪器1.1材料DTX购自上海龙翔生物医药开发有限公司;N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）购自上海阿拉丁公司;2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐（CCK8）购自日本株式会社同仁化学研究所;c(RGDyk)环状短肽购自上海吉尔生化有限公司;C6细胞购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所;耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞购自北京NTCC典型培养物保藏中心;DMEM培养基、RPMI1640培养液、胰酶、胎牛血清购自美国Gibco公司;PL-188、DAPI试剂盒购自美国Sigma公司。1.2仪器FD-1C冷冻干燥机（北京德天佑有限公司），JEM-2100F透射电子显微镜（日本电子株式会社），SpectraMaxM3酶标仪（美国MolecularDevices公司），马尔文纳米粒度电位仪ZetasizerNanoZSP（英国Malvern公司），DSC差示扫描量热仪（瑞士MettlerToledo公司），Nikon正置荧光显微镜、Nikon倒置荧光显微镜（日本Nikon公司）。2方法2.1c(RGDyk)-PL-188聚合物的合成与结构确证两步法合成c(RGDyk)-PL-188聚合物:首先，合成羧基化PL-188，称取9gPL-188、0.54g琥珀酸多西他赛（docetaxel，DTX）是由欧洲浆果紫杉的针叶中提取的化合物半合成的紫杉醇衍生物。其作用机制是通过促进微管双聚体装配成微管，并且防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于G2和M期，抑制细胞的进一步分裂，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖[1-2]。其对于乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、胃癌、胰腺癌、软组织肉瘤均具有一定疗效[3]。然而DTX存在水溶性差、脂溶性不强、体内循环时间短以及耐药性等缺点，限制了其在临床上的广泛应用。目前临床上使用的DTX注射液是添加了非离子表面活性剂，如乙醇和聚山梨酯80（吐温80），而这些表面活性剂容易导致骨髓抑制、过敏反应、神经毒性以及溶血等不良反应[4-5]。为了克服以上不足，已有报道将DTX制成脂质体、纳米粒、水凝胶、聚合物胶束等用于疾病的诊断和治疗[6-9]。本研究以泊洛沙姆188（PL-188）为纳米材料，因其在结构上是一种三嵌段的聚氧乙烯和聚氧丙烯共聚物（PEO-PPO-PEO），以中间的PO链为疏水嵌段，两端的EO链为亲水嵌段，该聚合物能自发组成纳米胶束。同时，已有报道证实泊洛沙姆可以逆转多种类型肿瘤的耐药性，使一线化疗药物对耐药肿瘤细胞的毒性增加2-3倍[10-11]。环状c(RGDyk)短肽作为细胞整合素及其配体相互作用的识别位点，能与C6脑胶质瘤细胞以及人脑胶质瘤U87耐药细胞上过表达的整合素αvβ3特异性结合[12-13]，提高化疗药物对肿瘤细胞的杀伤毒性。本实验以PL-188为原材料制备羧基化PL-188，将c(RGDyk)与其键合，构建c(RGDyk)-PL-188靶向新材料。探索c(RGDyk)-PL-188自组装形ouslyassembledintomicelleswithmeanparticlediameterof(115.6±0.2)nm.Whenthemassratioofc(RGDyk)-PL-188/DTXis10:1,drugloadingcontentanddrugloadingefficiencyforDTX-loadedmicelleswerehighupto7.88%±0.02%and85.5%±2.78%,respectively.DTX-loadedmicelleshadameandiameterof(159.2±0.2)nmandzetapotentialof(-16.8±0.8)mV,exhibitingthesphericalshapedeterminedbyTEM.InvitroDTXreleaseshowedthatc(RGDyk)DTX-NPsexhibitedsustained-releasebehaviorandthecumulativereleaseofDTXwasonly78%within24hours.Cellularuptakeindicatedthatc(RGDyk)-NPscouldspecificallytargetdrug-resistanthumangliomaU87cells,whichsignificantlyincreasedtheintracellularfluorescencedistributionoffluorescentprobeICG,anditstargetabilitywasinhibitedbyfreec(RGDyk)solution.ComparedwithDTXsolutionandDTX-NPs,c(RGDyk)DTX-NPshadthestrongercytotoxicitytodrug-resistanthumangliomaU87cells.ThestudyofU87humangliomacellsspheroidsmodelinvitroshowedthatc(RGDyk)DTX-NPscouldpenetrateintothedeeppartofthetumorspheroidsmoreeffectivelyandinhibitthegrowthofthetumorspheroids.Conclusion:DTXisefficientlyencapsulatedinc(RGDyk)cyclicpeptidemodifiedNano-micelleswithhighdrugloadingcontentanddrugloadingefficiency,specificallytargetingU87humangliomacellsandreversingtheirresistanceagainstdocetaxel.Keywords:docetaxel;micelles;poloxamer;glioma;cellsspheroids;multi-drugsresistance-783-第11期第49卷酐、0.27g4-二甲基氨基吡啶并量取0.5mL三乙胺共溶于30mL1，4-二恶烷中，磁力搅拌使其完全溶解并在室温下搅拌24h。将混匀后的液体加入至透析袋内（透析膜截留相对分子质量为3500Da），用蒸馏水透析72h，前24h每隔6h换水1次，后48h每隔12h换水1次，以除去混合液中的有机溶剂，冻干获得羧基化PL-188（CT-P188）粉末;其次，合成c(RGDyk)-PL-188聚合物，称取0.1g吗啉乙磺酸（MES）溶解在10mL蒸馏水中并搅拌10min，向溶液中加入0.4gEDC和0.2gNHS搅拌直至完全溶解，加入0.3g羧基化PL-188和0.02gc(RGDyk)于室温下磁力搅拌24h，经透析和冻干获得c(RGDyk)-PL-188聚合物粉末。利用FT-IR和1H-NMR对羧基化PL-188和c(RGDyk)-PL-188聚合物进行结构确证。FT-IR分析以KBr粉末压片制样，KBr空白片扣除背景，扫描范围4000~800cm-1。分辨率为4cm-1，谱峰读数精度为0.01cm-1。1H-NMR分析在BrukerAV-600核磁共振仪上完成，所有样品经过DMSO-d6处理。2.2c(RGDyk)DTX-NPs的制备与筛选采用纳米沉淀法制备载DTX的靶向纳米胶束[c(RGDyk)DTX-NPs]，称取100mgc(RGDyk)-PL-188和一定量的DTX，溶于3mL乙腈中，磁力搅拌使其完全溶解，作为有机相;在剧烈搅拌下，将5mL蒸馏水缓慢滴入有机相中（约30min）并继续搅拌30min使其混合均匀。将混匀后的液体加入至透析袋内（透析膜截留相对分子质量为3500Da），用蒸馏水透析24h，开始每隔2h换水1次，后每9h换水1次以除去混合液中的有机溶剂，5000r/min离心除去药物沉淀，获得上清液，即为载DTX纳米胶束c(RGDyk)DTX-NPs。固定材料每次用量为100mg，选取不同总投药量（2、5、10、20mg），以考察最大的载药量和包封率。同样，称取100mgPL-188和上述优化后的DTX投药量按照相同的方法制备DTX-NPs作为后续实验的对照组。2.3载药量及包封率的测定高效液相色谱法（HPLC）测定药物载药量和包封率，量取500μLc(RGDyk)DTX-NPs至5mL容量瓶中，加入乙腈，超声波破坏胶束，乙腈定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，进样量为20μL，采用Agilent1200高效液相色谱仪测定。HPLC条件:XTerraRP18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相:乙腈/水（47:53，v/v）;流速1.0mL/min，检测波长为230nm，柱温25℃。通过以下公式计算载药量及包封率。2.4c(RGDyk)DTX-NPs的表征动态光散射激光粒度测定仪（dynamiclightscattering，DLS）对空白纳米胶束，c(RGDyk)DTX-NPs进行粒径和Zeta电位的测定。纳米胶束水溶液过0.45μm膜以除去灰尘，经过适当稀释后，于常温条件下固定激光波长为632.8nm，散射角为90°测定其粒径以及Zeta电位。透射电镜（transmissionelectronmicroscope，TEM）检测纳米胶束形态，取空白纳米胶束或载药纳米胶束滴于铺有碳膜的铜网上，以无纤维滤纸从铜网边缘吸掉多余液体，滴入2%磷钨酸染色，自然晾干2d，置于TEM中以200kV加速电压检视、拍照。差示扫描量热法（differentialscanningcalorimetry，DSC）分析纳米胶束内药物分散状态，取适量c(RGDyk)DTX-NPs冻干样品进行DSC分析，起始温度为0℃，升温速度为5℃/min，终止温度为250℃。c(RGDyk)-PL-188材料、DTX粉末、c(RGDyk)-PL-188和DTX的物理混合物同法测定，对照比较确定药物分散状态。2.5c(RGDyk)DTX-NPs稳定性为了考察c(RGDyk)DTX-NPs的粒径与载药稳定性，c(RGDyk)DTX-NPs置于pH7.4PBS溶液和含有胎牛血清白蛋白（BSA）的pH7.4PBS中于37℃环境中振摇孵育不同时间，3000r/min离心5min，取上清液适量按照2.3和2.4所述方法分别测定c(RGDyk)DTX-NPs的药物浓度和粒径。2.6c(RGDyk)DTX-NPs体外药物释放采用动态透析法对游离DTX溶液以及c(RGDyk)DTX-NPs的体外释药行为，取1mLc(RGDyk)DTX-NPs加入至透析袋内（透析膜截留相对分子质量为3500Da），扎紧并密封两端，放置在含有0.5%吐温-80的50mLpH7.4PBS介质中，置水浴摇床于37℃，120r/min震摇，分别于2、4、6、8、10、12、24h取1mL释放介质，并补充1mL相应的新鲜释放介质，按照2.3所述的HPLC方法进行检测，计算累积释放百分数，绘制释放曲线。2.7二维胶质瘤细胞模型评价2.7.1胶质瘤细胞的培养:以C6胶质瘤和耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞株为模型，考察c(RGDyk)DTX-载药量（%）=测得药物的质量×100%（公式一）测得药物的质量+聚合物质量包封率（%）=测得药物的质量×100%（公式二）制备时加入药物量吴其隆，等:c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束逆转脑胶质瘤对多西他赛的耐药性-784-第49卷温州医科大学学报第11期NPs体外抗肿瘤效果。C6细胞培养条件为:使用含有10%胎牛血清的高糖DMEM培养基于温度为37℃、CO2浓度为5%的细胞培养箱中培养。耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞株培养条件为:使用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基加入1μg/mLDTX以维持细胞耐药性，于实验2周前停药，培养温度为37℃、CO2浓度为5%。待培养皿中细胞融合率达85%，使用含有0.25%EDTA的胰酶至培养皿中消化，对其进行传代培养。2.7.2CCK8法细胞毒性实验:CCK8试剂盒检测C6胶质瘤和耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞株经不同浓度的DTX溶液、DTX-NPs、c(RGDyk)DTX-NPs处理后的细胞活性。将对数生长期的细胞消化后，用培养基稀释至5×103个/mL细胞密度，经过吹打后，以100μL/每孔将细胞悬液接种在96孔板内，将96孔板置于细胞培养箱中培养24h使细胞贴壁。待贴壁后，每孔加入100μL上述不同浓度的不同药物的新鲜培养介质，并设置一不做任何处理的空白对照组。继续培养48h后，将96孔板取出，吸出所有培养基，用PBS清洗1次，每孔加入90μL新鲜培养基和10μLCCK8的混合液，于培养箱中继续培养2h，使用SpectraMaxM3酶标仪测定450nm处的吸光度。按照如下公式计算细胞的存活率（%）。A加药:具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度;A空白:具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度;A0加药:具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度。2.7.3c(RGDyk)DTX-NPs细胞靶向性评价:为了观察c(RGDyk)DTX-NPs对耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞的靶向性，以荧光探针吲哚菁绿（ICG）代替DTX制备荧光标记的c(RGDyk)ICG-NPs。耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞株以1×105个/mL密度接种于含有载玻片的6孔板中，置于细胞培养箱中培养24h贴壁后，移去培养液，加入ICG-NPs、c(RGDyk)ICG-NPs，置于细胞培养箱中继续培养2h，移去含药细胞培养液，加入4℃1mLPBS终止细胞摄取，并冲洗细胞3次，每次5min。加入4%多聚甲醛于4℃环境下固定细胞20min，吸出固定液，继续用1mLPBS冲洗细胞3次，每次5min。加入0.5%曲拉通（Triton）于室温下通透细胞15min，PBS冲洗3次，加入含有DAPI染液（1mg/mL）的抗荧光猝灭剂，封片后于正置荧光显微镜下观察细胞摄取情况。另外，耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞先经c(RGDyk)封闭，后加入c(RGDyk)ICG-NPs孵育2h后，确定细胞内荧光分布变化，进一步确证其靶向性。2.8脑胶质瘤细胞球评价2.8.1c(RGDyk)ICG-NPs对脑胶质瘤肿瘤球生长抑制:取对数生长期的DTX耐药人脑胶质瘤U87细胞，0.25%胰酶消化后吹打成单细胞悬液，用无血清培养基、含链霉素100μg/mL、青霉素100U/mL、bFGF20ng/mL、EGF20ng/mL以及B27添加物（1×）的DMEM/F12培养液对细胞进行重悬，以每孔1×104个细胞的浓度分别接种于低吸附塑料48孔板，并置于温度为37℃、CO2浓度为5%的细胞培养箱中培养，根据细胞生长的速度以及培养液的颜色变化更换培养液。选择大小均匀、圆整致密的肿瘤球，分别加入DTX溶液（10μg/mL）、c(RGDyk)DTX-NPs（相当于10μg/mLDTX）对肿瘤球进行处理，并以PBS溶液处理的肿瘤球作为对照组。于3、6、10d后于倒置显微镜下观察U87胶质瘤肿瘤球的体积变化。2.8.2c(RGDyk)ICG-NPs对脑胶质瘤细胞球渗透性:按照2.8.1方法培养DTX耐药的人胶质瘤U87细胞球，7d后于显微镜下观察细胞球的形态与大小，取大小均匀，圆整致密的细胞球进行如下实验。每孔加入ICG-NP或c(RGDyk)ICG-NPs，于37℃培养箱孵育24h，孵育完毕后移除培养液，用4℃PBS冲洗3次，4%多聚甲醛固定30min，PBS再次冲洗3次，置于载玻片上，抗荧光猝灭剂封片后通过激光共聚焦显微镜断层扫描并拍照，观察c(RGDyk)ICG-NPs对脑胶质瘤细胞球渗透深度。2.9统计学处理方法采用SPSS22.0统计软件进行分析。计量资料以±s表示，两两比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。3结果与讨论3.1c(RGDyk)-PL-188聚合物合成和结构确证c(RGDyk)-PL-188聚合物经两步法合成，首先以PL-188为原材料经琥珀酸酐羧基化后，合成制备得到CT-P188;CT-P188端羧基经EDC/NHS活化后与c(RGDyk)环肽的氨基缩合，合成制备得到c(RGDyk)-PL-188靶向材料。FT-IR和1H-NMR对CT-P188和c(RGDyk)-PL-188结构进行确证，结果如图1。相比PL-188的FT-IR谱图（见图1A），CT-P188的FT-IR结果细胞存活率（%）=A加药-A空白×100%（公式三）A0加药-A空白-785-第11期第49卷除了出现PL-188骨架相关峰如3300cm-1（OH伸缩振动），2852cm-1（CH2伸缩振动）以及1100cm-1（C-O-C伸缩振动），还出现了COOH相关的特征峰如1735cm-1（C=O伸缩振动）。相比之下，c(RGDyk)-PL-188的FT-IR结果除了出现CT-P188相关峰外，还出现了c(RGDyk)相关的特征峰如1650cm-1（酰胺I带）和1580cm-1（酰胺II带）。相似，CT-P188的1H-NMR图谱（见图1B）除了出现PL-188骨架相关峰如3.5ppm（-OCH2CH2O-）以及1.3ppm（-OCH2CH2CH2O-）外，还出现了琥珀酸相关特征峰如2.5ppm（O=C-CH2CH2-C=O）。相比之下，c(RGDyk)-PL-188的1H-NMR图谱出现了c(RGDyk)相关峰如2.5~3.2ppm峰。A:FT-IR;B:1H-NMR图1c(RGDyk)-PL-188聚合物结构表征3.2c(RGDyk)DTX-NPs的制备与处方筛选c(RGDyk)-PL-188聚合物和DTX共溶于DMSO，在搅拌下滴入蒸馏水，自发纳米沉淀自组装，制备载DTX的纳米胶束[c(RGDyk)DTX-NPs]。控制制备过程中所用DMSO体积，聚合物投料以及搅拌速度等因素，改变处方中c(RGDyk)-PL-188聚合物/DTX比例，制备系列c(RGDyk)DTX-NPs。通过测定各配方下制备的纳米胶束载药量、包封率、粒径和PDI、电位等指标，筛选出最适处方。结果如表1所示，随着c(RGDyk)-PL-188/DTX质量比从50:1升高至10:1，纳米胶束中DTX的载药量逐渐增大，而包封率则逐渐降低，粒径稍有增大。但当c(RGDyk)-PL-188/DTX增加至5:1时，纳米胶束中DTX的载药量反而降低，包封率则仅有22.6%，表明由于在该条件下药物的超饱和状态诱导快速药物析出晶型不利于胶束包载。综上分析，当c(RGDyk)-PL-188/DTX质量比为10:1时，所制备纳米胶束具有较高的载药量（7.88%±0.02%）和适当的包封率（85.5%±2.78%），其粒径（159.2nm）相比空白胶束（115.6nm）虽稍有增大，但仍小于200nm，而且其具有较窄的粒径分布（PDI=0.12）。因此，后续载DTX的纳米胶束的稳定性、体外释放以及细胞实验均以该处方进行研究。表1不同聚合物和药物投料质量比对纳米胶束载药量、包封率、平均粒径、PDI、Zeta电位的影响（n=3）c(RGDyk)-PL-188/DTX质量比载药量（%）包封率（%）平均粒径（nm）PDIZeta电位（mV）50:11.92±0.0697.9±4.36128.4±0.20.11±0.03-18.3±0.120:14.36±0.0591.2±3.65145.9±0.10.11±0.02-18.9±0.210:17.88±0.0285.5±2.78159.2±0.20.12±0.02-19.2±0.45:14.33±0.0522.6±4.09172.1±0.30.16±0.6-17.1±0.23.3c(RGDyk)DTX-NPs的粒径与形态分别以DLS和TEM检测c(RGDyk)DTX-NPs水化粒径（Dh）、粒位分散指数（polymeydisperseindex，PDI）和形态。粒径分布结果如图2A、2B所示。相比空白c(RGDyk)-PL-188纳米胶束[Dh=（115.6±0.2）nm，PDI=0.11]，c(RGDyk)DTX-NPs水化粒径稍有增大，Dh为（159.2±0.2）nm，粒径分布稍有变宽（PDI=0.12），表明药物装载在胶束核内。胶束样品经2%磷钨酸负染后，通过TEM观察c(RGDyk)-PL-188和c(RGDyk)DTX-NPs微观形态。结果如图2C、2D，c(RGDyk)-PL-188和c(RGDyk)DTX-NPs纳米胶束均呈白色的球形粒子并且分布均匀，TEM测量的c(RGDyk)-PL-188脱水状态下粒径为55nm，而c(RGDyk)DTX-NPs脱水粒径则增大至65nm，二者均显著小于DLS测量的水化粒径。吴其隆，等:c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束逆转脑胶质瘤对多西他赛的耐药性c(RGDyk)-PL-188BACT-P188PL-1888.57.56.55.54.53.5fl(ppm)2.51.50.5c(RGDyk)c(RGDyk)-PL-188CT-P188PL-18880016002400320040000102030405060708090100Wavelength(cm-1)Transmittance(%)c(RGDyk)-786-第49卷温州医科大学学报第11期这表明c(RGDyk)-PL-188材料自组装的胶束外壳由致密的PEO亲水链分布，在TEM测定前对样品的干燥、脱水和抽真空等处理，使纳米胶束水化层皱缩，纳米胶束粒径缩小[14]。3.4c(RGDyk)DTX-NPs药物分散状态DTX在水中溶解度极低，为高结晶药物，而c(RGDyk)-PL-188材料纳米胶束载药量可达7.88%，显著增加DTX在水中的溶解性。因此，本研究进一步利用DSC检测c(RGDyk)DTX-NPs中DTX分散状态，为后续载药稳定性研究提供依据。DSC结果如图3A所示，DTX原料药在160℃出现晶体熔点吸热峰，214℃处则为药物热降解峰;c(RGDyk)-PL-188聚合物材料在52℃则出现PEO链有关的吸热峰;DTX与c(RGDyk)-PL-188聚合物材料的简单物理混合物则出现二者相关峰的叠加;相比之下，c(RGDyk)DTX-NPs则仅仅出现微弱的PEO有关吸热峰，DTX相关的晶体熔点峰以及热降解峰消失，表明DTX在胶束中以分子形式分散存在。c(RGDyk)-PL-188聚合物的PPO链与DTX间疏水作用可能是维持DTX在胶束内高度分子分散稳定存在的基础。A、C:c(RGDyk)-PL-188空白纳米胶束;B、D:c(RGDyk)DTX-NPs图2纳米胶束粒径分布和TEM形态3.5c(RGDyk)DTX-NPs在模拟体液中的稳定性前已述及c(RGDyk)DTX-NPs中药物以分子分散的高能态存在，为一种不稳定存在形式，因此，本研究进一步对c(RGDyk)DTX-NPs在含有BSA的pH7.4PBS介质中粒径和载药稳定性进行考察。结果如图3B、3C所示，c(RGDyk)DTX-NPs在pH7.4PBS溶液和含有BSA的pH7.4PBS溶液37℃连续孵育24h，其粒径与胶束内药物浓度没有发生明显变化，各个时间点c(RGDyk)DTX-NPs粒径维持在155~162nm间，胶束内药物浓度变化小于10%，浓度维持在190μg/mL以上。这些结果表明c(RGDyk)DTX-NPs在模拟体内条件下，具有较好的纳米形态与载药稳定性，为其静脉注射肿瘤靶向提供前提依据。3.6体外药物释放动态透析法考察DTX在pH7.4PBS介质中从c(RGDyk)DTX-NPs制剂体外释放行为。结果如图3D所示，相比DTX溶液剂，c(RGDyk)DTX-NPs制剂展现出明显的缓释行为。DTX溶液剂在2h内累计释放达到77.04%，12h内释放高达91.71%，BDAC002020202050501001002002005005001k1k1010404060608080100100粒径(nm)强度强度粒径(nm)-787-第11期第49卷而在2h内c(RGDyk)DTX-NPs累计释放仅为30.40%，12h内累计释放仅为64.44%，甚至24h释放才达78.51%。胶束包裹产生的DTX短时缓释行为有助于静脉注射给药后，c(RGDyk)DTX-NPs通过增强渗透滞留效应靶向肿瘤组织，更适用于实际的治疗需要。3.7体外细胞毒性为了证实c(RGDyk)DTX-NPs对脑胶质瘤细胞耐药的逆转，本研究选择两种细胞株分别为耐DTX的脑胶质瘤U87细胞和敏感的C6胶质瘤细胞进行体外细胞毒性实验。结果如图4所示，c(RGDyk)-PL-188材料对两种细胞株在测试浓度范围内均无毒性，各个浓度细胞存活率均大于90%。对敏感的C6细胞，含DTX的各种制剂包括DTX溶液、DTX-NPs和c(RGDyk)DTX-NPs均展现出浓度依赖的细胞毒性，IC50分别为6.65、4.53、3.02μg/mL。这表明包裹在聚合物纳米胶束中的药物相对于单纯药物溶液具有更强的细胞毒性，其机制可能是胶束中的药物以内吞的机制进入细胞，使得更多药物转运至细胞内靶位，进而杀伤肿瘤细胞[15]。相比之下，耐DTX的脑胶质瘤U87细胞则展现出明显的耐药性，DTX溶液制剂IC50为106.91μg/mL，明显高于敏感的C6细胞计算的IC50。但两种DTX纳米胶束制剂包括DTX-NPs和c(RGDyk)DTX-NPs对耐药的脑胶质瘤U87细胞则显示出更明显的浓度依赖性细胞毒性，IC50分别为13.46μg/mL和8.26μg/mL，明显低于DTX溶液的IC50（P<0.05），表明纳米胶束有效逆转脑胶质瘤U87细胞对DTX的耐药性。耐药性的逆转可能与胶束材料PL-188抑制耐药P-gp介导的转运有关。而且，c(RGDyk)DTX-NPs相比DTX-NPs在多个浓度点对耐药的脑胶质瘤U87细胞展现出更强的细胞毒性。这是因为U87胶质瘤细胞膜过多表达αvβ3整合素，能更特异性吞噬c(RGDyk)DTX-NPs，更多药物绕开多药耐药蛋白进入细胞内。3.8c(RGDyk)ICG-NPs靶向性为了进一步确证c(RGDyk)-NPs对耐药U87胶质瘤细胞的靶向性，以荧光探针ICG代替DTX装载在纳米胶束内制备c(RGDyk)ICG-NPs，比较ICG-NPs和c(RGDyk)ICG-NPs在细胞内分布的差异。结果如图5所示，孵育2h后，ICG-NPs处理仅有微弱的药物分布在细胞质内。相比之下，c(RGDyk)ICG-NPs处理则在细胞质内出现明显红色荧光分布，表明c(RGDyk)-NPs具有更强的细胞靶向性。这种细胞质内高浓度药物摄取与其较强的细胞毒性结果相一致。而耐药U87胶质瘤细胞与c(RGDyk)溶液（10μg/mL）预孵育2h后再加入A:DSC分析结果;B:粒径稳定性;C:载药稳定性;D:在pH7.4PBS介质中的体外释放曲线图3c(RGDyk)DTX-NPs体外理化评价吴其隆，等:c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束逆转脑胶质瘤对多西他赛的耐药性BDCAc(RGDyk)-PL-188聚合物DTX/c(RGDyk)-PL-188物理混合物PBSPBSDTX溶液DTX原料PBS-BSAPBS-BSAc(RGDyk)DTX-NPs1500020180155401906020016080165100210170120220粒径(nm)热流(W/g)粒径(nm)DTX浓度(μg/mL)885010121210016161520201502024242002502540405时间(h)时间(h)温度(℃)时间(h)-788-第49卷温州医科大学学报第11期A:c(RGDyk)-PL-188聚合物材料对C6胶质瘤细胞的毒性;B:c(RGDyk)-PL-188聚合物材料对耐药胶质瘤U87细胞的毒性;C:DTX溶液、DTX-NPs和c(RGDyk)DTX-NPs对C6胶质瘤细胞的毒性;D:DTX溶液、DTX-NPs和c(RGDyk)DTX-NPs对耐药胶质瘤U87细胞的毒性。aP<0.05，bP<0.01图4体外细胞毒性实验图5U87DTX耐药细胞对不同ICG制剂的摄取结果（×200）c(RGDyk)ICG-NPs进行摄取检测，结果发现细胞内荧光明显减弱，表明c(RGDyk)ICG-NPs靶向机制与细胞表面αvβ3整合素结合有关。3.9肿瘤球生长抑制研究报道，肿瘤干细胞是一种增殖失控的细胞，并且可能是肿瘤细胞产生耐药性的根源[16-17]。因此我们通过构建3DU87胶质瘤细胞球，体外考察了c(RGDyk)DTX-NPs对肿瘤球的生长抑制作用，结果如图6所示。在治疗后的第10天，未加药物的阴性对照组肿瘤球体积生长迅速，体积是原发灶的2.47倍;相反，DTX溶液组延缓了U87胶质瘤球体的生长，其第10天的体积是第0天的1.73倍;与DTX溶液组相比，c(RGDyk)DTX-NPs组显著增加了DTX对U87肿瘤球的抑制作用，差异有统计学意义（P<0.05），其第10天的体积是原发灶的0.5倍。表明c(RGDyk)的靶向性联合纳米胶束制剂能有效增加DTX对耐药肿瘤的杀伤作用。3.10肿瘤球渗透实验已有研究证实，肿瘤球与体内实际肿瘤具有某些相似的特征，包括实体瘤内部缺乏足够的氧气和养分、体内药物递送可能遇到的细胞外基质障碍等[18-20]。为了证实c(RGDyk)DTX-NPs在U87细胞三维实体肿瘤球中的渗透扩散行为，以ICG代替DTX制备荧光标记的c(RGDyk)ICG-NPs通过激光共聚焦显微镜断层扫描技术对U87肿瘤球进行了考察。结果如图7所示，ICG-NP、c(RGDyk)ICG-NPs分别与U87三维实体肿瘤球共孵育24h后，ICG-NP组红色荧光只在肿瘤球表面少量分布;而c(RGDyk)ICG-NPs组的红色荧光不仅分布于肿瘤球A040206080100120细胞存活率(%)255010020030040010c(RGDyk)-PL-188浓度(μg/mL)B040206080100120细胞存活率(%)255010020030040010c(RGDyk)-PL-188浓度(μg/mL)0.630.631.251.252.52.55510100.31DAPIICGICG-NPsc(RGDyk)ICG-NPsc(RGDyk)+c(RGDyk)ICG-NPsMerge0.31bbbbbbbbbbbbbbbbbbbaaabDTX浓度(μg/mL)DTX浓度(μg/mL)CD008080606040402020100100140140120120160160180180细胞存活率(%)细胞存活率(%)DTX溶液组DTX溶液组DTX-NPs组DTX-NPs组c(RGDyk)DTX-NPs组c(RGDyk)DTX-NPs组-789-第11期第49卷表面，而且其荧光能够均匀地渗透到肿瘤球的中心。这些结果表明，与ICG-NP相比，c(RGDyk)ICG-NPs具有更强的靶向穿透能力，其对肿瘤的这种更深的渗透可能使DTX被传递到肿瘤球的核心，从而抑制肿瘤核心和表面的生长，进而增强对肿瘤球生长抑制作用。4结论本研究以PL-188为纳米材料，利用其结构特点，经琥珀酸酐羧基化后，键合c(RGDyk)，实现对疏水性DTX装载，构建了包载DTX纳米胶束，初步探索其对耐DTX的人脑胶质瘤U87细胞的抑制效果。结果表明该聚合物胶束对DTX具有一定的载药量和包封率。A:空白对照组、DTX溶液组和c(RGDyk)DTX-NPs治疗3、6、10d后，U87肿瘤球的显微图（×200）;B:U87肿瘤球相对体积变化曲线。与DTX溶液组比:aP<0.05图6耐DTX的U87肿瘤球的生长抑制评价图7孵育24h后ICG-NP（A）和c(RGDyk)ICG-NPs（B）在U87肿瘤球的渗透情况（×200）吴其隆，等:c(RGDyk)环肽修饰纳米胶束逆转脑胶质瘤对多西他赛的耐药性TOPDay0ABBADay3Day6Day1015μm45μm75μm105μm36aaa9时间(d)3002001000相对体积比(%)DTX溶液组空白对照组空白对照组DTX溶液组c(RGDyk)DTX-NPs组c(RGDyk)DTX-NPs组-790-第49卷温州医科大学学报第11期体外释放实验表明，c(RGDyk)DTX-NPs较DTX溶液能明显延缓DTX的释放，呈现缓释释放行为，延长药物的作用时间。细胞毒性实验表明该聚合物胶束能高效地逆转U87耐药细胞对DTX的耐药性。药物摄取实验表明该聚合物胶束可被U87胶质瘤细胞快速摄取，能显著地增加后释放的DTX在细胞中的浓度，可有效地杀伤肿瘤细胞。体外肿瘤球实验也进一步证明了该纳米胶束能有效地渗透至肿瘤球核心进而抑制U87肿瘤球的生长。为了进一步确定该纳米胶束对动物模型的效果，需要进行体内药效学以及药动学的研究。参考文献:[1]HERBSTRS,KHURIFR.Modeofactionofdocetaxel-abasisforcombinationwithnovelanticanceragents[J].Can-cerTreatRev,2003,29(5):407-415.[2]GUÉRITTE-VOEGELEINF,GUÉNARDD,LAVELLEF,etal.Relationshipsbetweenthestructureoftaxolanaloguesandtheirantimitoticactivity[J].JMedChem,1991,34(3):992-998.[3]OGAWAC,YATABEM,INOUEM,etal.Comparisonofchemicalbehavioroforiginalandgenericdocetaxelformu-lationsasnon-alcoholicpreparations:discussionaboutdi-luentsolventsfordocetaxel[J].YakugakuZasshi,2018,138(7):973-984.[4]LUOZ,JIANGL,DINGC,etal.Surfactantfreede-liveryofdocetaxelbypoly[(r)-3-hydroxybutyrate-(r)-3-hydroxyhexanoate]-basedpolymericmicellesforeffectivemelanomatreatments[J].AdvHealthcMater,2018,7(23):e1801221.[5]RAFIEIP,HADDADIA.Docetaxel-loadedPLGAandPLGA-PEGnanoparticlesforintravenousapplication:phar-macokineticsandbiodistributionprofile[J].IntJNanomedi-cine,2017,12:935-947.[6]SIMT,KIMJE,HOANGNH,etal,Developmentofadocetaxelmicellarformulationusingpoly(ethyleneglycol)-polylactide-poly(ethyleneglycol)(PEG-PLA-PEG)withsuccessfulreconstitutionfortumortargeteddrugdelivery[J].DrugDeliv,2018,25(1):1362-1371.[7]ALSHRAIMMO,SANGIS,HARISAGI,etal,Chitosan-coatedflexibleliposomesmagnifytheanticanceractivityandbioavailabilityofdocetaxel:impactoncomposition[J].Molecules,2019,24(2).pii:E250.[8]QUN,SUNY,LIY,etal,Docetaxel-loadedhumanserumalbumin(HSA)nanoparticles:synthesis,characterization,andevaluation[J].BiomedEngOnline,2019,18(1):11.[9]LIC,RENS,DAIY,etal,Efficacy,pharmacokinetics,andbiodistributionofthermosensitivechitosan/beta-glycero-phosphatehydrogelloadedwithdocetaxel[J].AAPSPharmSciTech,2014,15(2):417-424.[10]ALAKHOVV,MOSKALEVAE,BATRAKOVAEV,etal,Hypersensitizationofmultidrugresistanthumanovariancar-cinomacellsbypluronicP85blockcopolymer[J].Biocon-jugChem,1996,7(2):209-216.[11]VENNEA,LIS,MANDEVILLER,etal.HypersensitizingeffectofpluronicL61oncytotoxicactivity,transport,andsubcellulardistributionofdoxorubicininmultipledrug-re-sistantcells[J].CancerRes,1996,56(16):3626-3629.[12]GAOH,XIONGY,ZHANGS,etal.RGDandinterleu-kin-13peptidefunctionalizednanoparticlesforenhancedglioblastomacellsandneovasculaturedualtargetingdeliv-eryandelevatedtumorpenetration[J].MolPharm,2014,11(3):1042-1052.[13]BELHADJZ,ZHANC,YINGM,etal.Multifunctionaltargetedliposomaldrugdeliveryforefficientglioblastomatreatment[J].Oncotarget,2017,8(40):66889-66900.[14]ZHANGL,HUY,JIANGX,etal.Camptothecinde-rivative-loadedpoly(caprolactone-co-lactide)-b-PEG-b-poly(caprolactone-co-lactide)nanoparticlesandtheirbio-distributioninmice[J].JControlRelease,2004,96(1):135-148.[15]XUHL,MAOKL,LUCT,etal.Aninjectableacellularmatrixscaffoldwithabsorbablepermeablenanoparticlesim-provesthetherapeuticeffectsofdocetaxelonglioblastoma[J].Biomaterials,2016,107:44-60.[16]ZHANGL,XIAY,LIL,etal.Cancerstemcell-likecellsexistinmucoepidermoidcarcinomacelllineMC3[J].OncolRes,2012,20(12):589-600.[17]RAHIMIK,FUCHTBAUERAC,FATHIF,etal.IsolationofcancerstemcellsbyselectionformiR-302expressingcells[J].PeerJ,2019,7:e6635.[18]GAOH,QIANJ,YANGZ,etal.Whole-cellSELEXap-tamer-functionalisedpoly(ethyleneglycol)-poly(epsilon-cap-rolactone)nanoparticlesforenhancedtargetedglioblastomatherapy[J].Biomaterials,2012,33(26):6264-6272.[19]YANGZZ,LIJQ,WANGZZ,etal.Tumor-targetingdu-alpeptides-modifiedcationicliposomesfordeliveryofsiR-NAanddocetaxeltogliomas[J].Biomaterials,2014,35(19):5226-5239.[20]GAOH,YANGZ,CAOS,etal.Tumorcellsandneovascu-laturedualtargetingdeliveryforglioblastomatreatment[J].Biomaterials,2014,35(7):2374-2382.（本文编辑:丁敏娇）
-
内固定取出术后感染死亡医疗损害鉴定1例
某年月836.1℃日入院主诉:左小腿软骨瘤术后年，，左外踝部要求拔除内固定。体格检查:体温可见手术瘢痕，踝尖部皮肤愈合欠佳。左小腿线片示:左小腿软骨瘤术后，钢板及螺钉在位。初步诊断:日血常规:白细胞左腓骨下端软骨瘤术后。X84~1015×109/L月）]。[正常参考值（3.65×109/L268月日手术记录:沿原手术切口依次切开，见原手术切口窦道内有脓液渗出，逐层分离，显露钢板螺钉，专器予逐一取出。冲洗伤口，修剪窦道部皮缘，92月缝合切口。82739.5℃93月日至日，患者诉伤口疼痛，发热（体），腹泻，足背皮温稍高，切口有少量脓性液温体。予物理降温、止泻处理。抢救记录:2223日:月患者突发抽搐，意识不清，呼之不应，立即给予对症治疗，心室颤动予电），除颤。经抢救后患者血压氧饱和度转90/60mmHg/min37，心率波动在22（次。::215012.0/8.0kPa90~110ICU97%02病房。94月日13:，患者一直浅昏迷，四肢肌张力高，85%四肢抽搐，痰液较多不易咳出，经皮血氧饱和度左右。接呼吸机辅助呼吸，血压进一步下降，予去甲1230950800:肾上腺素泵入。全院大会诊，患者发热后出现腹泻、休克表现，考虑感染原因所致休克可能性较大，且血清降钙素偏高，提示体内细菌感染，考虑病灶可能为踝尖部伤口。根据会诊意见，予以亚胺培南西司他丁钠、替考拉宁抗感染处理。32.78×109/L0945。:日月:5409，白细胞，患者出现心率下降、深度昏迷、双侧瞳孔散大固定、对光反射消失，颈动脉搏动未及，持续予以肾上腺素泵入、胸外按压等处理，，患者呈深度昏迷状态，血压需大剂量升压药物维持。，气管插管接呼吸机辅助呼吸，在去甲肾上腺素等药物维持下，血压），双侧瞳孔散大、光反射消失，双下肢可见花斑。80/50mmHg恢复心搏。30100011:::（10.7/6.7kPa602/min03日943:::031.3月次抢救记录:患者于心率下降，心电监护示室性逸搏心律，心音消失、大至动脉搏动消失，血压和血氧饱和度测不出，经持续抢救患者未能恢复自主心律，02某医院尸体解剖病理诊断书尸体检验:左外踝部上方见长约手术切口缝线，切口周围皮肤表皮剥脱、水肿，切开该切口，暴露腓骨，钢板螺钉已取出;双侧胸腔见淡黄色清亮积液共约;腹腔、盆腔积液共1250mL1450mL宣布临床死亡。13.5cm10mL，心包积液。0220组织病理学检验:蛛网膜下隙及脑间质水肿，肺泡腔内见淋巴细胞及中性粒细胞;心肌间质水肿，心外膜下水肿伴少量炎症细胞浸润;肝细胞大片状凝固性坏死，以中央静脉周围为著;左小腿手术切口处上皮乳头状增生，伴肉芽组织增生。）肺炎;（组织病理学诊断:（）胸、腹腔大量积液;（死亡原因:尸体解剖未见机械性窒息及机械性损伤，未见肺动脉栓塞。结合病史及病理所见，考虑江）左小腿手术瘢痕。）休克肝;（）脑水肿;（31245作者简介:尹长玉（1989-），女，硕士，主要从事法医病理学和法医临床学鉴定;E-mailyinchangyu3@163.com:法医学杂志2019年8月第35卷第4期475··某系心脏性猝死。1.4组织病理学切片复检心内膜包括心瓣膜广泛性高度增厚伴纤维化及玻璃样变，表面有大小不一的感染性赘生物及多个感染性附壁血栓形成，赘生物及血栓内均有以中性粒细胞为主的大量炎症细胞浸润;心肌层心肌间质增宽，纤维性增生及玻璃样变，部分间质内小动脉壁增厚及玻璃样变，部分区域见炎症细胞浸润，心肌细胞萎缩，少量肥大;心外膜层中性及淋巴细胞浸润。肺小支气管及其分支周围间质淋巴组织增生及淋巴细胞浸润，部分肺叶（以左右下叶为主）肺泡壁毛细血管扩张、充血，肺泡腔内充满渗出液及炎症细胞，以中性粒细胞为主。肝小叶可见，汇管区多量淋巴细胞浸润。肾盂黏膜淋巴细胞浸润，肾包膜下肾间质淋巴单核细胞浸润。皮肤溃疡形成，新、旧肉芽组织增生伴炎性浸润，表面有坏死及炎性渗出物。法医病理学诊断:感染性心内膜炎伴感染性赘生物及感染性附壁血栓形成，心肌病变，肺炎，胸、腹腔积液，肾间质、肝汇管区炎症细胞浸润（轻度）。鉴定意见根据病史材料、尸体检验及组织病理切片复检结果综合分析认为，江某符合因感染性休克死亡;某市立医院在江某的诊疗过程中存在过错行为，与江某死亡后果之间存在因果关系，系主要原因。讨论1.522.1见及冠状动脉未描述，组织病理学诊断中未见有关心脏疾病的诊断，最终却分析认为江某的死亡原因系心脏性猝死，乃是排他性意见，江某的死亡原因仍不明确。鉴于此，某市人民法院再次委托笔者所在鉴定机构依据现有材料对江某的死亡原因进行重新鉴定。通过复检江某的组织病理学切片，发现江某心内膜包括心瓣膜广泛性增厚伴纤维化及玻璃样变，表面有大小不一的感染性赘生物及多个感染性附壁血栓形成，赘生物及血栓内均有以中性粒细胞为主的大量炎症细胞浸润，心肌层心肌间质增宽、纤维性增生及玻璃样变等。以此可作出感染性心内膜炎伴感染性赘生物及感染性附壁血栓形成、心肌病变的病理学诊断。再结合其临床病史综合分析认为，江某在原有心肌病变的基础上遭受血行途径的细菌侵袭，引起感染性心内膜炎并形成感染性赘生物及附壁血栓;手术记录记载见原手术切口有窦道及脓液渗出，提示手术野有化脓性感染灶，故存在内固定取出术造成细菌扩散可能。细菌扩散后，除侵犯心内膜外，继续生长繁殖可产生细菌毒素，从而造成患者出现高热、白细胞增高、低血压、意识障碍等中毒症状，最终因感染性休克而死亡。故江某的直接死亡原因应为感染性休克。2.2关于医方的医疗过错据手术记录记载，江某原手术切口有窦道形成且内有脓液，医方应根据脓液性状及量的多少，决定是否开放切口或引流处理，并留取脓液进行细菌培养;术后亦应该常规使用抗生素，防止手术切口深部等进一步感染。医方仅“进行冲洗、修剪窦道部皮缘”后即缝合切口，未放置引流，亦未留取脓液进行细菌培养，存在处理不当过错;且在围手术期未预防性使用抗生素，亦不符合感染（污染）切口的处理常规，存在过错。此外，行内固定取出术后，江某出现体温反复升高、腹泻等临床表现，术后第天腹泻仍未缓解且手术切口有脓液渗出，说明其已有全身感染的表现。医方针对上述临床表现的处理措施为物理降温、止泻，未曾考虑给予江某血常规、血沉、降钙素原等有助于诊断感染性疾病的相关实验室检查，可以认为医方并未考虑到江某存在全身感染的可能性。故医方在此阶段未尽到充分注意义务，存在对病情判断和处置不当的过错。3d6[3]后江某突发心室颤动，虽经抢救后恢复自主心率，但其低血压及感染症状凸显，白细胞高达32.78×109/L9月日3[1-2]关于死亡原因对于涉及医疗损害案件的死亡原因鉴定，尸体检验前的信息采集及分析尤为重要。检验人应仔细审阅死者的病历资料，根据病历资料分析可能的死亡原因，并有针对性地制订解剖方案、解剖程序，明确解剖重点，避免发生疏漏。本例中，根据江某生前的诊治过程及检验化验结果，可以判断其存在严重的全身感染，且感染的发生时间与手术时间具有关联性。发生的心律失常是其病情发生变化的关键节点，可以判断江某心血管系统存在病变的可能性较大，故本例的尸体检验设计应包含尸体一般情况、手术区域皮肤状态、手术区域窦道状态、心脏各腔大体解剖所见、冠状动脉等重点。组织病理学检验亦应根据大体剖验所见及可能的死亡原因而有所侧重，除常规重要器官取材外，手术区皮肤及窦道的取材及镜下观察亦是重点。2150:2江某死亡第天，某医院病理科对江某进行尸体检验。尸体检验报告书对江某左小腿窦道是否存在及切口内是否有脓液等未描述，心脏各腔大体解剖所，已经出现感染性休克。虽医方给予了积极的治疗，江某终因感染性休克无法纠正，循环衰竭而死亡。477（下转第页）法医学杂志2019年8月第35卷第4期477··和呕血，夹层压迫上腔静脉可出现上腔静脉综合征，压迫气管表现为呼吸困难，压迫颈胸神经节出现霍纳综合征等。主动脉夹层因临床表现复杂多变，容易漏诊、误诊，首诊时易误诊为急性冠脉综合征、急性心肌梗死、脑血管意外、急性肺栓塞、胸腰段椎间盘突出症、肾绞痛等。[3]患者张某入院时临床检查见其咽喉壁充血、喉部黏膜充血肿胀、左侧声带活动差，当日纤维喉镜检查示急性喉炎、声带麻痹，由耳鼻喉科收住入院，入院诊断为急性喉炎、声带麻痹，入院后予抗感染、止咳、化痰等对症治疗。但是声带麻痹很难用炎症解释，现有病史资料中也未对导致声带麻痹的原因进行分析。而本案例尸体检验见食管内血凝块附着处食管壁坏死、糜烂，内见食管残留破裂口，相应主动脉破裂口处夹层内有一囊性肿物，结合病理改变，考虑其主动脉夹层长时间压迫食管致食管壁变性坏死，压迫喉返神经出现声带麻痹，最终瘤体不断扩大突破变性坏死的食管壁并破裂出血，继而出现呕血症状。患者入住耳鼻喉科诊疗过程中，院方未考虑主动脉夹层复发的可能，在患者未提供历史就诊记录的等相关检查，只情况下也未予以复查胸腹部增强6cm×3cm×3cmCT[4]综上，BStanfordA是针对喉炎、声带麻痹进行治疗，未深究导致声带麻痹的原因，耳鼻喉科医师对主动脉夹层缺乏认识，经验不足，思路过于狭窄是导致本次误诊的原因之一。市医院在对患者张某的诊疗过程中存在未能尽到谨慎注意义务的过错，对主动脉夹层缺乏认型主动脉夹层的病情发展症识，忽视了状，经验不足，造成误诊，且市医院的医疗过错行为使张某丧失了可能存在的生存机会，与张某死亡的损害后果之间存在因果关系，该过错为次要因素。B参考文献:[1]黄雷，刘双高，黄翠，等.主动脉夹层破裂致死63例法医病理学分析[J].法医学杂志，2013，29（4）:273-275.[2]楚军民，卫金花，常谦，等.StanfordA型主动脉夹层术后死亡和严重并发症的危险因素[J].中国胸心血管外科临床杂志，2017，24（3）:211-216.[3]程光全.主动脉夹层的误诊原因分析[J].蛇志，2015，27（3）:256-258.[4]杨爱琴，鲍丽霞，吕卓人.急性主动脉夹层误诊原因分2019-01-08析[J].内科急危重症杂志，2005，11（1）:32-33，42.（收稿日期:）（本文编辑:邹冬华）475页）（上接第2.34关于医疗过错与因果关系江某左腓骨下段内固定物已存在体内年，医方行切开取出内固定术有手术指征，术前发现皮肤伤口愈合欠佳，予以换药处理亦符合诊疗常规。考虑到江某体表（左踝部位）感染已久，故也不能排除其体内存在隐匿感染，外科手术可以诱使隐匿感染加重，发生全身性感染。组织病理学检验提示江某存在心肌病变，血液中细菌及其成分在原有心肌病变的基础上更容易形成心内膜赘生物及附壁血栓，进而诱发心律失常，故其自身亦存在多方面的不利因素。综合分析认为，医方存在的过错行为是造成江某死亡的主要原因，医方应承担主要责任，江某自身不利因素承担次要责任。参考文献:[1]张凤芹.规范医疗纠纷尸检工作的几个重要环节[J].中国司法鉴定，2008（S1）:62-64.[2]常林.论法医学鉴定意见与案情的关系[J].证据科学，2007，14（4）:311-315.[3]《抗菌药物临床应用指导原则》修订工作组.抗菌药物临床应用指导原则（2015年版）[M].北京:人民卫生出版社，2015.2018-03-14（收稿日期:）（本文编辑:张建华）
-
约翰斯·霍普金斯大学医院骨科访学见闻（一）
无摘要
-
星状神经节阻滞改善眼眶重建术后疼痛的研究
目的探索超声引导下星状神经节阻滞（SGB）对缓解眼眶重建术后疼痛的效果。方法选择80例眼眶重建患者，随机数字表法分为SGB组（n=40）和对照组（n=40）。PACU期间，SGB组经超声引导下于左侧第6颈椎水平行SGB操作，注入0.25%左旋布比卡因8mL;对照组未作处理。于注射后1、2、4、24h行疼痛评估;于注射前和注射后1、2、4、24h测眼内压;记录治疗或随访期间的不良反应。结果与对照组相比，SGB组注射后2、4、24h疼痛程度和注射后1、2、4h眼内压均降低，两组差异具有统计学意义（P<0.05）。结论超声引导下星状神经节阻滞（SGB）能有效缓解眼眶重建术后疼痛，并能降低眼压。
-
青年急性冠脉综合征患者临床特点的回顾性分析
目的探讨青年急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome,ACS)的临床特点。方法选取W45岁ACS患者174例为青年ACS组，同期60-75岁ACS患者191例为老年ACS组，比较两组患者的危险因素、临床特点、冠脉病变特征及主要心血管不良事件。结果青年ACS患者中男性、超重/肥胖、吸烟者比例、总胆固醇、甘油三酯尿酸水平以及低高密度脂蛋白水平高于老年组。青年ACS组中ST段抬高心肌梗死占比最高，老年ACS组中不稳定心绞痛占比最高，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)0结论青年ACS患者多为男性，超重/肥胖、吸烟和血脂异常、ST段抬高心肌梗死在青年ACS患者中占优势，主要不良心血管事件发生率和老年患者无差异。
-
新型冠状病毒大流行期间老年髋关节骨折的诊疗经验
目的]介绍新型冠状病毒（20201院年月下旬收治的髋关节骨折病例9）大流行期间老年髋关节骨折的诊疗经验。[方法]回顾性分析本4例，例诊疗经验。在做好防护的基础上，收治股骨颈骨折5~2月中旬1COVID-1931例行保守治疗。例行股骨头置换，发大粗隆骨折，行保守治疗。[结果]所有伤，无伤口感染发生，无深静脉血栓形成，术后93d例股骨粗隆间骨折，例患者无死亡，无例行股骨头置换，COVID-19例人工关节置换并感染。例手术治疗病例无血管、神经损21例保守治疗。5COVID内下地部分负重行走。[结论]在大流行期间，应根据患者病情，结合患者及家属意愿，在严格隔离防护的前提下，个性化选择对老年髋关节骨折的治疗方式。
-
补肾活血汤联合卡托普利治疗老龄自发性高血压大鼠的机制研究
目的:探讨补肾活血汤联合卡托普利对老龄自发性高血压大鼠（SHR）的降压疗效并分析其作用机制。方法:选取60只SHR按照随机数字表法分为卡托普利组、补肾活血汤组、联合组、模型组，每组15只，另选取15只Wistar-Kyoto大鼠为空白组。联合组给予补肾活血汤联合卡托普利悬浊液灌胃干预，补肾活血汤组给予补肾活血汤灌胃干预，卡托普利组给予卡托普利悬浊液灌胃干预，模型组和空白组给予蒸馏水灌胃干预，连续干预8周。检测干预前、干预4周后、8周后各组大鼠尾动脉收缩压，对比各组大鼠干预8周后血清炎症因子C反应蛋白（CRP）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平以及血清内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、一氧化氮（NO）浓度。结果:干预前后，SHR各组大鼠尾动脉收缩压高于空白组（P<0.05），干预4周后、8周后，联合组、补肾活血汤组、卡托普利组尾动脉收缩压均低于模型组，且联合组尾动脉收缩压低于卡托普利组、补肾活血汤组（P<0.05）;干预后补肾活血汤组与卡托普利组尾动脉收缩压比较差异无统计学意义（P>0.05）。干预8周后，模型组、卡托普利组、补肾活血汤组CRP、TNF-α水平与空白组比较显著升高（P<0.05），联合组CRP、TNF-α水平与空白组比较差异无统计学意义（P>0.05），卡托普利组、补肾活血汤组、联合组CRP、TNF-α水平呈逐渐降低趋势，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。干预8周后，模型组、卡托普利组、补肾活血汤组ET、AngⅡ浓度与空白组比较显著升高（P<0.05），联合组ET、AngⅡ浓度与空白组比较差异无统计学意义（P>0.05），联合组、补肾活血汤组、卡托普利组ET、AngⅡ浓度低于模型组，且联合组低于卡托普利组、补肾活血汤组（P<0.05）;模型组、卡托普利组NO浓度低于空白组、补肾活血汤组、联合组（P<0.05），空白组、补肾活血汤组、联合组NO浓度比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:补肾活血汤联合卡托普利对SHR有明显的降压作用，其机制可能与降低血清炎症因子、ET、AngⅡ含量和升高NO含量有关。关键词:补肾活血汤;卡托普利;老龄;自发性高血压;大鼠;炎症因子;血管内皮功能中图分类号:R-33;R544.1文献标识码:A文章编号:1673-6273（2020）23-4418-04MechanismofBushenHuoxueDecoctionCombinedwithCaptoprilintheTreatmentofSenileSpontaneouslyHypertensiveRats*PENGJin-xiang1,JIANGWei-dong1,LUXiao-chen2,GAOXiang1,ZHENGXiao-dan1,CHENAi-lan3,ZHANGFeng-li1,SHENGWei1(1DepartmentofCardiology,NantongAffiliatedHospitalofNanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nantong,Jiangsu,226001,China;2DepartmentofCardiology,AffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong,Jiangsu,226001,China;3DepartmentofCardiology,TheFirstAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong,510120,China)ABSTRACTObjective:ToinvestigatetheantihypertensiveeffectofBushenHuoxueDecoctionCombinedwithcaptoprilonsenilespontaneouslyhypertensiverats(SHR)andtoanalyzeitsmechanism.Methods:60SHRwererandomlydividedintocaptoprilgroup,BushenHuoxueDecoctiongroup,combinedgroupandmodelgroup,with15ratsineachgroup,15Wistar-Kyotoratswereselectedasblankgroup.ThecombinedgroupwastreatedwithBushenHuoxueDecoctionCombinedwithcaptoprilsuspension,BushenHuoxueDecoctiongroupgivenBushenHuoxueDecoctiongavageintervention,thecaptoprilgroupwasgivencaptoprilsuspensionforgastricintervention,Modelgroupandblankgroupweretreatedwithdistilledwaterforintragastricintervention,continuousinterventionfor8weeks.Thesystolicbloodpressureofthetailarteriesoftheratswasmeasuredbefore,4weeksand8weeksafterintervention.ThelevelsofseruminflammatoryfactorsCreactiveprotein(CRP)andtumornecrosisfactor-α(TNF-α),serumendothelin(ET),angiotensinII(AngII)andnitrogenoxide(NO)werecomparedfor8weeksafterintervention.Results:Beforeandaftertheintervention,thesystolicbloodpressureoftailarteryineachSHRgroupwashigherthanthatinblankgroup(P<0.05).After4weeksand8weeksofintervention,thesystolicbloodpressureoftailarteryincombinedgroup,BushenHuoxueDecoctiongroupandcaptoprilgroupwaslowerthanthatinmodelgroup,andthesystolicbloodpressureoftailarteryincombinedgroupwaslowerthanthatincaptoprilgroupandBushenHuoxueDecoctiongroup(P<0.05);aftertheintervention,thesystolicbloodpressureoftailarteryinwasnosignificantdifferencebetween*基金项目:国家中医药管理局科研专项（JDZX20160489）;江苏省卫生计生委科研项目（H20160342）作者简介:彭金祥（1984-），男，硕士，主治中医师，研究方向:中西医结合心血管疾病，E-mail:ntzyypjx@163.com（收稿日期:2020-05-28接受日期:2020-06-21）现代生物医学进展biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.20NO.23DEC.20204419··BushenHuoxueDecoctiongroupandcaptoprilgroup(P>0.05).After8weeksofintervention,thelevelsofCRPandTNF-αinthemodelgroup,captoprilgroupandBushenHuoxueDecoctiongroupweresignificantlyhigherthanthoseintheblankgroup(P<0.05),therewasnosignificantdifferenceinthelevelsofCRPandTNF-αbetweenthecombinedgroupandtheblankgroup(P>0.05),andthelevelsofCRPandTNF-αinthecaptoprilgroup,BushenHuoxueDecoctiongroup,combinedgroupdecreasedgradually,andtherewassignificantdifferencebetweenthegroups(P<0.05).After8weeksofintervention,theconcentrationsofETandAngⅡinthemodelgroup,captoprilgroupandBushenHuoxueDecoctiongroupweresignificantlyhigherthanthoseintheblankgroup(P<0.05),therewasnosignificantdifferenceintheconcentrationsofETandAngⅡbetweenthecombinedgroupandtheblankgroup(P>0.05).TheconcentrationsofETandAngⅡinthecombinedgroup,BushenHuoxueDecoctiongroupandcaptoprilgroupwerelowerthanthoseinthemodelgroup,andthecombinedgroupwaslowerthanthoseinthecaptoprilgroupandBushenHuoxueDecoctiongroup(P<0.05).TheconcentrationsofNOinmodelgroupandcaptoprilgroupwaslowerthanthatinblankgroup,BushenHuoxueDecoctiongroupandcombinationgroup(P<0.05),andtherewasnosignificantdifferenceinNOconcentrationamongblankgroup,BushenHuoxueDecoctiongroupandcombinationgroup(P>0.05).Conclusion:BushenHuoxueDecoctionCombinedwithcaptoprilhasobviousantihypertensiveeffectonSHR,anditsmechanismmayberelatedtothedecreaseofseruminflammatoryfactors,ET,AngIIcontentandincreasingNOcontent.Keywords:BushenHuoxueDecoction;Captopril;Senile;Spontaneoushypertension;Rats;Inflammatoryfactors;VascularendothelialfunctionChineseLibraryClassification(CLC):R-33;R544.1Documentcode:AArticleID:1673-6273(2020)23-4418-04前言平均（236.22±25.33）g;空白组大鼠体重206-250g，平均（232.99±24.31）g。各组大鼠体重比较差异无统计学意义（P>0.05），自发性高血压是临床上一种较为常见的多发性遗传疾病，24℃-26℃条件下恒温喂养，定时通风，换垫料，光照时间12h，严重危害着人类的健康，随着人口老龄化的加剧，该病的患病自由饮用自来水，基础饲料适应性喂养7d。率逐年增加，老年自发性高血压作为高血压中一种特殊类型，1.2实验药物及干预方法是引起老年人冠心病、心功能不全、肾衰等疾病的重要因素之补肾活血汤配制:桑寄生20g;女贞子15g;淫羊藿15g;一[1-3]。近年来，中药由于毒副作用小、多靶点等优势已成为研究牛膝15g;丹参10g;黄芪10g;钩藤（后入）15g;益母草15g，热点，补肾活血汤是由桑寄生、女贞子、淫羊藿、牛膝、丹参、黄严格按照2015版《中国药典》的相关规定制备成0.63g/mL浓芪、钩藤、益母草组成，具有多靶点降压的药理作用[4，5]。相关研度补肾活血汤液。卡托普利混悬液的配制:卡托普利片（开博究显示[6，7]，炎症因子如C反应蛋白（Creactionprotion，CRP）、通），中美上海施贵宝制药有限公司生产（国药准字肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）参与了高血H31022986），每片12.5mg，研磨成粉，用蒸馏水溶解成3.5mg/mL压的病理生理过程，高血压患者血清中CRP、TNF-α水平将显混悬液。所有实验大鼠均自由进食饮水，每天上午十点灌胃干著高于正常人，且患者血压越高，血清中CRP、TNF-α浓度也越预一次，由同一名研究人员操作，连续干预8周。具体方案如高。另外，血管内皮功能障碍是自发性高血压的始动因素，同时下，联合组:给予补肾活血汤10mL/kg进行灌胃，联合给予卡也是导致靶器官受损的重要因素[8]。血管内皮细胞主要是通过托普利悬浊液10mL/kg;补肾活血汤组:给予补肾活血汤释放血管活性肽物质调节血压、调节血管张力，其中内皮素10mL/kg进行灌胃;卡托普利组:给予卡托普利混悬液10mL/kg（endothelin，ET）、血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）和一氧进行灌胃;模型组:给予蒸馏水10mL/kg进行灌胃;空白组:给化氮（nitricoxide，NO）均参与动脉粥样硬化的发生与发予蒸馏水10mL/kg进行灌胃。展[9，10]。当血管内皮受损时，活性肽物质分泌失衡，从而引发心1.3观察指标血管疾病的发生。本次研究以老龄自发性高血压大鼠（sponta-采用RBP-1型大鼠尾压心率测定仪）测定干预前、干预4neouslyhypertensiverats，SHR）作为研究对象，探讨补肾活血汤周后、8周后尾动脉收缩压，具体方法为:先将大鼠放入保温联合卡托普利的降压作用，并通过比较大鼠炎症因子及血管内套，温度为38.5℃左右，大约10min，大鼠尾动脉充分扩张后暴皮功能的变化，来分析补肾活血汤的降压机制，为补肾活血汤露大鼠尾巴，放入加压尾套，感应并测定尾动脉收缩压，连续测的临床应用提供理论基础。现将结果整理如下。量三次，三次尾动脉收缩压的平均值即为尾动脉血压值。所有1材料与方法1.1实验动物与分组大鼠末次干预后禁食不禁水10h，尾动脉采血10mL，于30min内超速离心取上清液，离心条件为:10min，3500r/min，采用酶联免疫吸附试验法检测血清CRP和TNF-α水平，试剂盒购于选取18月龄雄性SHR60只，按照随机数字表法分为卡托德国Herrenberg公司，检测仪器为上海巴玖实业有限公司生产普利组、补肾活血汤组、联合组、模型组，每组15只，另选取同的DG5033A全自动酶免分析仪。采用放射免疫分析技术检测月龄雄性Wistar-Kyoto大鼠15只作为空白组，其中卡托普利血清ET、AngII及NO浓度，试剂盒购于德国Herrenberg公组大鼠体重203-249g，平均（230.76±26.16）g;补肾活血汤组大司，检测仪器为上海核所日环光电仪器有限公司生产的鼠体重205-251g，平均（231.58±25.84）g;联合组大鼠体重SN-6100型全自动放射免疫γ计数仪，上述操作严格按照试剂201-246g，平均（235.61±25.32）g;模型组大鼠体重207-253g，盒说明进行。4420··现代生物医学进展biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.20NO.23DEC.20201.4统计学方法2.1各组大鼠干预前后尾动脉血压变化比较采用SPSS25.0进行数据分析，计量资料以（x±s）的形式表干预前后，SHR各组大鼠尾动脉收缩压高于空白组（P<0.示，采用t检验分析，计数资料以例数及百分率表示，比较采用05），干预4周后、8周后，联合组、补肾活血汤组、卡托普利组卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。尾动脉收缩压均低于模型组，且联合组尾动脉收缩压低于卡托2结果普利组、补肾活血汤组（P<0.05），干预后补肾活血汤组与卡托普利组尾动脉收缩压比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。Table1Comparisonofthechangesofsystolicbloodpressureoftailarteryineachgroupbeforeandafterintervention（x±s）表1各组大鼠干预前后尾动脉收缩压变化比较（x±s）GroupsCombinedgroupBushenHuoxueDecoctiongroupCaptoprilgroupModelgroupBlankgroupn1515151515Beforeintervention(mmHg)4weeksafterintervention8weeksafterintervention(mmHg)(mmHg)175.45±10.22a136.02±10.75abcd134.40±10.71abcd175.52±9.98a174.27±10.12a174.16±10.28a115.07±10.01159.98±10.50ab156.85±10.44ab158.73±10.46ab154.84±10.35ab175.62±11.06a174.03±11.16a116.14±9.82115.90±9.86Note:comparedwithblankgroup,aP<0.05;comparedwithmodelgroup,bP<0.05;comparedwithcaptoprilgroup,cP<0.05;comparedwithBushenHuoxueDecoctiongroup,dP<0.05.2.2各组大鼠干预8周后血清炎症因子比较TNF-α水平与空白组比较差异无统计学意义（P>0.05），卡托普干预8周后，模型组、卡托普利组、补肾活血汤组CRP、利组、补肾活血汤组、联合组CRP、TNF-α水平呈逐渐降低趋TNF-α水平与空白组比较显著升高（P<0.05），联合组CRP、势，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。Table2Comparisonofseruminflammatoryfactorsofratsineachgroupafter8weeksofintervention（x±s）表2各组大鼠干预8周后血清炎症因子比较（x±s）GroupsCombinedgroupBushenHuoxueDecoctiongroupCaptoprilgroupModelgroupBlankgroupn1515151515CRP(mg/L)21.15±1.17bcd25.54±1.09abc33.09±1.27ab36.18±1.45a20.12±1.21TNF-α(mg/mL)33.09±2.74bcd36.32±2.87abc41.51±2.96ab54.84±3.52a32.39±3.18Note:comparedwithblankgroup,aP<0.05;comparedwithmodelgroup,bP<0.05;comparedwithcaptoprilgroup,cP<0.05;comparedwithBushenHuoxueDecoctiongroup,dP<0.05.2.3各组大鼠干预8周后血管内皮功能比较卡托普利组、补肾活血汤组（P<0.05），模型组、卡托普利组NO干预8周后，模型组、卡托普利组、补肾活血汤组ET、Ang浓度低于空白组、补肾活血汤组、联合组（P<0.05），空白组、补Ⅱ浓度与空白组比较显著升高（P<0.05），联合组ET、AngⅡ浓肾活血汤组、联合组NO浓度比较差异无统计学意义（P>0.度与空白组比较差异无统计学意义（P>0.05），联合组、补肾活05）。见表3。血汤组、卡托普利组ET、AngⅡ浓度低于模型组，且联合组低于Table3Comparisonofvascularendothelialfunctionofratsineachgroupafter8weeksofintervention（x±s）表3各组大鼠干预8周后血管内皮功能比较（x±s）GroupsCombinedgroupBushenHuoxueDecoctiongroupCaptoprilgroupModelgroupBlankgroupn1515151515ET(pg/mL)AngⅡ(pg/mL)NO(μmol/mL)92.65±25.65bcd125.48±16.07bcd165.62±20.06bc135.24±27.58ab130.58±17.65abc164.32±20.11bc140.16±31.34ab140.23±19.46ab185.14±35.32a87.93±23.30169.98±21.11a110.93±22.14132.49±19.09a130.51±20.08a165.53±20.12Note:comparedwithblankgroup,aP<0.05;comparedwithmodelgroup,bP<0.05;comparedwithcaptoprilgroup,cP<0.05;comparedwithBushenHuoxueDecoctiongroup,dP<0.05.现代生物医学进展biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.20NO.23DEC.20204421··3讨论高血清NO浓度，通过调节血管的舒缩，来降低血压。综上所述，补肾活血汤与卡托普利联合应用可以显著降低自发性高血压是老年人常见的一种心血管疾病，据统计，老龄SHR血压，其作用机制可能通过降低炎症因子CRP、我国60岁及以上老年人高血压的患病率高达49%，随着近年TNF-α水平，改善血管内皮功能，降低血清ET、AngⅡ浓度，升来人口老龄化的加剧，预计到2050年，高血压的患病率还将继高血清NO浓度来实现的。续增加[11，12]，另外，高血压还会引发脑卒中、冠心病、心衰等一系参考文献（References）列的心脑血管疾病，严重危害老年人身体健康，影响老年人生[1]epovaK,AziriovaS,KovacovaD,etal.LisinoprilReverses活质量[13]。因此尽早诊断、及时治疗对自发性高血压病情控制BehaviouralAlterationsinSpontaneouslyHypertensiveRats[J].Gen显得尤为重要。近年来，中药在治疗老年自发性高血压方面取PhysiolBiophys,2019,38(3):265-270得突破性进展，其优势在于疗效稳定、在改善患者病情的同时能保护靶器官，减少并发症[14，15]。中医学认为肾虚血瘀是老年自发性高血压发生发展的重要病理机制[16，17]，补肾活血、化瘀通络是治疗该病的关键，补肾活血汤是由桑寄生、女贞子、淫羊藿、牛膝、丹参、黄芪、钩藤、益母草八味中药组成，桑寄生有补肝肾、强筋骨之功效，女贞子有补肾养阴、乌须明目之功效，淫羊藿有补肾壮阳之功效，牛膝有祛瘀血、通血脉之功效，丹参有活血凉血之功效，黄芪有补气健脾之功效，钩藤有清热平肝、熄风止痉之功效，益母草有活血调经、利水消肿之功效，诸药合用发挥补肾活血的作用[18-20]。[2]CaiXN,WangCY,CaiY,etal.Effectsofrenaldenervationonblood-pressureresponsetohemorrhagicshockinspontaneouslyhypertensiverats[J].ChinJTraumatol,2018,21(5):293-300[3]NaielS,CarlisleRE,LuC,etal.Endoplasmicreticulumstressinhibitionbluntsthedevelopmentofessentialhypertensioninthespontaneouslyhypertensiverat[J].AmJPhysiolHeartCircPhysiol,2019,316(5):H1214-H1223[4]解晓青,李洁,杨露露.补肾活血汤对老年高血压病左室肥厚和内皮功能的影响[J].世界中西医结合杂志,2019,14(3):423-425[5]李洁,解晓青.补肾活血汤治疗老年高血压病左室重构的临床研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2018,16(19):2867-2869本研究结果显示，干预前，SHR各组大鼠尾动脉收缩压高[6]吴巧娟,马亚楠,吴嘉鸣,等.血清炎性因子水平对高血压合并糖耐量于空白组，表明研究模型制备成功。卡托普利为人工合成的非减低的临床影响[J].解放军医药杂志,2020,32(3):83-85,104肽类血管紧张素转化酶抑制剂，用于治疗各种类型的高血压，[7]何清华,董敏,潘琦,等.炎性因子在预测2型糖尿病患者合并高血压是临床医生治疗高血压的首选药物，此外它还可以改善心肌损中的价值[J].中国糖尿病杂志,2019,27(12):891-895伤[21，22]，本研究结果显示干预8周后，补肾活血汤与卡托普利联[8]卞龙艳,武玲,朱慧.拉西地平对自发性高血压大鼠模型血管内皮的合应用降压作用明显，且显著优于单独使用卡托普利和单独使用补肾活血汤。越来越多的研究显示炎症因子参与高血压的发生发展，炎症因子与高血压互相影响，互为因果，形成恶性循环，一方面，炎症因子可以通过刺激血管，使得舒血管物质与缩血管物质的分泌平衡被打破，从而引起血压升高[23，24];另一方面，高血压会导致血管内皮受损，血压血流冲击动脉壁引发损伤[25，26]，并引发主动脉管壁增厚以及动脉粥样硬化，从而刺激血保护作用及机制分析[J].重庆医学,2019,48(6):933-936[9]李大鹏,孙党辉,张春茹,等.通心络胶囊对自发性高血压大鼠血管内皮功能和炎症机制影响研究[J].实用医院临床杂志,2017,14(4):241-243[10]陈其敬,罗江宾,张云波,等.原发性高血压患者血清FKN水平与血管内皮功能的关系[J].中国医药导报,2018,15(23):45-48[11]王增武,杨瑛,王文,等.我国高血压流行新特征-中国高血压调查的亮点和启示[J].中国循环杂志,2018,33(10):937-939管内皮分泌炎症因子，致使患者血清炎症因子升高，其中CRP、TNF-α是炎症反应的敏感指标[27，28]。本研究结果显示补肾活血[12]张丹薇,杨静玮,崔建兰,等.中国西南五省高血压患病、知晓、治疗和控制地区比较[J].中国公共卫生,2019,35(10):1293-1297汤与卡托普利联合应用可以显著改善高血压大鼠的炎症反应，[13]GaiZ,WangZ,ZhangL,etal.Paeonolprotectsagainsthypertension且作用明显优于单独使用卡托普利和单独使用补肾活血汤。inspontaneouslyhypertensiveratsbyrestoringvascularendothelium近年来有研究显示[29，30]，血管内皮功能异常也参与高血压[J].BiosciBiotechnolBiochem,2019,83(11):1992-1999的发生发展，内皮功能异常导致内皮依赖性舒张血管减弱，并[14]王菲,蔡峥.柴胡加龙骨牡蛎汤加减治疗老年原发性高血压疗效及通过分泌NO、ET、AngⅡ来调节血管张力，控制血压。NO是一种舒血管物质，它通过激活鸟苷酸环化酶来升高细胞内环磷鸟苷水平，减少Ca2+浓度，舒张血管，但是当高血压出现时，NO的分泌会减少。另外NO还具有抑制肾素合成、抑制血小板聚集等作用，保障血液流通及降压。ET则是体内血管收缩因子，抑制ET的分泌可以起到保护血管的作用。ET与NO作用相反，两者在机体内保持平衡，维持正常血压及血液循环。AngⅡ是肾素-血管紧张素系统中的最重要的物质，当其浓度升高时，与血管紧张素受体结合，引起血管收缩血压升高。本研究结果表明，干预8周后，联合组ET、AngⅡ、NO浓度与空白组无对患者内皮损伤标志物水平和血压水平影响[J].陕西中医,2019,40(9):1261-1264[15]桓滢,高俊,吴志华,等.息风降压汤联合尼莫地平治疗老年性高血压的临床疗效[J].中西医结合心脑血管病杂志,2020,18(4):700-702[16]陈春玲,蔡涛,李玉华,等.基于Logistic回归分析600例广西壮族、汉族原发性高血压患者中医体质分布规律[J].河北中医,2019,41(5):679-683[17]卜秀焕,刘更,张学新,等.补肾活血法对肾虚血瘀型老年性眩晕患者血流变学影响研究[J].辽宁中医药大学学报,2019,21(5):175-178[18]LiuSY,MengXF,LiuSW,etal.EffectofBushenHuoxuedecoctiononinhibitingosteogenicdifferentiationofvascularsmoothcellsby明显差异，且联合组ET、AngⅡ浓度低于补肾活血汤组、卡托普regulatingOPG/RANK/RANKLsysteminvascularcalcification[J].利组、模型组，NO浓度高于卡托普利组、模型组，提示补肾活血AnnTranslMed,2019,7(6):125汤与卡托普利联合应用可以显著降低血清ET、AngⅡ浓度，升（下转第4496页）4496··现代生物医学进展biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.20NO.23DEC.2020VEGFTOTALratioingestationaldiabetesmellitus[J].Gynecolcelldifferentiationandfataccumulation[J].SciRep,2018,8(1):Endocrinol,2019,35(9):811-81416166[12]中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南(2017年版)[22]AgrawalM,YeoCR,ShabbirA,etal.Fatstorage-inducing[J].中国实用内科杂志,2018,38(4):292-344transmembraneprotein2(FIT2)islessabundantintype2diabetes,[13]王炜,叶山东,钱立庭,等.新诊断2型糖尿病患者血清维生素Dandregulatestriglycerideaccumulationandinsulinsensitivityin与胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的相关性研究[J].中国糖尿病杂adipocytes[J].FASEBJ,2019,33(1):430-440志,2018,26(10):16-20[23]ChenH,LiuC,ChengC,etal.EffectsofApelinPeptidesonDiabetic[14]张桥,黄雪梅,李洁,等.2型糖尿病患者糖化血红蛋白水平与颈Complications[J].CurrProteinPeptSci,2018,19(2):179-189动脉内-中膜厚度的相关性[J].现代生物医学进展,2017,17(23):[24]GourdyP,CazalsL,ThalamasC,etal.Apelinadministrationimproves4533-4536insulinsensitivityinoverweightmenduringhyperinsulinaemic-[15]SacerdoteA,DaveP,LokshinV,etal.Type2DiabetesMellitus,euglycaemicclamp[J].DiabetesObesMetab,2018,20(1):157-164InsulinResistance,andVitaminD[J].CurrDiabRep,2019,19(10):[25]ChenW,BallandE,CowleyMA.HypothalamicInsulinResistancein101Obesity:EffectsonGlucoseHomeostasis[J].Neuroendocrinology,[16]MoustafaHAM,ElWakeelLM,HalawaMR,etal.EffectofNigella2017,104(4):364-381Sativaoilversusmetforminonglycemiccontrolandbiochemical[26]MajerczykM,Olszanecka-GlinianowiczM,Puzianowska-Kunickaparametersofnewlydiagnosedtype2diabetesmellituspatients[J].M,etal.Retinol-bindingprotein4(RBP4)asthecausativefactorandEndocrine,2019,65(2):286-294markerofvascularinjuryrelatedtoinsulinresistance[J].PostepyHig[17]LarssonSC,ScottRA,TraylorM,etal.Type2diabetes,glucose,MedDosw,2016,70(0):1267-1275insulin,BMI,andischemicstrokesubtypes:Mendelianrandomization[27]DuC,KongF.AProspectiveStudyofMaternalPlasmastudy[J].Neurology,2017,89(5):454-460ConcentrationsofRetinol-BindingProtein4andRiskofGestational[18]RuijgrokC,DekkerJM,BeulensJW,etal.SizeandshapeoftheDiabetesMellitus[J].AnnNutrMetab,2019,74(1):1-8associationsofglucose,HbA1c,insulinandHOMA-IRwithincident[28]PerducaM,NicolisS,MannucciB,etal.Humanplasmaretinol-type2diabetes:theHoornStudy[J].Diabetologia,2018,61(1):93-100bindingprotein(RBP4)isalsoafattyacid-bindingprotein[J].[19]WeberKS,SimonMC,StrassburgerK,etal.HabitualFructoseBiochimBiophysActaMolCellBiolLipids,2018,1863(4):458-466IntakeRelatestoInsulinSensitivityandFattyLiverIndexinRecent-[29]LaiJ,ChenF,ChenJ,etal.OverexpressionofdecorinpromotedOnsetType2DiabetesPatientsandIndividualswithoutDiabetes[J].angiogenesisindiabeticcardiomyopathyviaIGF1R-AKT-VEGFNutrients,2018,10(6):774signaling[J].SciRep,2017,7(1):1364-1379[20]MezzaT,CintiF,CefaloCMA,etal.β-CellFateinHumanInsulin[30]ZakiME,BashaW,YousefRN,etal.SerumVascularEndothelialResistanceandType2Diabetes:APerspectiveonIsletPlasticity[J].GrowthFactorinEgyptianObeseWomenwithInsulinResistance[J].Diabetes,2019,68(6):1121-1129OpenAccessMacedJMedSci,2019,7(8):1330-1334[21]LeeVR,BarrKJ,KellyJJ,etal.Pannexin1regulatesadiposestromal（上接第4421页）内皮功能、血流动力学及炎症反应的影响[J].海南医学院学报,[19]HuL,LiuY,WangB,etal.MiR-539-5pnegativelyregulates2018,24(8):841-844,848migrationofrMSCsinducedbyBushenHuoxuedecoctionthrough[25]刘成,陈伟,张俊仕,等.肥胖高血压患者血清炎症因子水平及其与targetingWnt5a[J].IntJMedSci,2019,16(7):998-1006血压的关系[J].广西医学,2019,41(15):1877-1878,1887[20]郑志轩.补肾活血汤对自发性高血压大鼠多因素的影响[J].云南中[26]张德慧.慢性炎症与肥胖型高血压关联机制的研究进展[J].临床与医中药杂志,2017,38(9):68-70病理杂志,2019,39(4):869-873[21]Mitr誰gaKA,Spa覥ekAM,NoyńskiJ,etal.Cardiomyopathydevelopmentprotectionaftermyocardialinfarctioninrats:Successfulcompetitionformajordihydropyridines'commonmetaboliteagainst[27]姜世平,王颖.阿托伐他汀钙联合硝苯地平缓释片治疗高血压的临床疗效及对TNF-α、CRP、IL-4和IL-10的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2019,17(4):555-557captopril[J].PLoSOne,2017,12(6):e0179633[28]高凌.超敏C反应蛋白与高血压的相关性分析[J].微创医学,2019,[22]GanZ,HuangD,JiangJ,etal.Captoprilalleviateshypertension-14(4):537-538,542inducedrenaldamage,inflammation,andNF-κBactivation[J].BrazJ[29]蔡延霞,卢海德.抗氧化维生素C、E对高血压病人血管内皮功能障MedBiolRes,2018,51(11):e7338碍的修复作用[J].医学美学美容,2020,29(6):90[23]彭涛.福辛普利对自发性高血压大鼠血压水平、炎症反应及心血管重构的影响[J].中国心血管病研究,2018,16(7):663-666[30]段周芳,吴丹丹,赵丹,等.高血压患者尿微量白蛋白、血清维生素D水平及血管内皮功能变化及与颈动脉粥样硬化的关系[J].中国实[24]戈陈艳,杜林哲,张雪萌,等.厄贝沙坦氢氯噻嗪对高血压患者血管用医刊,2019,46(22):71-74
-
新型芹菜素纳米脂质体对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的观察新型芹菜素纳米脂质体对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡水平的影响ꎮ方法采用薄膜水合结合超声分散技术制备新型芹菜素纳米脂质体并进行质量考察ꎮ将健康雄性SD大鼠60只ꎬ随机分成正常对照组、模型对照组、空白脂质体组及芹菜素脂质体组ꎬ每组15只ꎮ采用大鼠腹腔注射链脲佐菌素(70mgkg-1)建立糖尿病模型ꎬ2周后ꎬ芹菜素脂质体组尾静脉给予芹菜素纳米脂质体30μgkg-1ꎬ空白脂质体组尾静脉给予等剂量空白纳米脂质体ꎬ模型对照组及正常对照组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液ꎮ12周之后处死大鼠ꎬ取出心肌组织ꎬ分别采用TUNEL凋亡染色测定大鼠心肌细胞凋亡指数ꎬWesternblotting分析各组大鼠心肌Bax及Bcl~2蛋白表达ꎮ结果TUNEL凋亡染色显示ꎬ与正常对照组比较ꎬ模型对照组及空白脂质体组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.05)ꎻ芹菜素脂质体组凋亡指数显著下降(P<0.05)ꎮWesternblotting分析显示ꎬ与正常对照组比较ꎬ模型对照组及空白脂质体组大鼠心肌细胞Bax含量显著升高(P<0.01)ꎬBcl~2含量显著下降(P<0.01)ꎻ与模型对照组及空白纳米脂质体组比较ꎬ芹菜素脂质体组心肌细胞Bax含量显著下降(P<0.01)ꎬBcl~2含量显著升高(P<0.01)ꎮ结论芹菜素纳米脂质体能够通过调节细胞凋亡相关蛋白Bcl~2/Bax途径ꎬ降低糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡水平ꎮ关键词芹菜素ꎻ纳米脂质体ꎻ细胞凋亡ꎻ心肌病ꎬ糖尿病文献标识码A中图分类号R282.71ꎻR285.5DOI10.3870/j.issn.1004~0781.2019.05.004开放科学(资源服务)标识码(OSID)文章编号1004-0781(2019)05-0555-05DiabeticCardiomyopathyEffectofApigenin~loadedNanoliposomesonMyocardialCellsApoptosisInducedbyZHANGYadan(DepartmentofPharmacyꎬNingboCityMedicalTreatmentCenterLihuiliHospitalꎬNingbo315040ꎬChina)ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectofapigenin~loadednanoliposomesonmyocardialcellsapoptosisinducedbydiabeticcardiomyopathy.MethodsTheapigenin~loadednanoliposomeswerepreparedbyfilmhydrationandultrasonicdispersiontechnologyandtheirqualityinspectionswerealsoinvestigated.SixtySDratswererandomlydividedintonormalcontrolgroupꎬmodelcontrolgroupꎬblankandapigenin~loadednano~liposomesgroup.RatmodeloftypeⅠdiabeteswasinducedbysingleintraperitonealinjectionofSTZ.AftertwoweeksofSTZinjectionꎬthemodelratswereusedforthisstudy.Theratsofapigeninloadednano~liposomestreatmentgroupweretreatedwithapigeninloadednano~liposomesviacaudalveinadministrationfor12weeks(threetimesaweek).Andtheratsofnormalcontrolgroupandmodelcontrolgroupwereadministratedequivalentvolumeof0.9%sodiumchloridesolution.Aftertreatmentfor12weeksꎬtheexperimentalanimalsweresacrificedandtheirheartswereharvestedafter0.9%sodiumchloridesolutionperfusion.ThemyocardialcellapoptosisindexwasdetectedbyTUNELstainingandtheexpressionsofBcl~2andBaxꎬwhichwererelatedtothecellapoptosisꎬwereexaminedbyWesternblottinganalysis.ResultsTUNELstainingshowedtheapoptosisindexintheratsofdiabetesandblanknano~liposomesgroupsweresignificanthigherthanthenormalcontrolgroup(P<0.05).Howeverꎬtherewassignificantdecreaseofapoptosisindexinthediabetesratsafterthetreatmentofapigeninloadednano~lipsomes(P<0.05).MoreoverꎬWesternblottinganalysisconfirmedthattherewassignificantlowerexpressionofBcl~2andhigherexpressionofBaxintheheartsofmodelcontrolgroupandblanknano~liposomestreatedratscomparedwithnormalcontrolrats(P<0.01).Comparedwiththediabetesandblanknano~liposomesgroupꎬtheapigeninloadednano~liposomestreatedgroupsshowedhigherexpressionofanti~apoptosisproteinBcl~2(P<0.01)andlowerexpressionofpro~apoptosisproteinBax(P<0.01).ConclusionApigeninloadednano~liposomeshavereducedtheapoptosisofmyocardialcellsindiabeticcardiomyopathyratsviatheBcl~2/Baxpathway.KEYWORDSApigeninꎻNanoliposomesꎻCellsapoptosisꎻCardiomyopathyꎬdiabetic糖尿病已经成为危害人类健康的重大疾病之一[1~2]ꎮ糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathyꎬDCM)是糖尿病患者心肌细胞原发性损伤引起的心脏结构以及功能的障碍ꎬ已经成为患者致死的主要原因[3]ꎮ糖655尿病引起的高血糖、高脂血症可以造成心肌细胞凋亡ꎬ是DCM的主要病理特征之一ꎬ可进一步引起左心室功能紊乱以及心肌细胞纤维化[4]ꎮ研究显示ꎬ芹菜素能够显著降低糖尿病动物血糖及血脂水平ꎬ是潜在的防治DCM的药物[5]ꎮ然而ꎬ由于其存在溶解性低、在体应用难吸收等问题限制了临床应用[6]ꎮ脂质体是一种新型的被动靶向药物递送载体ꎬ应用脂质体包载难溶性药物ꎬ能够提高药物溶解度ꎬ同时促进药物的细胞膜渗透性ꎬ增加药物的吸收[7~8]ꎬ从而实现难溶性药物在体临床应用ꎮ笔者制备新型纳米脂质体包载难溶性药物芹菜素ꎬ考察其对于DCM大鼠心肌细胞凋亡的预防作用及相关机制ꎮ1材料与方法1.1实验动物健康雄性SD大鼠60只ꎬ体质量为180~220gꎬ清洁级ꎬ由温州医科大学实验动物中心购自上海斯莱克实验动物有限公司ꎮ实验动物使用许可证号:SYXK(浙)2015~0001ꎬ合格证号:wydw2013~0050ꎬ饲养条件符合实验动物管理与使用指南ꎮ1.2主要试剂芹菜素(Sigma~Aldrich公司ꎬ含量≥99%ꎬCAS号:520~36~5)ꎬ注射级蛋黄卵磷脂(上海艾韦特医药科技有限公司ꎬCAS号:93685~90~6)ꎬ戊巴比妥钠(Sigma~Aldrich公司ꎬCAS号:57~33~0)ꎬ链脲佐菌素(Sigma~Aldrich公司ꎬCAS号:18883~66~4)ꎬTUNEL凋亡试剂盒(RocheAppliedScienceꎬ批号:11684795910)ꎬBcl~2蛋白(SantaCruzBiotechnologyꎬ批号:sc~71957)以及Bax一抗(SantaCruzBiotechnologyꎬ批号:sc~70407)ꎬ辣根过氧化酶标记羊抗兔二抗(SantaCruzBiotechnologyꎬ批号:sc~2004)ꎬ血糖试纸(德国罗氏活力型血糖仪专用试纸ꎬ批号:Accu~ChekPerformateststrips)ꎮ1.3芹菜素纳米脂质体的制备及其性质考察参考JIN等[9]介绍的方法制备新型芹菜素纳米脂质体:芹菜素1mgꎬ蛋黄卵磷脂10mgꎬ加入到处方量无水乙醇中完全溶解ꎬ将上述溶液在真空条件下旋转蒸发乙醇ꎬ形成载药脂质薄膜ꎬ然后加入适量纯化水水化12hꎬ形成胶体溶液ꎮ将上述胶体溶液在室温(25℃)及高压(73.5MPa)条件下ꎬ超声分散15s(循环3次)ꎬ制备芹菜素纳米脂质体ꎮ应用上述方法同时制备空白纳米脂质体ꎮ采用扫描电子显微镜考察载药脂质体表观形态ꎬ收稿日期2018-01-22修回日期2018-05-23作者简介章雅丹(1986-)ꎬ女ꎬ浙江宁波人ꎬ主管药师ꎬ学士ꎬ研究方向:医院药学及药剂学ꎮORCID:0000~0003~0459~788Xꎮ电话:0574-87018762ꎬE~mail:2234446854@qq.comꎮHeraldofMedicineVol38No5May2019同时应用动态光衍射法测定载药及空白脂质体的粒径和Zeta电位分布ꎮ包封率测定:将上述制备载药脂质体溶液放入透析袋(截留相对分子质量10000~12000)ꎬ室温透析2hꎬ除去未包封药物及他制备辅料ꎮ然后甲醇破坏脂质体ꎬ应用高效液相色谱(HPLC)法测定载药脂质体中药物含量ꎮ载体包封率(%)=载药脂质体中药物含量/最开始加入药物×100%ꎮ1.4糖尿病实验动物模型建立及给药方法采用随机数字表法将60只大鼠分为正常对照组、模型对照组、空白脂质体组、芹菜素脂质体组ꎬ每组15只ꎮ饲养1周后ꎬ参考ZHAO等[10]介绍的方法建立大鼠1型糖尿病模型ꎬ腹腔注射1%链脲佐菌素(70mgkg-1)ꎬ正常对照组腹腔注射同剂量0.9%氯化钠溶液ꎮ于注射后第3天、第7天以及第14天尾静脉取血测定血糖ꎮ3次测定结果均大于16.7mmolL-1且实验动物明显出现多饮、多食、多尿以及体质量下降等现象即说明造模成功ꎮ此后芹菜素脂质体组尾静脉给予芹菜素纳米脂质体(30μgkg-1)ꎬ空白脂质体组尾静脉给予等剂量空白纳米脂质体ꎬ每周3次ꎬ持续给药12周ꎮ模型对照组以及正常对照组每周尾静脉给予同剂量0.9%氯化钠溶液ꎮ12周之后处死大鼠ꎬ迅速开胸ꎬ取出心脏ꎬ在左心室中部沿横轴切取厚度为0.5cm的心肌组织ꎬ放置在4%多聚甲醛中ꎬ剩余心肌细胞-80℃保存ꎮ1.5心肌细胞TUNEL染色按照罗氏TUNEL凋亡试剂盒说明书ꎬ将组织切片脱蜡、乙醇梯度浸洗ꎬProteinaseK工作液透化ꎬ在切片上加TUENEL反应液ꎬ盖膜ꎬ37℃孵育60minꎬ磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次ꎬDAB室温显色10minꎬPBS冲洗3次ꎬ每次5minꎬ乙醇梯度脱水、透明和封片ꎬ于光镜下观察ꎬ每只大鼠做切片3张ꎬ每张切片随机计数无重叠、具有代表性的5个400倍视野ꎬ以平均每100个细胞核中含凋亡细胞的数量作为心肌细胞凋亡指数(apoptosisindexꎬAI)ꎮ1.6Westernblotting检测将组织从-80℃冰箱中取出ꎬ在裂解缓冲液中匀浆ꎬ4℃离心ꎬ取上清液ꎬ高速离心ꎬ沉淀用TritonX~100缓冲液1mL溶解ꎬ二喹啉甲酸试剂盒测定蛋白浓度备用ꎮ每组按20μg蛋白的溶液体积上样ꎬ进行聚丙烯酰胺凝胶电泳ꎬ电压设为90Vꎬ根据Maker移动情况适时终止电泳ꎮ进行转膜ꎬ封闭ꎬ洗膜ꎬ加入15000稀释的Bax以及Bcl~2一抗ꎬ4℃孵育过夜ꎮTBST洗膜3次ꎬ加二抗室温孵育1hꎮ以β~actin为参照ꎬDAB医药导报2019年5月第38卷第5期显色后应用凝胶成像分析仪分析ꎮ1.7统计学方法采用SPSS18.0版统计软件进行分析ꎮ正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示ꎬ多组间均数比较采用单因素方差分析ꎬ组间两两比较采用LSD~t检验ꎮ以P<0.05为差异有统计学意义ꎮ2结果2.1芹菜素纳米脂质体的性状表征扫描电镜观察空白及载药纳米脂质体如图1所示ꎬ空白及载药纳米脂质体的形态圆整、分散性好、无粘连ꎮ动态光衍射法测定载药及空白脂质体的粒径和Zeta电位分布结果显示:空白及载药纳米脂质体的平均粒径分别(98.3±1.3)和(103.4±1.2)nmꎬ说明载药前后纳米脂质体的粒径无明显变化ꎮ同时空白及载药纳米脂质体的多分散系数(polydispersityindexꎬPDI)分别为0.102和0.108ꎬ均<0.2ꎬ说明载药及空白纳米脂质体稳定性好ꎬ粘连少ꎮZeta电位测定结果显示:空白及载药纳米脂质体的Zeta电位分别为(-23.8±1.6)和(19.8±1.3)mVꎬ绝对值均大于15mVꎮ包封率是评价纳米载体的重要质量指标ꎬ本次研究制备的纳米脂质体的包封率测定结果为(93.42±3.41)%ꎬ说明新型纳米脂质体能够较好地实现对于芹菜素的包载ꎮ2.2心肌细胞TUNEL凋亡染色结果各组实验大鼠TUNEL染色结果见图2所示:正常心肌细胞核呈蓝色ꎬ755凋亡细胞核呈棕褐色ꎬ箭头所示为凋亡心肌细胞的细胞核ꎮ与正常对照组比较ꎬ模型对照组大鼠及空白脂质体干预组12周之后心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.05)ꎮ与模型对照组及空白脂质体组比较ꎬ经过连续12周芹菜素脂质体治疗的实验大鼠心肌细胞凋亡水平显著下降(P<0.05)ꎮA.空白纳米脂质体ꎻB.芹菜素纳米脂质体图1空白及载药纳米脂质体电镜图A.blanknanoliposomesꎻB.apigenin~loadednanoliposomesFig.1Blankanddrug~loadednanoliposomesobservedbyscanningelectronmicroscope2.3心肌细胞Westernblotting检测结果各实验组大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl~2及Bax的Westernblotting结果分析如图3所示ꎮ与正常对照组比较ꎬ糖白Bcl~2显著降低(P<0.01)ꎬBax显著升高(P<0.01)ꎮ尿病大鼠及空白纳米脂质体干预大鼠心肌凋亡相关蛋A.正常对照组ꎻB.模型对照组ꎻC.空白脂质体组ꎻD.芹菜素脂质体组ꎮ与正常对照组比较ꎬ∗1P<0.05ꎻ与芹菜素脂质体组比较ꎬ∗2P<0.05图24组大鼠心肌细胞凋亡情况(n=15)A.normalcontrolgroupꎻB.modelcontrolgroupꎻC.blanknanoliposomegroupꎻD.apigeninloadednanoliposomegroup.Comparedwithnormalcontrolgroupꎬ∗1P<0.05ꎻcomparedwithapigenin~loadednanoliposomegroupꎬ∗2P<0.05Fig.2Myocardialapoptosisinfourgroupsofrats(n=15)855nanoliposomeA.正常对照组ꎻB.模型对照组ꎻC.空白脂质体组ꎻD.芹菜素纳米脂质体组ꎮ与正常对照组比较ꎬ∗1P<0.01ꎻ与芹菜素脂质体组比较ꎬ∗2P<0.01groupꎻD.apigenin~loaded图34组大鼠心肌Bcl~2及Bax的表达情况(n=15)A.normalcontrolgroupꎻB.modelcontrolgroupꎻC.blanknanoliposomegroup.Comparedwithnormalcontrolgroupꎬ∗1P<0.01ꎻcomparedwithapigenin~loadednanoliposomegroupꎬ∗2P<0.01Fig.3ExpressionofBcl~2andBaxinmyocardiuminfourgroupsofrats(n=15)与模型对照组大鼠及空白纳米脂质体组比较ꎬ芹菜素纳米脂质体治疗组的心肌Bcl~2含量显著升高(P<0.01)ꎬBax含量显著降低(P<0.01)ꎮ3讨论糖尿病引起的高血糖能够通过氧化应激损伤及Bax途径等诱导患者心肌细胞凋亡ꎬ加重DCM的进程[11~12]ꎬ最终导致患者死亡ꎮ芹菜素是一种天然的抗氧化剂[13]ꎬ能够改善脂肪肝患者的血脂异常以及肥胖型糖尿病动物的的胰岛素抵抗ꎬ降低其血糖水平[14]ꎮ同时芹菜素还能够显著降低缺血~再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡水平[15]ꎮ然而芹菜素存在溶解度低及在体吸收差等生物药动学参数缺陷ꎬ限制了其临床应用ꎮ载体质量考察结果显示ꎬ空白及载药纳米脂质体的形态圆整ꎬ载药前后形态无明显变化ꎮ多分散系数PDI均小于0.2ꎬ说明本次实验制备的载药纳米脂质体分散性好ꎬ粘连少ꎮ粒径分析及Zeta电位测定显示ꎬ载药及空白纳米脂质体的粒径接近100nmꎬZeta电位绝对值均大于15ꎬ说明载药及空白纳米脂质体的稳定模型对照组大鼠及空白纳米脂质体组大鼠的心肌细胞蛋白家族在各类刺激信号引起的凋亡中起到关键作HeraldofMedicineVol38No5May2019性好[16]ꎮ另外包封率测定结果显示:芹菜素纳米脂质体的包封率高ꎬ说明采用薄膜水合结合超声分散法能够较好地实现对于芹菜素的包载ꎮ12周之后模型对照组大鼠及空白脂质体干预大鼠心肌细胞的凋亡指数显著高于正常对照组(P<0.05)ꎬ说明各组大鼠DCM动物模型成功ꎬ其心肌细胞出现明显凋亡ꎮ而经过芹菜素纳米脂质体持续干预12周之后的糖尿病大鼠心肌细胞凋亡指数显著低于模型对照组大鼠(P<0.05)ꎬ接近正常水平ꎬ说明芹菜素脂质体能够有效降低DCM引起心肌凋亡ꎮ另外ꎬ本次实验研究还初步考察了芹菜素纳米脂质体对于降低DCM大鼠心肌细胞凋亡水平的作用机制ꎮ研究表明ꎬ在目前已知的凋亡调节蛋白中ꎬBcl~2用ꎮBcl~2和Bax蛋白水平的高低与凋亡调控直接相关ꎬBax升高ꎬ促进细胞凋亡ꎻBcl~2增高ꎬ抑制细胞凋亡[17]ꎮ本次研究应用Westernblotting技术检测了各组大鼠心肌细胞Bcl~2及Bax的蛋白含量ꎮ结果显示ꎬ凋亡相关蛋白Bax含量显著提高(P<0.01)ꎬ抗凋亡相关蛋白Bcl~2含量显著降低(P<0.01)ꎻ与糖尿病及空白纳米脂质体组大鼠比较ꎬ经过剂量芹菜素纳米脂质体干预后的糖尿病大鼠心肌细胞Bcl~2含显著升高(P<0.01)ꎬ而Bax含量显著下降(P<0.01)ꎬ说明芹菜素纳米脂质体可能通过调节Bcl~2/Bax途径降低DCM大鼠的心肌细胞凋亡水平ꎮ尿病引起的大鼠心肌细胞凋亡ꎬ为临床DCM患者的防治提供了一种新的思路ꎮ[1]SHAWJEꎬSICREERAꎬZIMMETPZ.Globalestimatesoftheprevalenceofdiabetesfor2010and2030[J].DiabetResClinPractꎬ2010ꎬ87(1):4-14.[2]ZIMMETPꎬALBERTIKGꎬSHAWJ.Globalandsocietalimplicationsofthediabetesepidemic[J].Natureꎬ2001ꎬ414(6865):782-787.cardiovascularriskfactors:theFraminghamstudy[J].Circulationꎬ1979ꎬ59(1):8-13.cardiomyopathy[4]CAILꎬKANGYJ.Celldeathanddiabetic[J].CardiovascToxicolꎬ2003ꎬ3(3):219-228.[5]刘俊法.芹菜素对糖尿病大鼠降血糖、调节血脂和抗氧化能力的影响[J].中药药理与临床ꎬ2014ꎬ5(1):44-47.[6]ZHANGJꎬLIUDꎬHUANGYꎬetal.Biopharmaceuticsclass~ificationandintestinalabsorptionstudyofapigenin[J].IntJPharmacꎬ2012ꎬ436(1/2):311-317.[3]KANNELWBꎬMCGEEDL.Diabetesand本实验证实了芹菜素纳米脂质体能够有效抑制糖参考文献offoralphainterferon[8]JORAHOLMENMWꎬBASNETPꎬACHARYAGꎬet医药导报2019年5月第38卷第5期[7]CASTOLDIAꎬHERRCꎬNIEDERSTRASSERJꎬal.ettreatmentoflocalliposomesCalcifediol~loadedJPharmacinfections[J].EurpulmonarybacterialBiopharmaceuticsꎬ2017ꎬ118(1):62-67.al.therapyimprovePEGylatedliposomesfortopicalvaginalJPharmacdelivery[J].EurBiopharmaceuticsꎬ2017ꎬ113(1):132-139.[9]JINXꎬYANGQꎬZHANGY.SynergisticapoptoticeffectsofapigeninTPGSliposomesandtyroservatide:implicationsforeffectivetreatmentoflungcancer[J].IntJNanomedicineꎬ2017ꎬ12(5):109-118.[10]ZHAOYZꎬZHANGMꎬWONGHLꎬetal.PreventdiabeticcardiomyopathyindiabeticratsbycombinedtherapyofaFGF~loadedultrasound~targetedmicrobubbledestructiontechnique[J].JControlRelSocꎬ2016ꎬ223(1):11-21.inducedapoptosisinmousemyocardium:mitochondrialcytochromeC~mediatedcaspase~3activationpathway[J].Diabetesꎬ2002ꎬ51(6):1938-1948.[11]CAILꎬLIWꎬWANGGꎬetal.Hyperglycemia~[12]ZOUMHꎬXIEZ.Regulationofinterplaybetweenauto~nanoparticlesand[14]JUNGUJꎬCHOYYꎬCHOIMS.Apigenin955phagyandapoptosisinthediabeticheart:newroleofAMPK[J].Autophagyꎬ2013ꎬ9(4):624-625.[13]LEFORTECꎬBLAYJ.Apigeninanditsimpactongastro~intestinalcancers[J].MolecularNutritFoodResꎬ2013ꎬ57(1):126-144.amelioratesdyslipidemiaꎬhepaticsteatosisandinsulinresistancebymodulatingmetabolicandtranscriptionalprofilesintheliverofhigh~fatdiet~inducedobesemice[J].Nutrientsꎬ2016ꎬ8(5):E305.[15]HUJꎬLIZꎬXULTꎬetal.Protectiveeffectofapigeninonischemia/reperfusioninjuryoftheisolatedratheart[J].CardiovasToxicolꎬ2015ꎬ15(3):241-249.Using[16]ZHAOYZꎬZHANGMꎬTIANXQꎬetal.basicfibroblastnanoliposomecombinedwithultrasound~introducedtechnologytoearlyintervenethediabeticcardiomyopathy[J].IntJNanomedicꎬ2016ꎬ11(4):675-686.[17]XIEZꎬKOYAMATꎬSUZUKIJꎬetal.Coronaryreperfusionfollowingischemia:differentexpressionofbcl~2andbaxproteinsꎬandcardiomyocyteapoptosis[J].JapanHeartJꎬ2001ꎬ42(6):759-770.growthfactor绿茶多酚对缺血~再灌注氧化损伤肾脏的保护作用曹智修ꎬ柳懿鹏ꎬ章传华ꎬ袁敬东(武汉市第一医院泌尿外科ꎬ武汉430022)摘要目的观察绿茶多酚对缺血~再灌注氧化损伤肾脏的保护作用ꎮ方法SPF级雄性成年SD大鼠30只ꎬ随机分为假手术组(Sham组)、缺血~再灌注组(I/R组)、绿茶多酚+缺血~再灌注组(I/R+G组)ꎬ每组10只ꎮSham组给予0.9%氯化钠溶液ꎻI/R组和I/R+G组分别给予0.9%氯化钠溶液60mgkg-1d-1和绿茶多酚60mgkg-1d-1灌胃ꎬ4周后行缺血~再灌注处理50minꎮ所有大鼠手术结束后1h取肾脏标本进行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肾损伤分子~1(KIM~1)和细胞凋亡检测ꎮ结果Sham组SOD和MDA分别为(510.67±16.91)Umg-1ꎬ(0.02±0.03)nmolmg-1ꎻI/R组SOD和MDA分别为(174.02±9.62)Umg-1ꎬ(4.10±0.09)nmolmg-1ꎻI/R+G组SOD和MDA分别为(439.17±8.27)Umg-1ꎬ(1.78±0.08)nmolmg-1ꎮSham组和I/R+G组SOD明显较I/R组高ꎬ而MDA明显较I/R组低ꎻSham组、I/R组和I/R+G组KIM~1表达评分分别为0.02±0.02ꎬ4.52±0.11ꎬ1.98±0.09ꎮI/R组KIM~1表达明显较Sham组和I/R+G组高(P<0.05)ꎻSham组、I/R组和I/R+G组凋亡指数分别为0.08±0.08ꎬ53.39±2.95ꎬ14.86±1.19ꎬSham组和I/R+G组凋亡指数明显较I/R组低(P<0.05)ꎮ结论绿茶多酚对缺血~再灌注氧化损伤肾脏具有较好的保护作用ꎮ关键词绿茶多酚ꎻ肾脏ꎻ缺血~再灌注ꎻ保护作用中图分类号R282.71ꎻR285.5DOI10.3870/j.issn.1004~0781.2019.05.005文献标识码A文章编号1004-0781(2019)05-0559-04开放科学(资源服务)标识码(OSID)ProtectiveEffectofGreenTeaPolyphenolsonRenalIschemia/ReperfusionInjuryCAOZhixiuꎬLIUYipengꎬZHANGChuanhuaꎬYUANJingdong(DepartmentofUrologicSurgeryꎬWuhanNO.1HospitalꎬWuhan430022ꎬChina)ABSTRACTObjectiveToobservetheprotectiveeffectofgreenteapolyphenolsonischemia/reperfusioninjuryofratkidney.MethodsAtotal30maleSpragueDawleyratswererandomlydividedintoshamgroup(n=10)ꎬI/Rgroup(n=10)andI/R+Ggroup(n=10)ꎬrespectively.BothshamgroupandI/Rgroupweregavagedwith0.9%sodiumchloridesolution
医学 热搜词
相关类别
医学 最新文章
- 1 锁定钢板联合同种异体骨_自体骨移植治疗Sanders Ⅲ、Ⅳ型跟骨骨折
- 2 上海男科学临床诊治研究回顾与展望
- 3 引导骨再生术结合应用浓缩生长因子技术的应用与护理
- 4 COVID-19恢复期患者血清SARS-CoV-2抗体变化与免疫状况的相关性研究
- 5 PERK在肝癌中的表达及其对肝癌细胞侵袭和索拉菲尼抵抗的影响
- 6 拉帕替尼与卡培他滨对HER-2阳性乳腺癌患者的疗效与安全性分析
- 7 MMPI在军事飞行人员体检中应用的信效度分析及常模编制
- 8 一种用于乳腺电阻抗扫描检测的目标体深度信息提取方法研究
- 9 我国言语语言康复教育相关问题探讨--2019年首届中国言语语言康复高等教育论坛纪要
- 10 张伯礼此次中医药抗疫过程的一些经验和反思