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医学
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新型NGR靶向载shRNA脂质微球抑制胶质瘤的生长
目的 制备一种新型的NGR靶向载shRNA脂质体，研究其对大鼠原位胶质瘤的抑制作用。方法 （1）先后制备脂质微球（lipo）、NGR靶向微球（lipo-NGR）和含质粒靶向微球（shBirc5-lipo-NGR），并对各种微球的性质进行表征;（2）免疫组织化学法研究shBirc5-lipo-NGR对大鼠原位胶质瘤模型的靶向性;（3）MRI T2实时监测原位胶质瘤生长情况及观察大鼠生存期。结果 （1）成功制备了新型脂质体shBirc5-lipo-NGR，其粒径和电位分别为（186.2±74.07）nm和（10.9±3.76）mV;（2）shBirc5-lipo-NGR组Birc5蛋白较shBirc5-lipo、shControl-lipo-NGR及对照组明显减少;（3）MRI T2显示在成瘤后的第12、17和22天时，对照组肿瘤的平均体积及生长速度是shBirc5-lipo-NGR组的4.7倍左右（P<0.05）。shBirc5-lipo-NGR、shBirc5-lipo、shControl-lipo-NGR及对照组的中位生存期分别为30、24、22和21天。结论
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血游离DNA在COPD患者中的表达水平及价值
目的研究血游离DNA(cfDNA)在慢性阻塞性肺疾病患者(COPD)中的表达水平及价值。方法选择呼吸重症监护病房(RICU)68例AECOPD患者、稳定期COPD患者82例及健康对照者72例，测定其cfDNA、WBC、IL-6及PCT，分析COPD患者中cfDNA水平及其临床意义。结果AECOPD患者在急性加重期时各项炎症指标明显高于患者的稳定期。而COPD稳定期只有cfDNA水平高于正常组。AECOPD患者血清cfDNA高与其的每日痰液量多相关。AECOPD患者血清cfDNA水平与氧合指数、PaCO2、入住ICU时APA-CHEII评分有明确相关性，同时患者cfDNA水平与ICU病死率相关。COPD分组、GOLD分级与血清cfDNA水平有关，病情越重，血清cfDNA水平越高，cfDNA水平高，发生急性发作的风险增加。结论血清cfDNA是COPD的重要生物学标志物，可提示COPD的病情和预后。稳定期的血清cfDNA与COPD持续的炎症水平有关，对急性
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维生素D对免疫细胞影响的研究进展
Dreceptor，VDR）来维生素活性维生素，DD属固醇类衍生物结合而发挥生物学效应，是维持人体生命稳定的一种营养素活性维生素。D通过与维生素受体的免疫调节作用便引起了人们极大关注预处理可调控巨噬细胞极化，自。VDR和羟化酶研究表明1α-。，（cytochromeP45027B1，CYP27B1）通过下调相关分子表达维生素D从而缓解自身免疫性疾病的病程进展此外D（vitaminD在免疫细胞中被发现以分化成熟。DC细胞中均存在抑制，活化的该文就维生素，D。，T、B对免疫细胞影响的研究作一综述。提示维生素VDR，T、B
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产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析
为探明大肠杆菌噬菌体的生物学特性和全基因组特征,本研究以在广西某猪场污水中分离得到的1株产志贺毒素且多重耐药的大肠杆菌GXEC010为宿主菌,同时在污水中分离到1株具有裂解作用的噬菌体,并通过透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线绘制、热敏感性与酸碱度稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序等方法分析该噬菌体的生物学特性与基因组特征.结果表明,分离纯化得到能高效裂解大肠杆菌GXEC010的噬菌体,命名为vB_EcoM_BP10,其噬菌斑呈清晰透明,边缘光滑整齐;该噬菌体的最佳感染复数为1;一步生长曲线结果显示,感染宿主菌潜伏期为5min,爆发期为65min,爆发量为51;可耐受温度范围为30~60℃,在pH为5~8的环境中能维持稳定性;噬菌体杀菌试验结果显示,感染复数(MOI)为1时噬菌体vB_EcoM_BP10具有良好的杀菌效果.全基因组测序结果表明,噬菌体vB_EcoM_BP10基因组总片段长度为52288bp,GC含量为44.16%,含有71个阅读框(ORF).GO功能注释表明,噬菌体vB_EcoM_BP10可参与小分子代谢、细胞氮化合物代谢等生物学过程中,具备核苷酸转移酶活性、离子结合、DNA结合等分子功能.与EscherichiaphageST32、EnterobacteriaphagephiEcoMGGJ1的亲缘关系较近.综上所述,噬菌体vB_EcoM_BP10具有清晰的宿主受体特异性,良好的热稳定性和酸碱稳定性,本研究结果能为有效防控产志贺毒素多重耐药大肠杆菌奠定一定的理论基础.关键词:志贺毒素;噬菌体;多重耐药;全基因测序中图分类号:S852.61文献标识码:ADoi:10.16431/j.cnki.1671G7236.2020.02.005开放科学(资源服务)标识码(OSID):BiologicalCharacteristicsandGenomeAnalysisofShigaToxinGproducingandMultidrugGresistantEscherichiacoliPhages(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530004,China;WEIDeyuan1§,LUZening2§,ZHANGCong1,GEChenling1,WANGXiaoye1∗2.AquaticAnimalHusbandryandVeterinaryStation,ShuangqiaoTown,WumingDistrict,Nanning530104,China)Abstract:ToexplorethebiologicalcharacteristicsandgenomecharacteristicsofEscherichiacoliphages,inthisstudy,aShigatoxinGproducingmultiGdrugresistantEscherichiacolistrainGXGEC010wasisolatedfromthesewageofaswinefarminGuangxi,andalyticphagestrainwasisoGlatedfromthesewage,andthroughthetransmissionelectronmicroscope,determinationofbestmultiplicityofinfectionintheplural,oneGstepgrowthcurvedrawing,thermalsensitivityandpH收稿日期:2019G08G19基金项目:国家自然科学基金青年基金(31502079);广西自然科学基金(2017GXNSFAA198071);南宁市科学研究与技术开发计划重点研发计作者简介:韦德源(1992G),男,广西贵港人,硕士生,研究方向:临床兽医学,EGmail:1021459902@qq.com划项目(20182024G2)陆泽宁(1980G),男,广西南宁人,本科,兽医师,研究方向:动物疾病防控,EGmail:Zening.6021891@163.com韦德源和陆泽宁对本文具有同等贡献,并列为第一作者∗通信作者:王晓晔(1987G),男,山东潍坊人,博士,研究方向:动物病毒学,EGmail:wangxiaoye161@163.com2期韦德源等:产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析353stabilityevaluation,sterilizationexperimentandwholegenomesequencingmethodstoanalyzethebiologicalcharacteristicsandgenomecharacteristicsofthephage.TheresultsshowedthatthephagewhichcouldefficientlylyseEscherichiacoliGXEC010wasisolatedandpurified,andnamedasvB_EcoM_BP10.Theoptimalmultiplicityofinfectionthisbacteriumwas1.TheresultsofoneGstepgrowthcurveshowedthattheincubationperiodofinfectedhostbacteriawas5min,theoutGbreakperiodwas65min,andtheoutbreakquantitywas51.Thetolerabletemperaturerangewas30to60℃,anditcouldbemaintainedstableinthepHof5to8.TheresultsofbacteriophagebactericidalexperimentshowedthatthebacteriophagevB_EcoM_BP10hadagoodbactericidaleffectwhenMOI=1.CompletedgenomesequencingresultsshowedthatthetotalfragmentlengthofphagevB_EcoM_BP10was52288bp,GCcontentwas44.16%,andincluded71ORF.TheGOfunctionalnotesindicatedthatphagevB_EcoM_BP10couldparticipateinsmallmoleculemetaboGlism,cellnitrogencompoundmetabolismandotherbiologicalprocesses,andhadmolecularfuncGtionssuchasnucleotidetransferaseactivity,ionbindingandDNAbinding.ThisbacteriumwascloselyrelatedtoEscherichiaphageST32andEnterobacteriaphagephiEcoMGGJ1.Inconclusion,thephagevB_EcoM_BP10inthisstudyhadclearhostreceptorspecificity,goodthermalstabilityandacidGbasestability,whichcouldlayatheoreticalfoundationfortheeffectivepreventionandcontrolofShigatoxinGproducingmultidrugGresistantEscherichiacoli.Keywords:Shigatoxin;phage;multipledrugresistance;completedgenomesequencing产志贺毒素大肠杆菌(ShigatoxinGproducingE.coli,STEC)作为一种人畜共患的肠道致病菌,由于能引发水样腹泻(waterydiarrhea)、出血性结肠炎(hemorrhagiccolitis,HC)[1]、溶血性尿毒综合征(hemolyticuremicsyndrome,HUS)[2]等疾病而成为公共卫生方面最具挑战性的病原体之一.产志贺毒素大肠杆菌主要由没有交叉抗性的stx1和stx2两种基因型构成[3],尤其在反刍动物O157∶H7血清型中高发[4].近年来,食品源性动物养殖中为防控STEC疾病的发生,滥用抗生素药物,致使STEC菌株的药物敏感性急剧下降[5],多重耐药(multiGdrugresistant,MDR)情况愈发明显,缓解多重耐药和极端耐药(extremelydrugresistant,XDR)带来的挑战变得迫在眉睫.近年来,噬菌体由于其分布范围广、特异性强、增殖迅速且不破坏宿主体内的正常菌群[6]等特点引起人们的关注,并被认为是能缓解抗生素耐药严重局面的首选替代治疗药物[7].噬菌体通过自身尾丝蛋白和细菌表面受体共同决定裂解谱[8],该特点决定噬菌体的高度专一性,但同时也给噬菌体与不同宿主菌之间的相互作用带来局限性.针对目前的现状,分离并鉴定更多噬菌体将为提高个性化治疗及规模化生产应用奠定基础.本研究分离得到1株对噬菌体,通过探究其生物学特性和全基因组分析,为产志贺毒素且多重耐药的大肠杆菌具有裂解作用的自治区南宁市某猪场化粪池污水用于噬菌体的深入研究噬菌体作用机制和生产应用提供借鉴.1材料与方法1.1材料1.1.1宿主菌与噬菌体宿主菌产志贺毒素大肠杆菌GXEC010及用于宿主谱分析的其他菌株均采集自广西壮族自治区南宁市某猪场,保存于广西大学动物科学技术学院临床实验室.采集广西壮族分离.1.1.2主要试剂NaCl和MgSO4均购自天津市科密欧化学试剂有限公司;LB液体培养基、LB固体培养基、PEG8000均购自北京索莱宝科技有限公司;药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司.1.2方法1.2.1细菌分离及鉴定将采集的粪便拭子用平板法划线接种于伊红美蓝培养基上,置于37℃培养箱18~24h.挑单个菌落加到LB液体培养基置于摇床培养6~8h.水煮法提取DNA作为模板,大肠杆菌16SrRNA通用引物27F(5′GAGAGGTTTGATCMTGGCTCAGG3′)和1492R(5′GGGTGTACCTTGTTACGACTTG3′)由广州华大基因公司合成.用PCR扩增细菌16SrRNA.PCR反应体系25μL:2×TaqPCRGreenMix12.5μL,ddH2O8.5μL,上、下游引物各1μL,DNA模板中国畜牧兽医4532μL.PCR反应条件:94℃预变性5min;95℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min,共32个循环;72℃延伸10min.取10μLPCR扩增产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳检测,用凝胶程序分析系统观察结果,将鉴定正确的PCR产物送广州华大基因公司测序.1.2.2噬菌体分离纯化与鉴定采集猪场化粪池中污水样品,利用不同滤膜孔径大小除菌的方法[9],获得含有噬菌体的原液.采用双层平板法检测和筛选烈性噬菌体[10],并测定噬菌体的效价.参考«分子克隆实验指南»[11]中聚乙二醇沉淀法回收裂解物中噬菌体颗粒的方法,纯化并浓缩噬菌体.将纯化后的噬菌体采用2%磷钨酸(PTA,w/V)染色后[12],使用透射电子显微镜观察其形态特征.1.2.3噬菌体宿主谱分析采用点斑法[13]测定噬菌体宿主范围.具体方法如下:取细菌的过夜培养物,均匀涂布在LB培养基平板上;取10μL噬菌体悬液滴加在菌苔表面,并滴加生理盐水作对照,待液滴干燥后倒置于37℃培养12~18h,观察结果.1.2.4宿主菌药物敏感性分析将宿主菌GXGEC010按照美国临床实验室标准委员会(CLSI)推荐的KGB法进行15种抗生素的药物敏感性检测.1.2.5噬菌体生物学特性分析参考CareyGSmith等[14]方法,将宿主菌培养至对数生长期时,运用平板记数法测定宿主菌的个数.按照MOI分别为1、0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001的比例分别加入噬菌体纯培养液和宿主菌,利用双层法测定效价并评估噬菌体最佳MOI.参考葛展霞等[15]方在伊红美蓝平板上为带有墨绿色金属光泽的菌47卷法测定噬菌体的一步生长曲线.通过Jamal[16]和孙立厂等[17]方法测量温度敏感性及不同pH下噬菌体的酸碱稳定性.根据包红朵等[12]方法比较不同MOI下噬菌体的杀菌效果.1.2.6噬菌体全基因组分析运用碱裂法提取噬菌体DNA[11],并用10%琼脂糖凝胶电泳检测基因组的完整性.基因文库构建和全基因测序均由上海派森诺生物科技股份有限公司完成.2结果2.1细菌的分离鉴定落(图1A),在显微镜下可见革兰氏阴性的短杆菌(图1B).将25株细菌基因组DNA进行16SrRNAPCR扩增,扩增出大小为1540bp的目的条带(图2),测序结果在NCBI中进行比对,结果显示均为大肠杆菌.2.2噬菌体的形态学鉴定以产志贺毒素大肠杆菌GXEC010为宿主菌,运用双层平板法进行噬菌体分离.经反复纯化后得到清澈透亮,大小一致,边缘整齐无晕环的噬菌斑(图3A),即纯化噬菌体,命名为vB_EcoM_BP10,其呈现典型的裂解性噬菌体特征.经负染法后在电镜观察,该噬菌体的头部为直径约60nm的多面体,尾部为直径可达20nm左右,长约90nm的圆柱体(图3B).依据国际病毒分类委员会分类规则,判定该噬菌体为肌尾噬菌体科.A,菌落形态;B,革兰氏染色镜检图(100×)A,Colonymorphology;B,Gramstainingmicroscopy(100×)图1分离菌形态学鉴定Fig.1Morphologicalidentificationoftheisdates2期韦德源等:产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析553M,DL2000DNAMarker;N,阴性对照,1,GXEC010,2~25,分别为大肠杆菌GXEC008、GXEC087、GXEC091、GXGEC096、GXEC094、GXEC077、GXEC089、GXEC090、GXEC095、GXEC092、GXEC078、GXEC088、GXEC046、GXGEC087、GXEC093、GXEC059、GXEC056、GXEC067、GXEC104、GXEC032、GXEC072、GXEC040、GXEC103和GXGEC011M,DL2000DNAMarker;N,Negativecontrol;1,GXEC010;2G25,E.coliGXEC008,GXEC087,GXEC091,GXGEC096,GXEC094,GXEC077,GXEC089,GXEC090,GXEC095,GXEC092,GXEC078,GXEC088,GXEC046,GXGEC087,GXEC093,GXEC059,GXEC056,GXEC067,GXEC104,GXEC032,GXEC072,GXEC040,GXEC103andGXGEC011,respectively图2分离菌16SrRNA基因PCR扩增结果电泳图Fig.2ElectrophoresismapofPCRamplificationresultsoftheisolates16SrRNAgeneA,噬菌体vB_EcoM_BP10的噬菌斑;B,噬菌体vB_EcoM_BP10负染后电镜图(150000×)A,PhagevB_EcoM_BP10;B,ElectronmicrographofphagevB_EcoM_BP10afternegativestaining(150000×)图3噬菌体vB_EcoM_BP10的形态学鉴定Fig.3MorphologicalidentificationofphagevB_EcoM_BP102.3噬菌体的宿主谱分析通过噬菌体vB_EcoM_BP10对来自广西周边地区不同猪场粪便式子分离得到的24株多重耐药且产志贺毒素大肠杆菌的裂解能力进行分析.结果表明,该噬菌体对产志贺毒素大肠杆菌的裂解具有一定的特异性,仅对GXEC008和GXEC011两株菌能形成噬菌斑(表1).653表1噬菌体vB_EcoM_BP10的宿主谱Table1HostspectraofphagevB_EcoM_BP10中国畜牧兽医菌株编号来源结果广西桂林广西桂林广西来宾广西来宾广西来宾广西柳州广西来宾广西来宾Source广西南宁Results+-----------StrainNo.GXEC008GXEC087GXEC091GXEC096GXEC094GXEC077GXEC089GXEC090GXEC095GXEC092GXEC078GXEC088+,形成空斑;-,不形成空斑+,Formingplaque;-,Noplaqueformation2.4宿主菌GXEC010药物敏感性分析采用纸片法对产志贺毒素大肠杆菌GXEC010的药物敏感性进行评估.结果表明,该大肠杆菌对βG内酰胺类(氨苄西林、阿莫西林)、多肽类(多黏菌表2宿主菌GXEC010的药物敏感性结果Table2ResultsofdrugsensitivityofhostbacteriumGXEC010广西来宾广西柳州广西桂林药物抑菌圈直径InhibitoryzonediameterDrugs氨苄西林Ampicillin阿莫西林Amoxicillin多黏菌素BPolymyxinB多黏菌素EPolymyxinE多西环素Doxycycline林可霉素Lincomycin磺胺嘧啶Sulfadiazine阿奇霉素Azithromycin头孢吡肟Cefepime头孢噻肟Cefotaxime环丙沙星Ciprofloxacin诺氟沙星Norfloxacin阿米卡星Amikacin庆大霉素Gentamicin美罗培南MeropenemR,耐药;I,中介;S,敏感R,Resistant;I,Intermediate;S,Sensitive101177101211122626242619132447卷结果Results-----------+菌株编号StrainNo.GXEC046GXEC087GXEC093GXEC059GXEC056GXEC067GXEC104GXEC032GXEC072GXEC040GXEC103GXEC011来源Source广西南宁广西桂林广西来宾广西河池广西河池广西南宁广西桂林广西南宁广西柳州广西南宁广西桂林广西南宁素B、多黏菌素E)、四环素类(多西环素)、林可霉类(林可霉素)、磺胺类(磺胺嘧啶)、大环内酯类(阿奇霉素)等药物敏感性较弱(表2),对多种抗菌药表现出一定的抗性,耐药情况严重,属于多重耐药大肠杆菌.判定标准StandardI14~1614~178~118~1113~1516~1813~1619~2423~2516~2013~1613~1613~1420~22S≥17≥18≥12≥12≥16≥19≥17≥13≥25≥26≥21≥17≥17≥15≥23mm结果ResultsRRRRRRRRSSSSSISR≤13≤13≤8≤8≤12≤15≤12≤12≤18≤22≤15≤12≤12≤12≤192期2.5噬菌体最佳MOI值,可判断不同浓度下噬菌体的最佳MOI.由表3可知,当MOI<1时,随着MOI值的增加,噬菌体的效价随之增大;当MOI>1时,噬菌体的效价在160×108~2.27×108PFU/mL之间浮动;当MOI=1时,噬菌体的效价最高,为2.94×108PFU/mL,故MOI=1为最佳MOI.表3噬菌体最佳MOITable3OptimalphageMOIMOI/(PFU/CFU)0.0010.010.111010010002.6噬菌体一步生长曲线分析3.40×1075.20×1078.00×1072.94×1081.60×1081.70×1082.27×108效价/(PFU/mL)将噬菌体vB_EcoM_BP10在与宿主菌GXG韦德源等:产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析通过计算感染初期噬菌体数与宿主菌数的比753EC010进行反应.结果表明,起初的5min内噬菌体效价无明显变化,随着时间的延长,噬菌体效价不断升高,一段时间后到达平台期,即噬菌体潜伏期为5min,爆发期持续65min,爆发期时噬菌体效价最高可达2.9×107PFU/mL,与初期细菌数量的5.6×105CFU/mL相比,能明显抑制细菌增殖(图4A).由裂解量=噬菌体末期数量/初期细菌数量可知,噬菌体vB_EcoM_BP10具有较强的裂解能力,裂解量为51.2.7噬菌体热稳定性及酸碱稳定性通过对在不同温度条件下噬菌体vB_EcoM_BP10耐热程度的研究可知,当温度在30~60℃之间时,噬菌体的效价趋于稳定.当温度超过70℃以后,随温度的升高,噬菌体活性逐步下降.当温度达到80℃时,噬菌体效价为0,已完全失活(图4B).由此可知,高温可严重影响噬菌体活性.对噬菌体的酸碱稳定性进行评估可知,当pH≤5或pH≥8时,噬菌体的活力降低;当pH≥11时,噬菌体则处于失活状态(图4C),即该噬菌体在强酸、强碱的条件下无法存活.A,一步生长曲线;B,热敏感性;C,酸碱稳定性;D,杀菌效果A,OneGstepgrowthcurve;B,Thermalsensitivity;C,AcidGbasestability;D,Sterilizationeffect图4噬菌体vB_EcoM_BP10的生物学特性分析Fig.4BiologicalcharacteristicsofphagevB_EcoM_BP10中国畜牧兽医8532.8噬菌体的杀菌效力通过将噬菌体与宿主菌共培养测定D600nm值的方法来评估噬菌体的杀菌效力.根据试验结果可知,当MOI=0(即阴性对照),在5h内D600nm值随着时间的延长不断升高,宿主菌能迅速复制并保持在较高的浓度范围内.当在培养液中加入MOI为0.1和1的噬菌体时,D600nm值在30min内有短暂上升的趋势.一段时间后,随着噬菌体的快速繁殖,D600nm值迅速下降,表明噬菌体能显著抑制细菌繁殖,且杀菌效果明显(图4D).相较于MOI=0.1时,MOI=1的杀菌效果更为显著.2.9噬菌体全基因组测序经测序数据结果分析可知,噬菌体vB_EcoM_BP10基因组总片段长度为52288bp,GC含量为44.16%.该基因组共编码71个以ATG为起始密码子的ORF.其中ORF14由72个氨基酸组成,为最小的编码区.由1242个氨基酸构成长为3726bp的ORF23为最大的阅读框.通过全基因组RAST在47卷线初步注释和NCBI的BLASTP分析,仅有4366%的ORF为推定或已证实功能的蛋白,超过半数以上的蛋白均为假想蛋白(图5).由表4可知,多种酶共同调控噬菌体DNA的复制,如ORF3编码核酸外切酶(exonuclease)、ORF5DNA连接酶(DNAligase)、ORF70DNA聚合酶(DNApolymerase).因此,噬菌体vB_EcoM_BP10具有整套管控遗传物质呈递的酶系统.为维持噬菌体完整的形态和结构特征,ORF27调控基板组装蛋白(baseplateassemblyprotein),ORF9组成大亚基端(largesubunitterminase),ORF11编码门户蛋白(portalprotein),ORF23和ORF33共同构成尾丝纤维蛋白(tailfiberprotein).噬菌体发挥裂解细菌的作用,主要依靠穿孔素和内溶素(endolyGsin),ORF功能预测结果也印证了这一点,其中ORF34为穿孔素(holin),OEF35和ORF56为分别位于噬菌体中部和尾部的两个内溶素.图5噬菌体vB_EcoM_BP10全基因图Fig.5CompletegenemapofphagevB_EcoM_BP10表4噬菌体vB_EcoM_BP10部分ORF功能预测Table4ORFfunctionpredictionofthephagevB_EcoM_BP10genome开放阅读框氨基酸数量开放位置阅读框PositionofORFORF/bpORF3937-1827ORF41839-2363ORF52449-3108ORF63275-3727登录号Numberofaminoacids/个296174219150相关蛋白描述HitdescriptionAccessionNo.E值EvalueYP001595435.1putative5′G3′exonuclease[a]ABR68752.194.592.10EG167YP001595436.1phageprotein[a]ABR68753.198.289.80EG96YP001595437.1putativeDNAligase[a]ABR68754.194.064.10EG123YP001595438.1phageprotein[a]ABR68755.195.334.50EG81相似度Identity/%韦德源等:产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析953续表2期开放阅读框开放阅读框氨基酸数量位置PositionofORFORF73730-4251ORFNumberofaminoacids/个173登录号AccessionNo.相关蛋白描述HitdescriptionABR68778.1ABR68760.1ORF94854-6899681otidylhydrolase[a]ABR68756.1YP001595439.1putativedeoxyuridine5′GtriphosphatenucleGYP001595443.1putativelargesubunitterminase[a]YP001595445.1putativeportalprotein[a]ABR68762.1YP007004717.1gp67[b]AEJ81443.1YP001595448.1majorcapsidprotein[a]ABR68765.1YP001595450.1phageprotein[a]ABR68767.1YP001595453.1phageprotein[a]ABR68770.1YP001595454.1phageprotein[a]ABR68771.1YP001595459.1phageprotein[a]ABR68776.1YP001595461.1putativebaseplateassemblyprotein[a]YP001595462.1phageprotein[a]ABR68779.1YP001595463.1phageprotein[a]ABR68780.1YP001595464.1phageprotein[a]ABR68781.1YP001595466.1phageprotein[a]ABR68783.1YP001595467.1putativetailfiberprotein[a]ABR68784.1YP001595468.1putativeholin[a]ABR68785.1YP001595469.1putativeendolysin[a]ABR68786.1YP001595470.1ribonucleotidereductasebetasubunit[a]YP001595396.1RNApolymerase[a]ABR68713.1YP001595410.1putativesingleGstrandedDNAGbindingproGYP001595416.1putativeendolysin[a]ABR68733.1YP001595417.1putativeantirestrictionprotein[a]YP001595426.1phageprotein[a]ABR68743.1YP001595428.1putativethymidylatesynthase[a]YP001595430.1helicase/primase[a]ABR68747.1YP001595432.1DNApolymerase[a]ABR68749.1438ORF117114-8430ORF1410021-1023972ORF1510295-11302335ORF1711790-12179129ORF2013048-14496482ORF2114507-14962151ORF2315592-193171241YP001595457.1putativetailfiber[a]ABR68774.1ORF2520500-21387295ORF2721862-22533223ORF2822533-22904123ORF2922931-24037368ORF3024039-24680213ORF3225829-27202457ORF3327212-28249345ORF3428257-28598113ORF3528616-29170184ORF3629170-30270366ORF3730988-33102704ORF5237633-38010125ORF5640018-40323101ORF5840675-41157160ORF6645293-4552978ORF6847038-47688216ORF6947689-49455588ORF7049542-51455637[a]:EnterobacteriaphagephiEcoMGGJ1;[b]:ErwiniaphagevB_EamMGY22.10噬菌体基因组GO功能注释根据GO数据库分析,噬菌体vB_EcoM_BP10中共有29个基因在生物进程(biologicalprocess)和分子功能(molecularfunction)中得到注释(图6),tein[a]ABR68727.1ABR68734.1ABR68745.1ABR68787.1相似度Identity/E值Evalue%95.935.50EG9199.850098.865.60EG24972.224.90EG1795.825.70EG18595.352.40EG6791.701.80EG24897.351.10EG7975.4096.271.10EG15297.311.40EG12398.375.90EG6392.123.60EG19689.674.40EG10661.241.30EG15070.312.40EG13097.351.00EG5396.202.50EG9791.404.30EG19491.6786.613.10EG5192.083.90EG5281.882.80EG7398.722.90EG3197.691.30EG12195.0699.06000其中各条目主要参与到小分子代谢(smallmoleculemetabolic)、细胞氮化合物代谢(cellularnitrogencompoundmetabolic)、生物合成(biosyntheticprocess)等生物学过程中;具备核苷酸转移酶活性063(nucleotidyltransferaseactivity)、离子结合(ionbinding)、DNA结合(DNAbinding)等分子功能.中国畜牧兽医47卷噬菌体vB_EcoM_BP10在GO数据库中并没有得到相关细胞组分的注释.图6噬菌体vB_EcoM_BP10的GO功能注释图Fig.6GOfunctionalannotationofphagevB_EcoM_BP102.11噬菌体遗传进化分析通过NCBI的BLAST与Easyfig软件比对分析可知,噬菌体vB_EcoM_BP10与EscherichiaphageST32,completegenome(MF04458.2)的同源性最高,相同基因覆盖率可达93.95%;其次为EnGterobacteriaphagephiEcoMGGJ1,completegenome(EF460875.1),且这些噬菌体位于同一分支上,具有较近的亲缘关系(图7).图7噬菌体vB_EcoM_BP10全基因组比对Fig.7CompletegenomealignmentofphagevB_EcoM_BP103讨论近年来,STEC菌株因高致病力受到学者们的普遍关注,在世界各地的分离率居高不下[18].在治疗中,抗生素作为治疗STEC的首选,但随着抗生素的广泛使用,导致细菌对抗生素产生巨大的抗性,效果不理想,增加生产的成本.噬菌体作为一种优良的抗菌剂,具有高度特异性,可快速杀灭宿主菌,高度特异性且不会产生副作用的特点逐渐进入了研且不易产生耐药性,也易获取.噬菌体对宿主菌的究领域[19],通过对噬菌体生物学特性的研究和全基因组分析,可为噬菌体的进一步开发利用提供依据.在本研究中宿主菌GXEC010同时具备毒力基因与多重耐药抗性,相较于陈义宝等[20]分离的噬菌体vB_EcoM_PHB05(潜伏期10min,基因组片段韦德源等:产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析2期147659bp)而言,噬菌体vB_EcoM_BP10的宿主菌背景更复杂,潜伏期为5min,基因组片段为52288bp,能更好地适应外界环境的改变.与王冉等[21]分离鉴定的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)噬菌体PK88G4相比(爆发期40min,爆发量40),本研究中的噬菌体vB_EcoM_BP10爆发期65min,裂解量51,杀菌能力更强.噬菌体vB_EcoM_BP10的生物特性测定表明,该噬菌体对温度和酸碱度都有较广的适应范围.温度在30~60℃之间还可保持活性,对宿主菌具有较强的感染性.这对作为生物制剂研制和加工来说极有利,可避免在开发中失效.在pH5~8之间都可保持较高的活性,作为消毒剂的开发使用,可在不同的酸碱环境中起作用,活性不会降低,该噬菌体的体外杀菌试验表明,经过3h后,D600nm值维持在0.1以下,而且没有升高,说明噬菌体vB_EcoM_BP10杀菌效果明显且稳定.因此,噬菌体vB_EcoM_BP10具有成为生物制剂的潜力和更加广阔的应用前景.噬菌体主要通过“穿孔素-内溶素”裂解系统发挥对细菌增殖的抑制作用[22G25].本研究中,噬菌体vB_EcoM_BP10的ORF34编码穿孔素,ORF35和ORF56为分别位于噬菌体全基因组中段和尾部的两个内溶素,表明其同时表达两种蛋白介导宿主细菌的裂解.与噬菌体vB_EfaP_IME195的ORF16被鉴定为噬菌体裂解素,ORF19编码穿透细菌细胞膜的孔蛋白不同.本研究中噬菌体vB_EcoM_BP10共含有两个内溶素且位置距离较远,故推测内溶素的数量和位置可能与噬菌体的裂解能力有关.4结论本研究中噬菌体vB_EcoM_BP10噬菌斑透亮,无晕圈,属肌尾科噬菌体,具有清晰的宿主受体特异性;在30~60℃可保持较高活性,可在pH5~8保持稳定;最佳MOI为1,感染宿主菌的潜伏期为5min,爆发期持续65min,裂解量51;该噬菌体能在短时间内将宿主菌杀灭,MOI=1时,经过3h的作用D600nm值在0.1以下.本研究结果将为噬菌体作为生物制品的开发应用奠定理论基础.参考文献(References):[1]COLELLOR,ETCHEVERRÍAAI,CONZAJAD,etal.AntibioticresistanceandintegronsinShigatoxGinGproducingEscherichiacoli(STEC)[J].BrazilianJournalofMicrobiology,2015,46(1):1G5.163[2]GYLESC.ShigatoxinGproducingEscherichiacoli:Anoverview[J].JournalofAnimalScience,2007,85(suppl_13):E45GE62.[3]CABALA,PORREROMC,CRUZMLDL,eta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目的探讨缝隙连接蛋白在和43)和内皮素(Cx43例食管鳞癌组织及相应癌旁正常组织中的表达)在食管鳞癌组织中的表达及意义ET-1-1(ET-1118等级相关性分析，生存分析用Kaplan-Meier在癌旁正常组织中表达高于食管鳞癌组织(法并绘制生存曲线，生存检验用P<0.05ET-1)，Cx43Spearman免疫组化技术检测采用结果Cx43织;在食管鳞癌组织中Cx43癌组织中的表达呈负相关(和阳性表达与浸润深度淋巴结转移、高表达和)。结论食管鳞癌组织中Cx43<0.05达，检测二者表达有助于食管鳞癌的病情判断及预后评估。，P<0.05均高表达的食管鳞癌患者(r=-0.211低表达和Cx43ET-1ET-1ET-1)，P
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荞麦、燕麦、豌豆复配对糖尿病大鼠血糖的影响
目的:研究荞麦糖尿病大鼠血糖的影响括空白对照组。模型对照组、燕麦、方法:64二甲双胍组、豌豆(质量比为、6∶1∶1)复配式杂粮(只雄性大鼠按照空腹血糖(SD荞麦组、燕麦组、低剂量组(、BOP-LfastingbloodglucoseFBG，中剂量组(、)空白对照组大鼠喂养基础饲料，模型对照组和二甲双胍组大鼠喂养高脂饲料，荞麦组)H。buckwheat-oat-peacompositeflourBOP组大鼠分别喂养含BOP、30%(质量分数)M、BOP-H分数)腹腔注射间定期观察各组大鼠体质量30mg/kg10%BOP(质量分数)荞麦粉(质量分数)燕麦粉的高脂饲料，各组高脂饲料的脂肪供能比均为、10%、3.3%45%。30d链脲佐菌素(每周一次，连续两周)建立糖尿病模型食物利用率、28d。血糖曲线下面积(单位体质量进食量及饮水量、实验结束时，检测空腹股动脉血清血糖及胰岛素，计算稳态模型胰岛素抵抗指数(模型建立成功后，继续喂养、FBG、尿量、24h。)，glucose，)和体质量分为)8高剂量组(、燕麦组、BOP-M)对组，包BOP-BOP、10%、BOP-L、BOP-(质量后，高脂饲料喂养大鼠实验期(质量分数))home-结果:经过高脂饲料联合链脲佐菌素诱导，与空白对照组。)，体质尿量均明显升高(、FBG、GAUC、HOMA-IRP<0.05BOP);BOP-L及组大鼠体质量食物利用率均出现显著升高(、组大鼠单位体质量进食量造模成功后，三个P<尿量组与荞麦组或具有降低糖尿病大鼠血糖和胰岛素抵抗，减轻糖BOP-M、24hBOPP<0.05。)P<0.05也显著降低()结论:P>0.05。BOPareaundercurveGAUC。ostasismodelassessmentofinsulinresistance相比，模型对照组大鼠单位体质量进食量及饮水量量)与模型对照组相比，三个HOMA-IR、24h食物利用率降低(、)，单位体质量饮水量及P<0.05。显著降低(，FBG)，BOP-MP<0.05HOMA-IR显著降低(0.05组大鼠及燕麦组大鼠血糖等指标差异无统计学意义(尿病症状的作用，具有进一步开发利用的价值。[关键词]膳食，糖尿病;食品，配方;血糖;大鼠，[中图分类号]R587.1doi10.19723/j.issn.1671-167X.2021.03.002;:GAUCR151.4[文献标志码]A[文章编号]1671-167X()202103-0447-06Sprague-DawleyEffectsofthecompositeofbuckwheat-oat-peaonbloodglucoseindiabeticratsYINXue-qian(，ZHANGXiao-xuan，，LIUSi-qi，LIUXin-ran，WENJing，DepartmentofNutritionandFoodHygienePekingUniversitySchoolofPublicHealth，ZHOURuo-yu，WANGJun-bo△，Beijing100191)China)(([BOP)]compositeflour:onbloodglucoseindiabeticrats.Methods)FBG，Tostudytheeffectsofbuckwheat-oat-peaqualityratio:ABSTRACTObjective(oats∶peas=6∶1∶1maleSprague-Dawleyratsweredividedinto8groupsbyfastingbloodglucose，normalcontrolgroup()，dosegroupBOP-Lnormalcontrolgroupwerefedwithnormaldietwerefedwithahigh-fatdietBOP-M，BOPfromfat(BOP-HgroupswerefedwithHFDcontaining10%buckwheatflourmodelcontrolgroupmedium-dosegroupandtheratsinthebuckwheatgroupandBOP-L3.3%respectively.TheHFDinallthegroupshadthesamepercentageofenergy，theratsfedwithHFDreceivedintraperitonealinjectionofstreptozotocintoestablishdiabetesmellitus.Afterthemodelwassuccessfulfoodintake/body，BOPlow-.Theratsinthetheratsinthemodelcontrolgroupandmetformingroup，onceaweekfortwoweekstheratswerefedforanother28days.DuringthestudyInthisstudyandbodyweightmetformingroupBOP-Mthebodyweight，andhigh-dosegroupbuckwheat∶，buckwheatgroupoatsgroup，10%BOP).After30days10%oatflour45%，，30%BOPoatsgroupBOP-H，()，)，)，HFD64:，，，，，，，，，，，(()()(andwaterintake/bodyweightWI/BWfoodutilizationrate24hurinevolumeglucoseareaundercurveGAUCthefastingserumglucoseandinsulinweremeasured())，comparedwiththenormalcontrolgroup，24hurinevolume(HOMA-IR，，GAUCFBG).Comparedwiththemodelcontrolgroupoforalglucosetolerancetestweremeasuredregularly.Attheandhomeostasismodelassess-WiththeinducingofHFDandstrepto-，)，theratsinthemodelcontrolgrouphadhigherFI/BWwascalculated.Results，，，，(:P<0.05，andlowerbodyweightfoodutili-theratsinthethreeBOPgroupsallhadHOMA-IR)(FI/BW30mg/kgestablishedweight，FBGendofthestudymentofinsulinresistancezotocinWI/BWzationrateP<0.05，(基金项目:国家重点研发计划项目(2017YFD0401202)SupportedbytheNationalKeyResearchandDevelopmentProgramofChina(2017YFD0401202)△Correspondingauthor`se-mail网络出版时间:2021-4-13568:，bmuwjbxy@bjmu.edu.cn::55网络出版地址:http//kns.cnki.net/kcms/detail/11.4691.R.20210412.1830.014.html·844·北京大学学报(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Vol.53No.3Jun.2021，()，，();P<0.05foodutilizationratethehigherbodyweightandtheratsintheBOP-LandBOP-MgroupshadlowerFI/BW，thereratsintheBOP-MgroupalsohadlowerGAUCwasnosignificantdifferenceinbloodglucoseandtheotherindicatorsbetweentheratsinthethreeBOPTheBOPhadtheeffectsofgroupsandthebuckwheatgrouportheoatsgroupreducingbloodglucoseandhadthevalueforfurtherdevelopmentandutilization.，KEYWORDSDietFood.Aftertheestablishmentofdiabetes)insulinresistanceanddiabeticsymptomsondiabeticratsandlowerWI/BW，24hurinevolume)P<0.05(HOMA-IR，Sprague-DawleyP<0.05)，Bloodglucose.ConclusionformulatedP<0.05P>0.05diabeticFBGRats，，，，((:;;;。201920~79尿病联盟估计，年全球亿患有糖尿病，患病率达糖尿病是世界重要的公共卫生问题，据国际糖岁成人中，约，而中国是糖尿9.3%4.63目前糖尿病的治疗方病患病人数最多的国家[健康教育和血糖监测，式主要包括饮食、其中饮食治疗是糖尿病治疗的基石谷物是碳水化合物的主要来源，以谷物进行饮食干预，是一种具有较高成本效益，几乎无副作用的治疗和预防糖尿病的方法。运动、药物、。]16]2-47-8。15g]，也有动物实验提示豌豆也具有类似作用[研究发现，许多杂粮具有改善高血糖的效果，如荞麦和燕麦在糖尿病动物及人群中具有降血糖作用[]5。，且种类较为单然而，中国人均杂粮摄入量不足]，适口性及烹饪困难可能是限制杂粮摄入的重一[多种杂粮复配可减少杂粮感官性状的要原因[缺陷，提高适口性及可加工性，有利于提高人群的杂粮摄入燕麦及豌豆经体外、模拟口腔及胃肠消化后，得到三种杂粮的体外消化产物，之后利用正交实验设计研究三种杂粮体外消化产物的不同复配方案对胰岛素抵抗细胞HepG2葡萄糖利用的影响，得到荞麦豌豆质量比为本研究拟在动物水平对该复配方案进行验证本实验室前期将荞麦的复配方案6∶1∶1燕麦。。∶∶。1材料与方法1.1杂粮复配方案燕麦为坝莜12h明暗每交替验动物管理条例理委员会审核通过(批准号:》动物喂养及实验按照北京市实。执行，并经北京大学生物医学伦《)LA2019362。1.3主要试剂及仪器链脲佐菌素购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司，柠檬酸柠檬酸钠缓冲液购自宝如亿(北-京)生物技术有限公司，盐酸二甲双胍片购自中美上海施贵宝制药有限公司，血糖试剂盒购自北京百奥泰康生物技术有限公司，胰岛素放射免疫分析试剂盒购自北京北方生物技术研究所，其余试剂均为分析纯。血糖试纸及血糖仪购自艾康生物技术有限公司，全自动生化仪购自美国贝克曼库尔特有限公AU480司，XH-6080γ放射免疫计数器购自西安核仪器厂。。1.4实验设计将杂粮添加入饲料中进行干预，通过查阅文献，换算后得到荞麦及燕麦降血糖的有效剂量约为大鼠]，因而确定饲料添加量的高剂量组的杂粮添加剂量分别为中、(均为质量分数)(质量分数)[干预低10%BOP，9-13、43.3%、10%、30%))8864。BOP-HAIN-93M组，每组BOP-L组高剂量(、只大鼠适应性喂养后，按空腹血糖和体7d只，即:空白对照组，模型质量随机分为对照组，二甲双胍组，荞麦组，燕麦组和低剂量)三个(配方饲料，其他，蛋白中剂量(、BOP-M空白对照组饲喂BOP组饲喂高脂饲料(供能比为:碳水化合物质组、BOP-L荞麦粉、的燕麦粉，杂粮在添加时调整了饲料中营养素的比例，使BOP各组高脂饲料中三大供能营养素的含量和比例均保饲料由北京博泰宏达生物技术有限公司提持一致供、组饲料中分别含)，其中，荞麦组、BOP-H的，脂肪组10%和BOP、10%燕麦组、BOP-M、3.3%30%35%20%45%BOP的。10%。1号(河北)，荞麦为大三棱(内蒙古)，豌豆为中豌系列(河北)，均购自山西东方亮生命科技有限公司磨粉后制成相、应的杂粮粉，将荞麦粉豌豆粉以质量比为、将三种杂粮干燥燕麦粉、。混合后制成复配式杂粮粉(buckwheat-oat-6∶1∶1peacompositeflour1.2实验动物健康，BOP)。SDSPF级雄性大鼠，体质量()，由北京大学医学部实验动物科学部提供[生产许g可证号:]，饲养于屏障环境内]，大鼠自由[使用许可证号:摄食，室温(，饮水、2016-0010(京))2016-0041，相对湿度50%~60%180±2025±1SYXK(京)SCXK℃分组后按对应饲料饲喂组外，其余各组大鼠分两次腹腔注射佐菌素(溶解于pH=4.5导糖尿病，两次注射间隔模型对照组血糖曲线下面积(7d30d，然后除空白对照链脲的柠檬酸钠缓冲液中)诱天，以末次注射后第30mg/kg5glucoseareaunder尹雪倩，等荞麦燕麦、豌豆复配对糖尿病大鼠血糖的影响、·944·。)显著高于空白对照组视为造模成GAUC造模成功后，二甲双胍组每天以盐酸二甲双，curve功[]14胍灌胃(按照药品说明书确定剂量，灌胃周期为周，第天4周剂量为每150mg/kg200mg/)，其余各组灌胃等剂量蒸馏水，然后继续喂养周剂量为每天周剂量为每天100mg/kg周和第，第，第1234kg28d。1.5检测指标及方法一般指标每日观察大鼠毛色1.5.1日常活动等一般状态进食量和饮水量，并计算单位体质量进食量质量饮水量及食物利用率取精神状态、、每周称量体质量，分笼记录单位体、周时，每组随机选只大鼠，置于独立代谢笼内测量尿量第。。1024h。6::(800~131.5.2糖:大鼠禁食血糖仪测定食定空腹血糖值(空腹血糖及葡萄糖耐量每周测定空腹血)，尾静脉采血，使用5h每两周进行葡萄糖耐量实验:大鼠禁)，尾静脉采血，使用血糖仪测葡萄糖后于血00)，经口给予2.0g/kg00~130h5h00。8((::测定血糖值，计算血糖血糖GAUC，GAUC=血糖0h)/4。胰岛素及胰岛素抵抗指数喂养结束后，隔×2+1h×3+2h×20.5、1、2h糖+0.5h，股动脉采血，1.5.3夜禁食获得血清，检测空腹血清血糖模型胰岛素抵抗指数(12h离心3000r/min10min胰岛素，并计算稳态、homeostasismodelassessment空)，HOMA-IR=20×，HOMA-IR)胰岛素()mIU/L/22.5。ofinsulinresistance腹血清血糖(1.6mmol/L×统计学分析正态分布数据以均数)描述，非正态分布数据采用四分位法描述，采用检验比较空白对照组与模型对照组的差异，单因素方差分析标准差(珋x±s±t比较模型对照组与各干预组的差异，方差分析显示有统计学意义的，对模型对照组与各干预组三个组与荞麦或燕麦组的差异进行多重比较，多重)法变量变换或秩和检falsediscoveryrate检验FDR，、BOP比较使用错误发现率(校正，必要时使用验表示差异有统计学意义R4.0.2使用。Welch软件进行统计分析，以、P<0.05。2结果2.1BOP如图对糖尿病大鼠体质量的影响所示，第1周注射链脲佐菌素后，造模大5周，模型对照组大鼠的鼠出现体质量下降，第7~10体质量显著低于空白对照组(实验过程中，与模型对照组相比，二甲双胍组大鼠的体质量没)，但其他干预组大鼠的体质有显著变化(量均显著增加(注射链脲佐菌素前，P>0.05P<0.05。))及P<0.05组大鼠的体质量高于燕麦组(。BOP-LBOP-H)，但注射链脲佐菌素后，三个P<组的体质量0.05与荞麦组或燕麦组相比差异均没有统计学意义(BOP)。对糖尿病大鼠单位体质量进食量及饮水P>0.052.2BOP量表尿量的影响、食物利用率、为排除体质量对大鼠进食及饮水的影响，以单位体质量进食量和单位体质量饮水量评估各组大鼠结果显示，注射链脲佐菌素进食及饮水状况周)，除空白对照组大鼠的单位体质量进食前(量更高外()，其他组与模型对照组大鼠的单位体质量进食量和饮水量差异无统计学意义()，这可能与空白对照组饲料能量密度较低有关P<0.01P>0.051~4。1。Table1EffectsoftheBOPonthefoodintake/bodyweightfoodutilizationratewaterintake/bodyweightand24hurinevolumeofdiabeticrats表1BOP对糖尿病大鼠单位体质量进食量单位体质量饮水量及、尿量的影响24h食物利用率、，，Waterintake/bodyweight/[(，P50P25P75[)，mL/n=8(])]kg·dGroupNCMC[Foodintake/bodyweight/n=8g/kg·d)](珋x±s，()1-4weeks5-10weeksFoodutilizationrateof1-10weeks/%(，)珋x±sn=855.8±3.1*42.5±2.5*17.3±2.6*48.9±4.661.4±1.76.5±4.393.1125.0MET50.1±4.550.7±7.8*10.8±3.1*BUOA52.1±3.151.6±2.7*11.6±2.9*50.7±3.752.0±4.2*12.4±3.9*BOP-L52.0±3.250.9±7.7*11.6±4.0*BOP-M50.0±3.751.0±3.9*12.6±3.2*BOP-H55.5±6.056.1±6.911.1±1.3*102.1123.7120.696.3108.8119.61-4weeks(，91.5(((((((104.096.5120.2107.184.6105.7104.0154.4，132.5)108.9，130.2，，，124.7)96.7，116.2)))))，133.2，;，NCBOP-M)74.25-10weeks(，72.1(125.0，297.8329.2)*))*)*)*)*)*)*145.5，290.5240.6，301.3205.1，262.3215.1，287.5217.3，270.2248.9，265.5，;300.2(253.4(((((283.9260.1274.5243.5257.324hurinevolume/mL珋x±sn=6，)(13.0±2.7*71.6±8.536.6±18.7*39.1±13.0*42.5±22.2*35.3±14.3*48.5±9.2*58.9±20.8*P<0.05;metformingroupcomparedwiththeMCgroup，，;buckwheatgroupOABU;BOPoatsgroup，buckwheat-oat-peacompositeflour;，;BOPlow-dosegroupBOP-L，normalcontrolgroupBOPmedium-dosegroupMC;modelcontrolgroupMETBOPhigh-dosegroup.，BOP-H;，·054·北京大学学报(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Vol.53No.3Jun.2021);第GAUC显著高于空白对照组(鼠的周时，二甲双胍组大鼠的组(麦组(或燕麦组之间的差异无统计学意义();第组大鼠的三个GAUC组大鼠的P<0.05P<0.05、BOP-MGAUCBOPP<0.0018显著低于模型对照燕、显著低于模型对照组与荞麦组荞麦组、周时，二甲双胍组GAUC。10)P>0.05)。，*P<0.05comparedwiththeMCgrouptheOAgroup.AbbreviationsasinTable1.;#P<0.05，comparedwith图1BOP对糖尿病大鼠体质量的影响(，n=8)珋x±sFigure1EffectoftheBOPonthebodyweight(，)珋x±sofdiabeticrats注射链脲佐菌素后(n=8周)，模型对照组大鼠的单位体质量进食量及饮水量增加，显著高于空白对照组(此外，模型对照组大鼠的食物利用率及)尿量也高于空白对照组(P<0.015~10。24hP<。0.001BOP)与模型对照组大鼠相比，二甲双胍组燕麦组及三个显著降低，食物利用率显著提高(荞麦组、、组大鼠的单位体质量饮水量均)，除组外的其他干预组大鼠的单位体质量进食未发现三食物、尿量与荞麦组或燕麦组的差异有统计组大鼠的单位体质量进食量和饮水量尿量也显著降低(P<0.05P<0.0524h。)BOP-H量及个BOP利用率学意义(、24h)P>0.05。P=0.08、23.4%P<0.05P<0.05)，但24.4%(BOP-H的差异没有统计学意义与荞麦组或燕麦组的差异无统计学意义(的影响16.1%组与模型对照组大鼠空腹血糖组大鼠的空腹血糖P>0.05)。三个BOP。2.4BOP如图对糖尿病大鼠所示，第63GAUC周造模结束后，模型对照组大2.3BOP对糖尿病大鼠空腹血糖的影响第2。各组大鼠空腹血糖的变化见图周注射链脲佐菌素后，模型对照组的空腹血糖显著高于空白)，且一直维持高血糖至实验结束对照组(。周时，二甲双胍组和燕麦组与模型对照组相比，第大鼠的空腹血糖降低(周干预结束时，二甲双胍组燕麦组荞麦组P<0.001P<0.05);第1059、、、BOP-L、BOP-M、组大鼠的空腹血糖分别降低了BOP-H(P<0.05)、27.1%)(()P<0.05((、29.8%30.2%)、P<0.05)和*P<0.05，comparedwiththeMCgroup.AbbreviationsasinTable1.图2BOP对糖尿病大鼠空腹血糖的影响(，n=8)珋x±sFigure2EffectoftheBOPonthefastingbloodglucoseofdiabeticrats珋x±sn=8(，)*P<0.05curve;，comparedwiththeMCgroup.GAUC，glucoseareaunderOtherabbreviationsasinTable1.图3BOP对于糖尿病大鼠GAUC的影响(，n=8)珋x±sFigure3EffectoftheBOPontheGAUCof(，)diabeticratsn=8对糖尿病大鼠胰岛素及珋x±sHOMA-IR的影2.5BOP响模型对照组与空白对照组之间各干预组与模、型对照组之间的血清胰岛素水平差异无统计学意义(，表)P>0.052。尹雪倩，等荞麦燕麦、豌豆复配对糖尿病大鼠血糖的影响、·154·各组之间HOMA-IR的差异有统计学意义:模显著高于空白对照组型对照组大鼠的(P<0.001BOP-M、BOP-H对照组(HOMA-IR荞麦组、)，二甲双胍组组大鼠的燕麦组、、BOP-L、显著低于模型组大鼠的P<0.05与荞麦组或燕麦组的差异有统计学意义)，如图HOMA-IR)，未发现三个所示BOP4。HOMA-IR(P>0.05表2BOP对糖尿病大鼠血清胰岛素的影响(，n=8)珋x±sTable2EffectoftheBOPontheinsulinof(，)珋x±sn=8diabeticratsGroupNCMCMETBUOABOP-LBOP-MBOP-HAbbreviationsasinTable1.Insulin/()mIU/L48.2±13.257.5±36.433.1±23.123.5±22.630.8±23.224.9±24.429.6±16.528.0±22.4，，*P<0.05modelassessmentofinsulinresistance;homeostasisOtherabbreviationsasinTable1.comparedwiththeMCgroup.HOMA-IR图4BOP对糖尿病大鼠HOMA-IR的影响(，n=8)珋x±sFigure4EffectoftheBOPontheHOMA-IR(，)珋x±sn=8ofdiabeticrats3讨论15。Perez-Ramirez小麦饼干相比，燕麦-目前已有许多研究表明，单一杂粮对于改善糖代谢具有积极影响，但杂粮复配后对血糖干预的研]的研究发现，与普通燕究较少等[麦豆粉饼干可以提高糖尿病-大鼠的胰岛素水平，但两种饼干对血糖均无明显影响燕麦膨化食品可以降-低高糖高脂喂养大鼠的血糖水平，且具有良好的风本研究在前期的细胞实验基础上进行，采用饮味燕麦及豌豆复配后对糖尿食干预的方法研究荞麦、]发现，薏米方海滨等[。。13病大鼠的影响，发现低尿病大鼠的血糖和降低糖尿病大鼠的中剂量的、BOP，中剂量HOMA-IR可以降低糖还可以BOP，具有辅助降血糖作用GAUC。16BOP虽然与荞麦或燕麦相比，]，它们与荞麦复配后有更高的营养价值对糖尿病大鼠并没有起到更好的血糖干预效果，但杂粮复配后有着单一杂粮没有的优势，如燕麦中含有较高的钙锌及、多不饱和脂肪酸，豌豆中含有丰富的蛋白质和赖氨酸[同时，杂粮复配后还有利于提升加工性能和感官特性，]发现，豌豆与荞麦复配可以显著改如黏度和形成时间;善荞麦粉的亮度、Angioloni]发现，燕麦等[荞麦和小麦复配后可以改善、单一杂粮面团粘结性差和过于坚硬的问题，提高了小适口性和可加工性、米进行谷物面条的研究，发现同时包含三种杂粮粉的面条感官品质最高，因而，杂粮复配后比单一杂粮具有更高的生产利用空间颜色、黑麦、]利用荞麦齐婧等[Beitane黄豆等[。。、171819]20-21。。BOPBOP燕麦及、复配式杂粮降血糖的机制尚不明确本研究中，荞麦干预均降低了糖尿病大鼠的胰岛素抵抗水平，但对空腹血清胰岛素没有明显影响，表明的降血糖效果并不是通过促进胰岛素分泌实现的，这与之前荞麦干预研究的结果相似[也有研究表明燕麦可能具有促进胰岛素分泌的作用，糖尿病鼠的胰岛素水平明显降]，而本研究中模型对照组和空白对照组大鼠低[的胰岛素水平没有明显差异，这可能与糖尿病模型以往研究发现，中胰岛素分泌受损伤的程度有关。降低炎症及氧化应燕麦还可能通过调节血脂荞麦、、]，同时，荞麦和豌激水平等作用改善糖代谢[，25-26等胰岛素作用通路发挥作豆还可能通过降血糖的具体机制还需要进一步用[研究PIK3/AKT]，故BOP22-2426-27，114。。综上所述，可以降低糖尿病大鼠的空腹血糖，改善糖耐量及胰岛素抵抗，减轻糖尿病症状，具有进一步开发利用的价值BOP。参考文献[1]InternationalDiabetesFederation.IDFDiabetesAtlas()[]:2019-11-142020-08-24.https//www.diabetesatlas.org.EB/OL[].[2]LiL，LietzG，tematicreviewandmeta-analysisSealC.BuckwheatandCVDriskmarkers，，Asys-):(.Nutrients2018105[]J:619.[3]HeLX，ZhaoJ，HuangYS，etal.Thedifferencebetweenoats，intakeinthemanagementofHbA1candbeta-glucanextractfastingglucoseandinsulinsensitivity:mizedcontrolledtrials.FoodFunct2016[]Jameta-analysisofrando-，):(31413-，7·254·1428.[4]Al-MalkiAL.OatAttenuationofhyperglycemia-inducedretinaloxidativestressandNF-kappaBactivationinstreptozotocin-induced，.EvidBasedComplementAlternatMeddiabeticrats[]J2013，:2013983923.[5]HashemiZ，FouhseJ，ImHS，etal.Dietarypeafibersupplemen-tationimprovesglycemiaandinduceschangesinthecompositionofgutmicrobiota，ofmucinsinglucoseintolerantrats():111236.serumshortchainfattyacidprofileandexpression，，.Nutrients20179[]Jbreadmaking1292.[6]何宇纳，赵丽云，于冬梅，等.):营养学报，，(][J.中国成年居民粗杂粮摄入状况115-118.[20报(自然科学版)，(3]刘淑梅，韩淑英，张宝忠，等2018，39):58-64.[7]RuggieroE，BonaccioMDiCastelnuovoA，etal.Consumption血症大鼠血脂]血糖及脂质过氧化的影响[J.、.荞麦种子总黄酮对糖尿病高脂中成药，2016238，ofwholegrainfoodanditsdeterminantsinageneralItalianpopula-2003ResultsfromtheINHESstudy[]J.NutrMetabCardiovasc[]21ZhangQ，ZhangY，etal.Effectoftartarybuckwheat，tion:，Dis2019，29(6):611-620.北京大学学报(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Vol.53No.3Jun.2021北京大学医学出版社，2009.BeitaneI，Krumina-ZemtureG，SabovicsM.Technological[]17propertiesofpeaandbuckwheatfloursandtheirblends，TreijaSSkujenieceS.Researchforruraldevelopment.JelgavaLatviaUnivLifeSciences&Technologies，2016:137-142.[]M//:[]18AngioloniA，Kamutoat，，CollarC.Nutritionalandfunctionaladdedvalueof，ryeandbuckwheatversuscommonwheatin.JSciFoodAgric，2011，91():71283-spelt[]J[]齐婧，吕莹果19]多谷物面条的配方优化[J..河南工业大学学():860-61.，25，PengL，rutinandquercetinonlipidmetabolisminratsduringhighdietary[]Jfatintake，LiuM.FoodSciNutr，，ZhangHZhangY，2020(，81):199-213.etal.Theanti-diabeticactivityofoatβ-d-glucaninstreptozotocin-nicotinamideinduceddiabeticmice[]J.IntJBiolMacromol1170-1176.，，91:[]23ShenRL，CaiFL，DongJLetal.Hypoglycemiceffectsandbio-2016，chemicalmechanismsofoatproductsonstreptozotocin-induceddiabeticmice[]J.JAgricFoodChem，2011，59(16):8895-[24]张慧娟，黄莲燕，尹梦，等.，食品工业科技，][J.20173810燕麦多肽降血糖功能的研究(，):360-363384.[25]柳春，王艳杰，刘洋，等.]脏的保护作用及机制[J.苦荞麦提取物对糖尿病模型大鼠肾):中国老年学杂志，，(2016363[8]韩珍华，王瑞，吕万勇.糖尿病患者营养教育中粗杂粮摄入]情况分析[J.，，QiuJLiuY[9]海南医学，2013，24(12):1842-1844.[]22YueY，etal.Dietarytartarybuckwheatintakeat-tenuatesinsulinresistanceandimproveslipidprofilesinpatients，:withtype2diabetesarandomizedcontrolledtrial.NutrRes[]J燕麦饮食干预在社区2中国现代医学杂志，型糖尿病，288900.2018[10，():123620161392-1401.]杨兰兰，徐曼，董方虹，等.饮食治疗中的应用研究[]J.(19):，75-79.，CaiX[]11LiXMaX，etal.Short-andlong-termeffectsofwho-legrainoatintakeonweightmanagementandglucolipidmetabolism][J.inoverweighttype-2diabeticsarandomizedcontroltrial:Nutrients，2016(，89):549.[]梁云12]荞麦早餐饮食对糖尿病患者餐后血糖的影响[J..临[]26床合理用药杂志，2018，11(17):116-117.[]方海滨，亢春雨，郭梦冉，等13.]脂大鼠模型的降糖降脂作用研究[J.薏米燕麦膨化食品对高血糖血河北农业大学学报，，41(6):201887-91.[]27[]中国食品药品监督管理局14辅助降血糖功能评价方法[EB/.].OL(2012-04-232020-08-27.http]://www.cfda.com.cn/)[557-559.HuY，HouZ，YiR，etal.Tartarybuckwheatflavonoidsamelio-ratehighfructose-inducedinsulinresistanceandoxidativestressassociatedwiththeinsulinsignalingandNrf2/HO-1pathwaysin[]Jmice.FoodFunct，，，8，，2017():82803-2816.YangKYangHHashemiZ，incretineffectsofpeaseedcoatconsumptiononglucosetolerance[]Jandpancreatichormonesinhigh-fat-diet-fedrats.Appletal.Cookingenhancesbeneficial，NewsDetail.aspxid=53366.[]15Perez-RamirezIFBecerril-OcampoLJ?，，Reynoso-CamachoR，etPhysiolNutrMetab，2015，40(4):323-333.al.Cookieselaboratedwithoatandcommonbeanfloursimprovedserummarkersindiabeticrats():3998-1007.[]J.JSciFoodAgric，2018，98[]杨月欣，王光亚，潘兴昌16中国食物成分表[M].2版.北京:.(收稿)(本文编辑:任英慧)2021-01-27
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栝楼桂枝汤加减治疗中风肢体痉挛的临床疗效及对脑动脉血流动力学指标的影响
目的]探讨栝楼桂枝汤加减治疗中风肢体痉挛的临床效果观察及对脑血流动力学指标的影响。[方法]选取2017年1月至2019年7月本院收治的108例中风肢体痉挛患者，根据治疗方法将其分为观察组和对照组，每组各54例。对照组给予内科常规治疗联合康复训练，观察组在对照组基础上给予栝楼桂枝汤治疗。记录两组治疗前后脑血流动力学指标、患侧肌电活动、简化Fugl‐Meyer评分、改良Ashworth痉挛量表（MAS）、改良Barthel指数量表（BI）及血清白细胞介素‐1β（IL‐1β）、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、神经元特异性醇化酶（NSE）、同型半胱氨酸（Hcy）水平变化，并统计两组患者临床治疗总有效率。[结果]观察组总有效率为94.44%（51/54），显著高于对照组81.48%（44/54），差异有统计学意义（χ2=4.285，P=0.038<0.05）。治疗后，两组ACA、MCA、PCA平均血流速度较治疗前上升，观察组显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者血清IL‐1β、TNF‐α、NSE、Hcy水平均低于治疗前，观察组显著低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。两组患侧肱二头肌、股四头肌RMS值较治疗前下降，观察组患侧肱二头肌、股四头肌RMS值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者简化Fugl‐Meyer评分、BI评分较治疗前上升，MAS评分较治疗前下降，观察组简化Fugl‐Meyer评分、BI评分高于对照组，MAS评分低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。[结论]栝楼桂枝汤加减治疗中风肢体痉挛可调节相关炎症因子的表达，改善脑血流动力学，有利于促进患侧肢体康复。[关键词]中风/并发症;四肢麻痹/并发症;中风/中药疗法;四肢麻痹/中药疗法;血液动力学ClinicalEffectObservationofTrichosanthesKirilowii（GualouGuizhi）DecoctionintheTreatmentofApoplecticLimbSpasmanditsInfluenceonCerebralHemodynamicIndexesSHIKe，FANXiu‐feng，YUEJing（DepartmentofInternalMedicine，Chang＇anDistrictHospitalofTraditionalChineseMedicine，Xi＇an710100，ShaanxiProvince）[Abstract][Objective]ToinvestigatetheclinicaleffectofTrichosantheskirilowii（GualouGuizhi）decoctioninthetreat‐mentofapoplecticlimbspasmanditsinfluenceoncerebralhemodynamicindexes.[Methods]FromJanuary2017toJuly2019，108casesofapoplecticlimbspasminourhospitalwereselectedanddividedintoobservationgroupandcontrolgroupaccordingtothetreatmentmethod，with54casesineachgroup.Thecontrolgroupwasgivenroutinemedicaltreatmentcombinedwithrehabilitationtraining，andtheobservationgroupwasgiventheTrichosantheskirilowiidecoctiononthebasisofthecontrolgroup.Thechangesofcerebralhemodynamicindexes，myoelectricactivityofaffectedside，simplifiedFuglMeyerscore，mod‐ifiedAshworthspasticityscale（MAS），modifiedBarthelIndex（BI）andserumlevelsofinterleukin‐1β（IL‐1β），tumornecro‐sisfactor‐α（TNF‐α），neuronspecificalcoholase（NSE）andhomocysteine（Hcy）wererecordedbeforeandaftertreatment，andthetotaleffectiverateofthetwogroupswasstatisticallyanalyzed.[Results]Thetotaleffectiverateoftheobservationgroupwas94.44%（51/54），whichwassignificantlyhigherthanthatofthecontrolgroup（81.48%）（χ2=4.285，P=0.038<0.05）.Aftertreatment，theaveragebloodflowvelocityofACA，MCAandPCAinthetwogroupsincreasedcomparedwiththatbeforetreatment，andtheobservationgroupwassignificantlyhigherthanthecontrolgroup，thedifferencewasstatistical‐lysignificant（P<0.05）.TheserumlevelsofIL‐1β，TNF‐α，NSEandHcyinthetwogroupswerelowerthanthosebeforetreatment，andthoseintheobservationgroupweresignificantlylowerthanthoseinthecontrolgroup（P<0.05）.TheRMSvaluesofbicepsbrachiiandquadricepsfemorisinthetwogroupswerelowerthanthosebeforetreatment.TheRMSvaluesofbicepsbrachiiandquadricepsfemorisintheobservationgroupwerelowerthanthoseinthecontrolgroup（P<0.05）.ThesimplifiedFuglMeyerscoreandBiscoreofthetwogroupswerehigherthanthosebeforetreatment，whiletheMASscorewas·8561·医学临床研究2020年11月第37卷第11期JClinRes，Nov.2020，Vol37，№11lowerthanthatbeforetreatment.ThesimplifiedFuglMeyerscoreandBiscoreoftheobservationgroupwerehigherthanthoseofthecontrolgroup，andtheMASscorewaslowerthanthatofthecontrolgroup（P<0.05）.[Conclusion]Themodi‐fiedTrichosantheskirilowiidecoctioncanregulatetheexpressionofrelatedinflammatoryfactors，improvecerebralhemody‐namics，andpromotetheaffectedlimb.[Keywords]Stroke/CO;Quadriplegia/CO;Stroke/ZD;Quadriplegia/ZD;Hemodynamics[中图分类号]R255.2[文献标识码]A[doi:10.3969/j.issn.1671‐7171.2020.11.018][文章编号]1671‐7171（2020）11‐1657‐03中风是临床常见的脑血管疾病，包括脑梗死、脑出血，导致神经功能缺损。肢体痉挛是中风患者的常见后遗症之一，可导致肢体肌肉等软组织挛缩、变形、张力异常，严重影响患者肢体运动协调性[1]。现代医学对于中风恢复期肢体痉挛并无理想的治疗方法，多采用物理疗法、康复锻炼等方法干预，但治疗效果并不十分满意[2]。中医学理论认为，中风以正虚邪中、血瘀痰阻为主要病机，外邪、痰瘀流注于筋脉，使气血运行失常，筋骨失濡而发为痉挛。中风恢复期肢体痉挛属于中医学理论中“痉病”范畴，治则以活血化瘀、舒筋活络为法[3]。栝楼桂枝汤方出自《金匮要略》，功擅解肌祛邪、舒缓筋脉，契合中风后肢体痉挛的病机[4]。本研究以栝楼桂枝汤方为基础，增加活血化瘀类中药治疗中风恢复期肢体痉挛，观察其临床效果观察及对脑血流情况的影响，现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料选取2017年1月至2019年7月本院收治的108例中风肢体痉挛患者，根据治疗方法将其分为观察组和对照组，每组各54例。对照组:男28例，女26例;年龄40~70（53.66±8.14）岁;病程（49.63±10.44）h;脑梗死34例，脑出血20例;上肢肌肉痉挛25例，下肢肌肉痉挛29例。观察组:男31例，女23例;年龄38~70（54.21±9.22）岁;病程（51.02±9.47）h;脑梗死29例，脑出血25例;上肢肌肉痉挛28例，下肢肌肉痉挛26例。纳入标准:西医符合各类脑血管疾病诊断要点中脑梗死和脑出血的有可比性。1.2方法对照组给予内科常规治疗+康复训练，包括降压、降糖、调脂、抗血小板、营养神经等药物治疗，并采用Bobath技术进行康复训练。观察组在对照组基础上给予栝楼桂枝汤治疗，包括栝楼30g、桂枝10g、白芍10g、当归15g、川芎10g、红花10g、桃仁10g、川牛膝10g、鸡血藤15g、木瓜10g、桑枝10g、伸筋草15g、甘草6g、大枣7枚。以上药方每日一剂，加水煎煮两次，取药液300mL，分2次口服。两组均连续治疗12周。1.3观察指标①分别于治疗前、治疗12周后的清晨采集患者空腹静脉血4mL，3000r/min离心10min，分离血清。采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素‐1β（IL‐1β）、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、神经元特异性醇化酶（NSE）、同型半胱氨酸（Hcy）水平。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。②分别于治疗前、治疗12周后应用德国EME公司TC‐2000s型经颅多普勒超声仪器检查患者大脑前动脉（ACA）、中动脉（MCA）、后动脉（PCA）平均血流速度指标即VACA、VMCA、VPCA。采用表面肌电信号系统收集上肢肱二头肌、肱四头肌肌电信号值，取均方根值（RMS）。③采用简化的Fugl‐Meyer评分评价患肢运动功能，分数越低，说明患肢运动功能越差。④改良Ash‐worth痉挛量表（MAS）评分:上肢以肱二头肌、胸大肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌为观察对象，下肢以股四头肌、小腿三头肌、胫骨后肌为观测对象。总分0~4分，得分越高，肌力越差。⑤改良Barthel指数量表（BI）评分:总分为100分，得分越高，独立性越好，依赖性越小。⑥评估两组患者临床疗效，包括基本痊愈:病残程度0级，神经功能缺损评分（NFDS）减少91%~100%;显著进步:病残程度1~3级，NFDS评分减少46%~90%;进步:NFDS评分减少18%~45%;无变化:未达到上述标准。1.4统计学方法采用SPSS19.0统计学软件进行分析，计量资料采用（x±s）表示，组间比较行独立样本t检验，组内比较行配对t检验，计数资料采用百诊断标准[5]，并经头颅CT或MRI检查证实;中医符合中风病诊断和疗效评定标准[6]中的诊断标准;改良Ashworth评定患侧肢体肌张力≤Ⅲ级;均为单侧偏瘫;发病时间≤72h，均为初次发作;临床资料完整。排除标准:非首次发病者;非脑血管病变原因所致的偏瘫;合并心、肝、肾等严重功能不全者;合并全身感染、精神疾病及关节挛缩或畸形者。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），医学临床研究2020年11月第37卷第11期JClinRes，Nov.2020，Vol37，№11分率表示，组间比较行χ2检验。2结果2.1两组患者临床疗效比较观察组总有效率为94.44%（51/54），显著高于对照组81.48%（44/54），差异有统计学意义（χ2=4.285，P=0.038<0.05），见表1。观察组30对照组29组别意义（P<0.05），见表2。·9561·表2两组患者脑动脉血流动力学指标水平比较（x±s，cm/s，n=54）VACAVMCA治疗前治疗后41.52±6.471）.58±5.42治疗前治疗后56.34±428.161）.52±7.84.14±5.220.547.586048.78±6.951）2）5.618.000041.98±8.250.349.364063.41±8.591）2）4.385.0000VPCA治疗前.23±335.56治疗后37.48±5.171）32.92±6.070.277.391042.74±5.631）2）5.057.0000tP1）与治疗前比较:P<0.05;2）与对照组比较:P<0.052.3两组患者血清IL‐1β、TNF‐α、NSE、Hcy水平比较治疗后，两组患者血清IL‐1β、TNF‐α、NSE、Hcy水平均低于治疗前，观察组显著低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。表3两组患者血清IL‐1β、TNF‐α、NSE、Hcy水平比较（x±s，n=54）治疗后.42±0.461）1.11±0.411）2）130.697.0002526治疗前.85±5.22.04±4.9100.195.423NSE（μg/L）2014治疗后.11±4.431）.87±3.751）2）60.634.000Hcy（μmol/L）1613治疗后.77±3.461）.14±3.171）2）50.684.0002323治疗前.56±5.32.14±6.7400.359.360表1两组患者疗效比较（例，%，n=54）组别进步无变化.48）.78）.52）.56）17（3115（2710（183（5基本痊愈.11）6（119（16.67）显著进步.89）21（3827（50.00）组别对照组观察组2.2两组患者脑动脉血流动力学指标水平比较治疗后，两组VACA、VMCA、VPCA均高于治疗前，观察组VACA、VMCA、VPCA显著高于对照组，差异有统计学TNF‐α（ng/mL）对照组观察组治疗前.52±0.89.47±0.9300治疗前.95±0.61.98±0.58001）与治疗前比较:P<0.05;2）与对照组比较:P<0.052.4两组患者患侧肌电活动比较治疗后，两组患侧肱二头肌、股四头肌RMS值较治疗前下降，观察组患侧肱二头肌、股四头肌RMS值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。IL‐1β（ng/mL）治疗后.52±0.511）1.20±0.441）2）1.285.388.491.000.262.397tP221130表4两组患者患侧肌电活动比较（x±s，n=54）股四头肌RMS值肱二头肌RMS值组别对照组22观察组23tP治疗前.54±10.52.02±8.9700.255.400治疗后.85±5.111）.52±4.231）2）161330.689.0002120治疗前.54±7.63.82±8.0300.478.317治疗后.51±4.851）.32±3.621）2）141130.873.0001）与治疗前比较:P<0.05;2）与对照组比较:P<0.052.5两组患者简化Fugl‐Meyer评分、MAS评分、BI评分比较治疗后，两组患者简化Fugl‐Meyer评分、BI评分较治疗前上升，MAS评分较治疗前下降，观察组简化Fugl‐Meyer评分、BI评分高于对照组，MAS评分低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表5。表5两组患者简化Fugl‐Meyer评分、MAS评分、BI评分比较（x±s，分）简化Fugl‐Meyer评分治疗前治疗后46.22±327.461）.84±6.48MAS评分治疗前治疗后2.53±30.321）.58±0.4534.98±7.23.62010.05454.23±8.111）2）.34250.0003.61±0.37.37800.353.13±20.281）2）.91360.000组别对照组观察组tP1）与治疗前比较:P<0.05;2）与对照组比较:P<0.05BI评分治疗前.56±426.36治疗后61.32±7.521）44.05±6.15.23810.10972.02±8.551）2）.90560.0003讨论中风恢复期肢体痉挛是脑血管疾病发生后大脑高级运动调控中枢受损，对脊髓低位运动中枢神经的调控作用中断，导致低级中枢神经原始反射过度释放，运动环路兴奋性增强，若治疗不当，患者肢体痉挛会逐步加重，继而导致偏瘫侧肢体肌张力增高、关节活动度降低，并可诱发肢体疼痛，甚至引起挛缩畸形，严重影响患者的身心健康[7]。多数研究显示，西医药物联合康复训练的常规治疗并不能起到满意的治疗效果，患者肢体功能的改善并不理想[8]。中医学理论认为，中风后机体阴阳失调，肝藏血主筋之功能受到影响，肝血不得濡养肌肉筋脉，使筋肌失养而拘挛[9]。《灵枢·刺节真邪》有云:“虚邪偏客于身半，其入深，内居营卫，营卫稍衰，则真气去，邪气独留，发为偏枯”，指出中风多为本虚标实之证，瘀血、邪气搏结引起气血不畅，筋骨失濡[10]。栝楼桂枝汤是主治太阳病的名方，由于其所治病证与中风恢复期肢体痉挛病机相似，因此本研究将其应用于中风恢复期肢体痉挛的治疗。栝楼桂枝汤方中以栝楼为君药，功擅清热生津、柔润筋脉;桂枝祛邪解肌、调理气血，为臣药。佐以白芍缓急止痛、养血柔肝;大枣补益气血、滋润心肺;甘草为使药，可缓急止痛、调和全方[11]。本研究在此方之上增加当归活血·0661·化瘀、养血和营;川芎行气活血、化瘀止痛;红花、桃仁活血祛瘀、调经止痛;川牛膝逐瘀通经、通利关节;鸡血藤活血化瘀、和血通络;木瓜舒筋活络、化湿和胃;桑枝祛风除湿、舒筋活络;伸筋草祛风除湿、舒筋活络。诸药合用，共奏活血化瘀、舒筋活络之功效。本研究采用栝楼桂枝汤加减治疗者治疗后总有医学临床研究2020年11月第37卷第11期JClinRes，Nov.2020，Vol37，№11进行加减，在原方基础上去除生姜，增加当归、川芎、红花、桃仁、川牛膝、鸡血藤、木瓜、桑枝、伸筋草等中药，治疗中风恢复期肢体痉挛取得了良好的效果，不仅减轻神经功能缺损，促进患侧肢体功能恢复，可增加脑血流灌注、降低异常的肌张力，还可减轻炎症反应，为临床治疗中风恢复期肢体痉挛提供了新思路。[参考文献][1]韩晓涛.老年脑卒中偏瘫合并肺部感染的临床特点及危险因[3]张亚男，邹忆怀，罗树云，等.邹忆怀教授论治缺血性中风经素分析[J].中国临床保健杂志，2019，22（6）:818‐820.[2]BenjaminT，KalinoskyRB，BrianDS.Structurofunctionalresting‐statenetworkscorrelatewithmotorfunctioninchro‐nicstroke[J].NeuroimageClin，2017，16:610‐623.验[J].陕西中医，2019，40（12）:1765‐1767.观察[J].上海针灸杂志，2018，37（7）:746‐750.点[J].中华神经科杂志，1996，29（6）:379‐384.标准（试行）[J].北京中医药大学学报，1996，19（11）:55.[5]中华神经科学会，中华神经外科学会.各类脑血管疾病诊断要[4]林凌.栝楼桂枝汤经穴导入对脑卒中后痉挛性足下垂的疗效[6]国家中医药管理局脑病急症协作组.中风病诊断与疗效评定医杂志，2018，34（6）:171‐174.[7]满斌，王悦.中风后痉挛性瘫痪的中西医治疗进展[J].湖南中[8]ValkenborghsSR，VisserMM，NilssonM，etal.Aerobicexercisepriortotask‐specifictrainingtoimprovepoststrokemotorfunction:Acaseseries[J].PhysiotherResInt，2018，23（3）:e1707.效评价[J].吉林中医药，2019，39（12）:1609‐1612.[10]寿雅琨，刘芳，周胜强，等.国医大师刘祖贻运用温阳活血法治疗中风后遗症经验[J].湖南中医药大学学报，2019，39（10）:1179‐1182.[11]李娜，常静玲.从古今医案谈中风病常用四组药对[J].环球中[9]付东婷，杨明，南红梅.中风病急性期中医综合诊疗方案的疗医药，2019，12（12）:1895‐1898.[12]王静敏.平衡舒筋手法联合参芪复瘫汤治疗中风后手痉挛疗效观察[J].中国实用神经疾病杂志，2018，21（13）:1485‐1488.[13]JungsooL.Alterationandroleofinterhemisphericandintra‐hemisphericconnectivityinmotornetworkafterstroke[J].BrainTopography，2018，31（4）:1‐12.[14]AdelynPT，NikhileshN，JasonG，etal.Effectsofsomato‐sensoryelectricalstimulationonmotorfunctionandcorticaloscillations[J].JNeuroengRehabil，2017，14（1）:113.[15]古春青，武继涛.化瘀通脉汤联合针刺对脑卒中后肢体痉挛患者血清NSE、Hcy水平的影响[J].中医学报，2017，32（12）:2549‐2552.[16]孙丽，施海涛，周萍萍，等.应用表面肌电图评价针刺四间穴治疗脑卒中手痉挛的临床疗效分析[J].中国中医药科技，2018，25（4）:606‐607.（本文编辑:张兴珍）[收稿日期]2020‐09‐16效率高于采用常规治疗者，简化Fugl‐Meyer评分、BI评分高于采用常规治疗者，MAS评分低于采用常规治疗者。临床疗效显示，栝楼桂枝汤加减治疗中风恢复期肢体痉挛可更好地减轻神经功能缺损，改善肌力，促进患侧肢体功能和日常生活自理能力的恢复。脑动脉血流动力学指标结果显示，栝楼桂枝汤加减治疗中风恢复期肢体痉挛可更好地提高大脑ACA、MCA、PCA平均血流速度，改善脑组织血流灌注。主要是由于栝楼桂枝汤加减方中栝楼可减少活性氧簇形成、抑制细胞钙离子超载、减轻炎症反应;当归、红花、桃仁等活血化瘀类中药可抗血小板聚集、缩小脑梗死面积、提高脑组织血流灌注量;川芎中所含的生物碱、酚类成分可扩张血管、增加脑组织血流灌注;川芎嗪具有抗血小板聚集、降低血液黏度等作用，可抑制微血栓形成，改善微循环[12]。机体炎症反应和肌力异常是引起中风恢复期肢体痉挛的重要原因之一，IL‐1β、TNF‐α均是重要的促炎因子，可引起炎症级联反应，参与了脑组织缺血、缺氧性损伤过程[13]。NSE是由神经细胞分泌的特异性蛋白，中风后神经细胞膜受损，NSE大量释放，经血脑屏障进入血液而引起血中NSE水平升高[14]。Hcy是由甲硫氨酸的中间代谢产物，参与氧化应激反应、炎症反应，引起内皮细胞损伤，促进血管平滑肌细胞增殖、血管壁增厚，是引起动脉粥样硬化的危险因子，可增加中风的风险[15]。肱二头肌和股四头肌RMS值是反映上肢肌力的常用指标，RMS值越高，表示肌张力越高[16]。本研究结果显示，观察组血清IL‐1β、TNF‐α、NSE、Hcy水平及肱二头肌和股四头肌RMS值均低于对照组，提示栝楼桂枝汤加减治疗中风恢复期肢体痉挛可减轻炎症反应，降低过高的肌张力。这是由于栝楼桂枝汤加减方中的活血化瘀类中药可扩张毛细血管，加速炎性损伤部位的代谢，有利于炎症因子的清除。中风恢复期肢体痉挛是影响中风患者生存质量的常见原因之一，现代医学无满意的治疗方法。本研究通过查阅中医典籍，结合中风恢复期肢体痉挛的病因病机，采用《金匮要略》中所载的栝楼桂枝汤
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沉香气体吸入给药通过影响神经递质调节小鼠睡眠的作用研究
目的:通过沉香气体吸入给药模拟沉香传统给药方式(熏香)，考查沉香气体吸入给药对正常小鼠及失眠小鼠睡眠的影响。方法:采用正常小鼠和对氯苯丙氨酸(300mg/kg)诱导的失眠小鼠模型，通过多种行为学检测考察沉香气体吸入给药对动物睡眠与情绪的影响，并检测不同脑区神经递质的变化。结果:沉香气体吸入给药(0.3g/6只，0.5g/6只)显著促进正常小鼠睡眠，对其自主活动没有显著影响。与对照组相比，失眠小鼠给药期间活动频率显著增加，转棒掉落时间显著降低，探洞次数与悬尾不动时间显著减少。沉香气体吸入给药能够显著降低给药期间活动频率，对于失眠小鼠的生活质量与运动能力均具有显著改善作用，但对于探头次数与悬尾不动时间没有显著影响。机制研究显示，失眠小鼠下丘脑中谷氨酸/γ-氨基丁酸比值增加，而沉香气体吸入给药可以下调该比值。结论:沉香气体吸入给药能够促进动物睡眠，改善失眠状态，但对情绪无显著影响，这种作用主要与气体吸入给药对氨基酸类神经递质的调节作用有关。
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先天性心脏病手术后残余解剖畸形患者体外膜肺氧合支持的效果分析
目的总结小儿先天性心脏病手术后存在残余解剖畸形的患者接受体外膜肺氧合(，ECMO日接受)支持的临床结局ex-。方法回顾性分析上海儿童医学中心支持的先天性心脏病手术后患者的临床资料及预后情tracorporealmembraneoxygenation月日至年月年2017况，分析残余解剖畸形和后续处理方式对其转归的影响ECMO202030116522426132n=20ECMO)和非残余组())，再将n=106。结果在例)，复杂先心病(例)，部分患者有多种畸形)26干预组(畸形，其中简单先心病(例)和残余分流(余组的(余组的手术干预，干预组的存活率为因主要是低心排出量综合征患者ECMO早发现残余解剖畸形并行手术干预以改善临床预后50%呼吸系统并发症、。结论小儿先天性心脏病术后需要，差异有统计学意义(，差异有统计学意义(χ2=10.539，高于非干预组的3.96±2.7745.28%。dt=2.241例残余解剖畸形患者是否再次进行手术干预分为干预组(例接受例(。根据是否存在残余解剖畸形分为残余组(n=6n=)和非)发现存在残余解剖例)，残余梗阻()13ECMO19.69%支持时间(支持的术后患者中，26例);主要解剖畸形为瓣膜问题(残余组，P=0.0275.26±2.17);残余组病死率为80.77%例有残余解剖畸形患者中12，明显长于非残，高于非残例进行了本组病例的死亡原多器官功能衰竭和心律失常，存活者均为双心室修补的、支持的患者应积极评估是否存在残余解剖畸形，尽，P=0.001(。26χ2=4.754，P=0.02910%。d6))。外科学;心脏缺损，先天性并发症;病理状态，解剖学;体外膜氧/[关键词]合;治疗结果心脏缺损，先天性/[中图分类号]R541.1R493.28R459.6R726.1ECMOinpatientswithresiduallesionsaftercardiacsurgery.LiuMinglu，ShenJia，GuoZheng，YuXindiLeiShanghaiChildren'sMedicalCenter，HuangJianhu，SchoolofMedicine，Email:na.CorrespondingauthorWangWeiwangwei@scmc.com.cn，WangWei.DepartmentofPediatricCardiothoracicSurgery，ShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai200127，Chi-，YangYinyu，ZhangWei，Jiang，[Abstract]ObjectiveToexploretheclinicaloutcomesofextracorporealmembraneoxygenation(EC-)MOinchildrenwithresiduallesionsaftercongenitalheartsurgery.MethodsClinicaldataandprognosiswereanalyzedforpostoperativeresidualanatomicmalformationsin132childrenwithcongenitalheartdisease(，2020.Theeffectsofresidualanatomicaldeformi-supportedbyECMOfromJanuary1，2017toJune30CHD)tiesandfollow-uptreatmentontheoutcomeswereexamined.Baseduponthepresenceorabsenceofresidualan-atomicmalformationtheywereassignedintoresidualgroupn=26andnon-residualgroupn=106.Then()()，accordingtothenecessityofsurgicalintervantiontheformergroupwasfurtherdividedintointerventionsub-()groupn=6andnon-interventionsub-groupresidualanatomicaldeformitiesofvalveproblems)n=20(n=13.ResultsAmongthem)，residualobstruction(，ECMOsupporttime())，26patients()19.69%n=12andresidualshunthad(n=5.Childrenwithresidualanatomicalmalformation5.26±2.77dayswassignificantly，()longerthan3.96±2.77daysforthosewithoutresidualanatomicalmalformation.Andthedifferencewasstatis-:)():10.12260/lcxewkzz.2021.06.004DOI基金项目:国家自然科学基金(编号:作者单位:上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心胸外科(上82070430)海市，200127通信作者:王伟，Email:wangwei@scmc.com.cnticallysignificant(t=2.241，P=0.027);childrenwithresidualanatomyablationhadamortalityrateof80.77%-915-anditwashigherthan45.28%forthosewithoutresidualanatomyandthedifferencewasstatisticallysignificant(χ2=10.539.Twenty-sixchildrenwithresidualanatomyunderwentsurgicalinterventions.Andthe，P=0.001)survivalrateofinterventiongroupwas50%anditwassignificantlyhigherthan10%ofnon-interventiongroup(χ2=4.754.Themajorcausesofmortalitywerelowcardiacoutputsyndrome，respiratorycomplica-，P=0.029，multipleorganfailureandarrhythmia.Allsurvivorswerethoseundergoingbiventricularrepair.Conclusiontions)ThereisacertainprobabilityofresidualanatomicmalformationsinpostoperativeCHDchildrenrequiringECMO.Itisnecessarytoactivelyevaluatetheexistenceofresidualanatomicmalformations.Earlydetectionofresidualan-atomicmalformationsandsurgicalinterventionhelptoimprovetheclinicalprognosis.[Keywords]HeartDefectsHeartDefectsCongenital/CO，;PathologicalConditions，AnatomicalExtracorporealMembraneOxygenationTreatmentOutcome;，;Congenital/SU;体外膜肺氧合(，ECMOextracorporealmembraneoxygen-)是一种有创的高级生命支持技术，用1)。、、。，]2ECMOECMO<2.0L·自二十世纪七十年代心脏手术后不能脱离心肺转流(、ation于支持传统治疗无效的严重心肺功能衰竭患者其适应证包括低心输出量(心排指数min-1·m-2)car-，心脏骤停后心肺复苏效、diopulmonarybypassCPB肺动脉高压难治性心源性果不佳以及呼吸衰竭、体外心肺复苏和等待心脏休克难治性心律不齐、首次应用移植等[于小儿先天性心脏病(简称先心病)术后以来，随着复杂心脏畸形手术的开展不断增加，高难度系数、在小儿心脏手术围术期的应用也随之增加，ECMO支持对降低先心病病死率和改及时有效的据体外生命支持组善预后具有十分重要的意义，)统织(ELSO计显示，心脏手术后新生儿和儿童支持的存支持的活率分别为小儿心脏外科手术患者病死率仍然较高据文献报道这部分患者的死亡原因可能与术后依然存在残余解剖畸形是指明显影响血解剖畸形有关[本研究回顾性液动力学的严重心脏解剖畸形[分析了日上海支持的先心病术后儿童医学中心收治的经患者临床资料，总结残余解剖畸形和非残余解剖畸形患者的临床结局，进一步探讨残余解剖畸形的后续处理方式对患者转归的影响ExtracorporealLifeSupportOrganization，这说明52.6%51.6%。年ECMOECMOECMO日至20202017和年月月30。。。]4]3161。材料与方法一研究对象及分组、选择年月2017年6上海儿童医学中心行心脏手术后使用者作为研究对象日在的患纳入标准:先心病进行体外开胸ECMO日至2020月3011。。、132ECMO的患者的患者手术矫治的患者;排除标准:住院期间进行心脏移先心病手术后先接受心室辅助再改为植的患者最终本支持的ECMO研究共纳入患者，根据是否存在残余解剖畸形分为残余组(例心脏手术后需要手术前接受、)和非残余组(n=);根据残余解剖畸形患者)和复杂先心病);根据残余解剖畸形的种类分为瓣膜问题、例根据是否进行26的病种情况分为简单先心病((残余梗阻和残余分流手术干预分为干预组(同一次住院期间进行多次)n=20例)和非干预组(的患者记为残余组n=106ECMOn=24n=2n=6。26。ECMO1。。相关定义、二残余解剖畸形是指明显影响血液动力学的严对残余解剖畸形采用的干预方动脉瓣膜整形术、、心导管干预(支架、室、房间隔缺、重心脏解剖畸形式:手术再次干预(中央分流术心室流出道重建术等)环缩术、球囊扩张术)置入术、间隔缺损(损(本研究将动脉导管未闭pulmonary;重度除外)归为简单先心病，其余病种根据残余解剖畸形所在位置及残余梗阻和残余stenosis归为复杂先心病其导致的问题，分为瓣膜问题分流肺动脉狭窄(、ventricularseptaldefectatrialseptaldefect，VSD，ASD，PS。。、))。三应用、ECMO适应证:不能脱离1.CPB、肺动脉高压、心输出量低心脏骤、难治性心源性休克停需要心肺复苏、、体外心肺复苏和等待难治性心律不齐呼吸衰竭、、支持的患者，通过超声心脏移植[，]65心动图检查心脏解剖矫治结果，必要时采用心导管手术诊断是否存在解剖问题ECMO对于。2.ECMOECMORotaflowSorin管理:或。安装和管理[1]简述如中空纤维膜式氧、离心泵下:采用合器(MedosHILITE800LT、2400LT、SorinLilliput2-025-静脉、Maquet5050膜式氧合器)或所有患者采用经胸插管动脉灌注管置于升主动脉，静脉引流管置于右心房，部分患者增加左心房插管以减轻左心负荷动脉模式建立循环支持。。-。根据患者体重和病种维持流量在乳酸水平、60~150mL·kg-1·min-1，根据患者病情变化血流动力学监、血气分析结果等适时调整流量，测情况、，维持平均动脉血压()在MAPmeanarterialpressure中心静脉压经皮血、支持期间使用肝，40~70mmHg氧饱和度素抗凝维持激活凝血时间(，持续监测血气及尿量等、。ECMOMAP、activatedclottingtime)在ACT160~180s，活化部分凝血活酶时间(activa-tedpartialthromboplastintime维持血小板水平容，纤维蛋白原0.32~0.40>50×109~80×109/L>1.5g/L。，APTT)在50~70s。，红细胞比定期检测肝肾等重要脏器的功能，待心功能有，撤机前逐渐降低流量，ECMO明显恢复后考虑撤离当患者对辅助流量的要求低于min-1时尝试停机，如血压下降反之，则撤离ECMO。20~50mL·kg-1·，则暂缓撤机，≥30%、残余解剖畸形的处理四发现残余解剖畸形后即由外科医师监护医师、和体外循环医师协商讨论，决定下一步治疗方案。在进行心导管检查时发现的残余解剖畸形，必要时可直接进行心导管干预;如果残余解剖畸形需要进行手术干预，应结合患者情况尽早进行。数据采集、五收集患者的性别、ECMO脱机率院内存、所采取的手术干预方、ICU活率式)住院时间总住院时间、残余解剖畸形的种类、干预结果等临床资料、六统计学分析、使用。x±sSPSS26.0)表示，两组间比较采用独立样本统计软件对所有数据进行整理与分析，对于符合正态分布的计量资料采用均数加减标准差(检验数间距[M验用t偏态分布的计量资料采用中位数和四分位)]表示，两组间比较采用秩和检)表示，两组间比较采(n为差异有统计学意义对于计数资料采用。χ2检验P<0.05，P75P25以。。。%(结果先心病手术后总体情况、一本中心进行支持的10946例，占所有手术的CPB47%132MO持患者的存活率为分别为和占患者中，有52.17%ECMO例(支持，存活50治疗例数的38%例(46.78%。22ECMO44%，存活ECMO输出量而接受)因心脏骤停需要心肺复苏进行(23%因不同适应证接受存活的患者存活率差异没有统计学意义(38%例(2912。)台手术，术后需要接受ECMO1.21%，ECMO残余解剖畸形EC-支，其中新生儿和儿童存活率例，26支持的19.69%。)因体外循环不能撤机进行)因低心);例31支持，支持，例(例(ECMOχ2=1.980ECMO39%56%);51P=0.372。)体外循环时间主动脉阻断时间、辅助时间ECMO年龄、体重等一般情况;收集、机械通气时间、重症监护室(、intensivecareunit、，例残余解剖畸形和26106患者的临床资料见表间为(5.26±2.17d)残余组中的1。，非残余组为(例非残余解剖畸形辅助时，ECMO)3.96±2.77d表1ECMO支持先心病术后有无残余解剖畸形患者临床资料的比较Table1ComparisonofclinicaldataofchildrenwithorwithoutresidualanatomicmalformationafterECMOsupportforcongenitalheartdisease分组例数手术年龄[岁，()][x±skgx±s)]体重，(体外循环时间，(主动脉阻断时间[min)][min，()]x±s[hx±s机械通气时间，(x±s)]住院时间，()]x±sICU[d总住院时间[)]dx±s，(ECMO辅助时间，()]x±s[d残余组非残余组值值tP分组例数残余组非残余组t/χ2值值P26106--261.60±2.428.23±7.01253.3±157.34110.27±68.37266.73±165.913.88±9.1224.42±17.585.26±2.171061.98±3.549.1±10.60193.9±152.0684.18±68.25298.0±211.4717.40±12.6628.60±18.953.96±2.77---0.629-0.4070.5300.6841.7720.0791.7480.083-1.3310.185-1.0210.3092.2410.027性别[n(%)]男((1562))57.758.5女((1144))42.341.5(%肾衰竭人数)][n((46.012))4643.0ECMO天人数<3((442))15.039.0-0.7030.483辅助时间[(n)]%天人数))85.061.0≥3((2264(%脱机人数)][n((54.014))66.070(%存活人数)][n((19.0))554.0580.0230.9410.2040.8395.4020.0201.3410.24710.5390.001残余组。例，存活)5t=2.241，P=0.027;非残余组存活差异有统计学意义(例，存活率存活，两组存活率差异有统计学意义(率，残余组体外循环时间为(P=0.001)10.53919%54%58。)min±157.34异无统计学意义(院时间(，非残余组为(，P=0.079，非残余组为(t=1.772)193.9±152.06。)χ2=253.3，差残余组总住min)28.60±，P=0.309)。18.9524.42±17.58d，差异无统计学意义()t=-1.021d先心病术后残余解剖畸形类型二、所有。26ECMO支持患者都进行超声心动图评估，例先心病术后存在残余解剖共行心导管检查例，残余分畸形，其中瓣膜问题例，部分患者存在多种残余解剖畸形，包括二尖流瓣反流合并主动脉瓣关闭不全，室间隔缺损合并主动脉狭窄，室间隔缺损合并右室流出道残余梗阻，肺动脉狭窄合并下腔静脉狭窄，见表例，残余梗阻131252。残余解剖畸形患者的病种情况、例先心病手术后残余解剖畸形患者包括简三26单先心病例，2合并)VSD，TOF，DORV1Fallotventricle例，VSD1例;复杂先心病例，例，法洛四联征(PS124tetralogyofASD1例，右室双出口()5例，完全性心内膜垫缺损(doubleoutletrightpleteendocardialcushiondefect缩窄()，coarctationofaortaCoA3com-例，主动脉)，CAVC例，动脉闭锁(2-125-例，完全性肺静脉异位引流(monaryatresia，PA)21，TAPVCtranspositionofgreatarteriesto-)，)TGA)，1PTA)例。;复杂先心病存，简单先心病和复杂先心病的)，talanomalouspulmonaryvenousconnection例，大动脉转位(例，永存动脉干(例，主动脉弓中断(简单先心病存活例，存活率活存活率差异无统计学意义(见表persistenttruncusarteriosus，IAAinterruptedaorticarch例，存活率，P=0.354χ2=1.05750%17%31453。表2先天性心脏病术后残余解剖畸形种类Table2Typesofresidualanatomicdeformitieswith残余解剖畸形种类瓣膜问题)(n=13残余梗阻()n=12congenitalheartdisease残余解剖畸形细节主动脉瓣关闭不全房室瓣反流二尖瓣反流肺动脉反流/主动脉狭窄血栓肺动脉狭窄冠状动脉开口狭窄肺静脉狭窄右室流出道残余梗阻下腔静脉狭窄/畸形残余分流()n=5室间隔缺损(体肺分流)术后，肺循环过度B-T例数()n=26524242221141pul-注部分患者存在多种残余解剖畸形表3残余解剖畸形患者的病种情况Table3Diseasetypesinchildrenwithresidualanatomicalmalformations例数手术类型残余解剖畸形细节主动脉关闭不全、肺动脉反流、房室瓣反流、、右室流出道残余梗阻、冠脉畸形、肺动脉反流、n=2肺动脉狭窄、15312422111111姑息手术PTA纠治术DORV纠治术纠治术CoATAPVC纠治术根治术IAATGAPA/VSDAVSD修补术根治术，纠治术根治术分期手术VSDIAATOF根治术TGA右室流出道疏通术根治术VSD修补术ASD术后肺循环过度)B-T室间隔缺损合并主动脉狭窄室间隔缺损主动脉狭窄肺静脉狭窄主动脉狭窄主动脉瓣关闭不全(主动脉瓣关闭不全房室瓣反流二尖瓣反流室间隔缺损下腔静脉梗阻肺动脉反流肺动脉狭窄二尖瓣反流二尖瓣反流、肺动脉狭窄、病种PTADORVCoATAPVCIAATGAPA/VSDCAVCVSD/ASDIAATOFTGAPSVSD病种类型复杂先心病()n=24简单先心病)(n=2四方式26先心病手术后残余解剖畸形患者手术干预、例先心病手术后残余解剖畸形患者中有例行外科手术干预，1干预后均携带ECMO例行心导管介入治疗(表回监护室。45)，五先心病手术后残余解剖畸形患者干预组与、非干预组临床资料比较5表显示了手术干预组和非干预组手术后残余例在。例存活，数据和预后信息)，3解剖畸形患者的手术干预患者中，4例成功脱机(ECMO67%6-225-)。1020，0.029，而50%10%)，2例非干预患者中有例脱机，干预组的存活率高例存活，存活率存活率(50%于非干预组，差异有统计学意义(干预组体外循环时间为(，非干预组为(χ2=4.754172.83±125.22)干预组的P=)，差异无统计min学意义(时ECMOt=-1.460)，间为()dd差异无统计学意义(非干预组的死亡原因较多，主要是低心排出量综合征()和呼吸系统并发症，多器官功能衰竭(277.45±160.58，P=0.157，非干预组为(，P=0.711lowcardiacoutputsyndrome5.35±2.384.97±1.33t=-0.375LCOSmin，。。))multipleorgandysfunction，MODS)和心律失常。干预组死亡原因均syndrome为LCOS。表4先天性心脏病手术后残余解剖畸形患者的手术干预方法Table4Surgicalinterventionsofresidualanatomicmalfor-mationinchildrenwithcongenitalheartdisease干预措施例数()分流术(中央分流)B-T二尖瓣整形术左肺动脉支架置入术+下腔静脉狭窄球囊扩张术肺动脉环缩术右室流出道重建术(管道)n=611121表5先天性心脏病手术后残余解剖畸形患者中干预组与非干预组临床资料比较()x±sTable5Comparisonofsurgicalinterventiongroupandnon-surgicalinterventiongroupinchildrenwith手术年龄(岁)residualanatomicaldeformities体外循环时间()体重()minkg()x±s主动脉阻断时间()min机械通气时间()hECMO)时间(d住院)ICU时间(d总住院)时间(d分组例数干预组非干预组值值tP620--分组例数干预组非干预组值值tP620--0.94±0.586.30±1.36172.83±125.2270.50±31.22270.17±130.554.97±1.3315.66±7.0631.00±12.741.80±2.738.82±7.91277.45±160.58122.20±72.43265.70±178.125.35±2.3813.35±9.7522.45±18.611.3170.2011.3550.1891.4600.157存活患者时间(ECMO)d死亡患者时间(ECMO)d1.683-0.0570.105存活患者住院时间(ICU0.955死亡患者住院时间()d)dICU-0.3750.7110.5370.596存活患者总住院时间()d1.0470.306死亡患者总住院时间()d5.14±1.864.81±0.9520.33±1.5211±7.5441.66±5.6820.33±5.682.71±0.115.63±2.4025.00±2.8212.05±9.3937.00±7.0720.83±18.881.7500.178-0.6060.551-2.4880.089-0.1840.8560.8270.469-0.0450.965讨论ECMO段，在小儿先心病手术后，持自身循环，需要支持[示，心脏手术后新生儿和儿童分别为是支持严重心肺功能衰竭患者的最终手的患者无法维统计显支持的存活率，与本组病例新生儿和儿童0.6%~2%据ECMOECMOELSO和，]8。751.6%52.6%支持的存活率分别为，]9。ECMO类似[852.17%和46.78%。13219%本组患者ECMO19.69%例患者中，26，这些患者的生存率仅例有残余解剖畸形，发，明显低生率为于无残余解剖畸形的同解剖矫治完全的病例相比，残余解剖畸形会导致血流动力学异常，心脏负荷增加或心肌供血减少，从而引起低心以及使用输出量和不能脱离预后不佳]研究表明心脏手术后接的情况[发生残余解剖畸形，残余受28%，且残余解剖畸形较解剖畸形患者的生存率为。Agarwal的患者中有ECMOECMO等[CPB，10]4446%10等[49%60%ECMOECMO53%。非残余解剖畸形患者的]研究显示心脏手术后接受支持时间明显延长。的新Howard发现残余解剖畸形，残余解剖畸形新生儿中有，进行手术干预的残余解剖畸生儿的生存率为由此可见，即使在先心病形新生儿生存率为矫治手术中采用了经食道超声检查手术矫治，但仍然有部分患者存在残余解剖畸形，其原因可能包经食道超声检测的局限，使得部分畸形特别括:是心外畸形漏诊;手术结束时，心脏本身的运动尚未完全恢复，可掩盖部分畸形的表现;术后意外情况行心肺复苏按压时影响原先纠治的解剖结构;因此，对于先心病手术后使用的病例，即使在术中采用经食道超声进行了解剖学检查，依然要考虑存在残余解剖畸形的可能性[有些解剖畸形无法用手术方法纠正等ECMO①②③④。，12]11。26本研究例残余解剖畸形中大部分病例可通过超声心动图发现，经胸超声心动图检查是一项针]，但对是超声心动图对评估残余解剖畸形存在一患者的易于执行的床旁影像学检查[ECMO13ECMO13]。。ECMO定局限性，比如的使用会影响超声检查的清晰度，对心室流出道和心外血管的残余解剖畸形探心导管检查一直是先心病患者解剖查不准确[然而心导管属于有创操作，和生理评估的金标准且对设备要求较高，患者必须在支持下实施转运，这使得临床上更倾向于采用非侵入性的替代根据美国心脏协会的建议，对严重怀疑有残方案余解剖畸形而非侵入性检查无法诊断时应该使用心导管检查[本组有支持下行心2导管检查以明确诊断，例残余梗阻病例直接进行1了介入治疗ECMOECMO例在。。]14532612。133054%50%本组例;另有这说明在例存在残余分流。例存在解剖畸形的患者中，共有例进行了再次手术矫治，其中有解剖畸形，以各类瓣膜问题发生最多，达是残余梗阻，为处例;其次有例存活出院，手6，与术后无解剖畸形患者存术干预组存活率达活率支持过程中基本相同及时发现残余畸形，并积极进行干预，可以达到较而未进行再次矫治的患者虽然理想的治疗效果，但整体出撤离50%支持下，这部分院率仅患者心功能有一定恢复，且能耐受脱离支持的状态，但是由于解剖畸形的存在，撤离后心功能会逐渐恶化支持不能改变先心病手术后存在残余解剖畸形患者的长期预后的比例并不低，也达到这说明即使在10%。ECMOECMOECMOECMOECMOECMO故。。。。26。LCOSLCOS本组LCOS、比例最高术后发生残余梗阻、心律失常和、心律失常和、例存在解剖畸形的患者中，死亡原因主，呼吸系统并发症要包括MODS是先心病手术后的主要以。LCOS并发症，也是主要死亡原因的原因主要包括复杂先心病比例高，术前心功能不全，手术影响心功能状态，术中心肌缺血时间长或心肌保护不当，以及瓣膜问题残余分流等残、残余解剖畸形患者中，呼吸系统并发余解剖畸形在死亡原因中占比较高，主症要原因包括术前肺动脉高压，术后心功能受损和术后的全身炎症反应CPB时间长[根据患者不同的死亡原因，提前采取对应的措施可以降低病死率，对于本组死亡原因为的患者，可以通过积加强围手术期心功能保护，制定极纠治解剖畸形、，提高患者生存个体化手术方案来降低心律失率[、的患者，可以通过积极纠治解剖畸形常和、术前纠治肺高压加强对炎症指对于死亡原因为呼吸系统并发症]，复杂先心病比例高等原因除此之外还有手术年龄，MODSMODS加强心功能保护、LCOSLCOS。、。。，17]1516。-325-制定个性化手术方案来提高患者生、标变化的监控存率。本组病例中81%19.69%的患者发现残余解剖畸)，其中残余21/26)，而((形，残余组的总病死率高达(解剖未进行干预的患者病死率为残余解剖进行手术干预的患者病死率为3/);相比非残余组病死率为，残余畸形组总病6在残余解剖畸形组中，进行手术干预的死率更高患者存活率较非干预组显著提高，手术干预组的存活率高达因此对于残余解剖畸形应该积极予以矫治[50%。，41818/2090%50%46%。]。。6例患者中，3在本研究手术干预的例存活患例死亡患者均为单心室生理。支持的单心室患者比双心室]，残余病变伴或不伴有单心室者为双心室生理，3既往研究表明，患者存活率更低[生理的患者均应该进行积极的早期干预[ECMO，20]，18194。。。第一，本研究受到本研究也存在一定局限性第二，较小的样本单中心回顾性研究的固有局限量限制了对于有无残余解剖畸形患者的结局差异的影响因素分析第三，存在其他混杂因素影响综上，在先心病手术进行。支持后，应该及早评估是否有残余解剖畸形，超声心动图是最方便的检查方式，但对于高度怀疑存在残余解剖畸形而非侵入性检查无法诊断时应该使用心导管检查。对于存在残余解剖畸形者，早期评估和干预可以改善其临床结局ECMO。参考文献1于新迪，杨寅愉，沈佳，等天性心脏病术后救治中的效果分析[]J.杂志，体外膜肺氧合在新生儿复杂先中国体外循环):(:.7-11.DOI10.13498/j.cnki.chin.j.，1620181ecc.2018.01.03.，YuXDYangYY，ShenJ，etal.Effectofextracorporealmembraneoxygenationinneonateswithcomplexcongenital，16.ChinJECC，2018[]Jheartdiseaseaftercardiacsurgery(10.13498/j.cnki.chin.j.ecc.2018.01.7-11.DOI):1:03.2GuoZ，YangY，ZhangW，etal.Extracorporealcardiopulmo-][J.naryresuscitationinchildrenafteropenheartsurgeryArtifOrgans，2019，43(7):633-640.DOI10.1111/aor.13:408.3AlsoufiB，AwanA，ManlhiotC，etal.Resultsofrapid-re-sponseextracorporealcardiopulmonaryresuscitationinchil-drenwithrefractorycardiacarrestfollowingcardiacsurgery[]:J.EurJCardiothoracSurg268-275.DOI，2014，45):2(-425-10.1093/ejcts/ezt319.4AgarwalHS，HardisonDC，SavilleBR，etal.Residuallesionsdiseaseciation:Ascientificstatementfromtheamericanheartasso-[]:J2607-2652.DOI.Circulation，2011，123):22(inpostoperativepediatriccardiacsurgerypatientsreceiving10.1161/CIR.0b013e31821b1f10.extracorporealmembraneoxygenationsupport.JThorac15MandalenakisZGiangKWErikssonPCardiovascSurg，2014，147(1):434-441.DOI10.1016/j.childrenwithcongenitalheartdisease[]J:jtcvs.2013.03.021.peakat97%.JAmHeartAssoc2020225LinJC.Extracorporealmembraneoxygenationforsevereped-iatricrespiratoryfailure.RespirCare[]J，2017，62(6):732-16，etal.Extracorporealmembrane:750.DOI6MosierJMoxygenation10.4187/respcare.05338.，，KelseyMRazY)(cydepartment[]JtionsHistory，2015:，19.CritCareECMO:forcriticallyilladultsintheemergen-，currentapplicationsandfuturedirec-431.DOI10.1186/s13054-:015-1155-7.7Lopez-MagallonAJ，SaenzL，LaraGutierrezJ，etal.Tele-medicineinpediatriccriticalcareAretrospectivestudyin17aninternationalextracorporealmembraneoxygenationpro-:):(.TelemedJEHealth7489-496.DOI，2018，24[]Jgram，，?[]J::，etal.SurvivalinHavewereacheda):，(，910.1161/JAHA.120.017704.e017704.DOI于新迪，杜欣为，王伟，等术后死亡原因的分析与探讨[]J.:):(.，172018小儿先天性心脏病体外循环临床小儿外科杂志，12911-916.DOI10.3969/j.issn.1671-6353.2018.12.008.YuXD，DuXW，WangW，etal.Mortalityanalysesforchil-drenwithcongenitalheartdiseaseaftercardiopulmonaryby-[]Jpass.JClinPedSur，2018，17():12911-916.DOI10.:3969/j.issn.1671-6353.2018.12.008.刘宇航，文平，刘启龙，等诊杂志，亚急诊心内直视手术疗效分析[].J、.75):(:，182019例低龄低体重先心病急临床小儿外科9779-783.DOI10.3969/j.issn.1671-:::10.1089/tmj.2017.0223.6353.2019.09.015.8MarattaC，PoteraRM，vanLeeuwenG，etal.ExtracorporealLiuYH，，WenPLiuQL，etal.Emergencyandsub-emer-lifesupportorganization2020pediatricrespiratoryelsoguideline.AsaioJ[]J975-979.DOI10.:(elso，2020):，66():91097/MAT.0000000000001223.9LorussoR，WhitmanG，MilojevicM，etal.2020eacts/elso/sts/aatsexpertconsensusonpost-cardiotomyextracorporeallifesupportinadultpatients()::327-369.DOI110HowardTS10.1016/j.athoracsur.2020.07.009.，KalishBT，WigmoreD，etal.Associationofex-[]J.AnnThoracSurg，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甲状腺相关激素及抗体与缺血性脑卒中患者静脉溶栓的预后相关性研究
目的·探索甲状腺相关激素及抗体与接受重组组织型纤溶酶原激活剂（recombinanttissueplasminogenactivator，rt-PA）静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者预后的关系。方法·回顾性连续纳入2012年5月-2018年8月在上海交通大学医学院附属第九人民医院神经内科接受rt-PA静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者213例。入院时检测甲状腺相关激素及抗体，溶栓后24h评估颅内出血（intracranialhemorrhage，ICH）。随访3个月，通过改良Rankin量表（modified Rankin Scale，mRS）评估功能结局。采用Logistic回归分析甲状腺相关激素及抗体与功能结局、ICH的关系。结果·单因素回归分析，游离三碘甲腺原氨酸（freetriiodothyronine，fT3）、总三碘甲腺原氨酸（totaltriiodothyronine，tT3）、总甲状腺素（totalthyroxine，tT4）水平与不良功能预后相关（P=0.000，P=0.028，P=0.000）;fT3、游离甲状腺素（freethyroxine，fT4）水平与ICH相关（P=0.008，P=0.014）。然而，对其他因素进行校正后，低fT3水平与不良预后独立相关（OR=0.35，95%CI0.138~0.890，P=0.027）;fT3、fT4水平均与ICH无关。此外，fT3与脑卒中严重程度呈负相关（r=-0.291，P=0.000）。结论·低fT3水平与脑卒中的严重程度和功能结局相关。[关键词] 缺血性脑卒中;静脉溶栓;甲状腺相关激素;功能结局;颅内出血[DOI]10.3969/j.issn.1674-8115.2020.04.010 [中图分类号]R743.3[文献标志码]AStudyontheprognosisofintravenousthrombolysisinpatientswithischemicstrokebythyroid-relatedhormonesandantibodiesXUJing-han1,HEXin-wei1,LIQiang1,BAOGuan-shui1,21.DepartmentofNeurology,ShanghaiNinthPeople`sHospital,ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200011,China;2.ClinicalResearchCenter,ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200025,China[Abstract]Objective·Toexploretheassociationbetweenthyroid-relatedhormonesandantibodiesandtheprognosisofischemicstrokepatientstreatedwithintravenousthrombolysisusingrecombinanttissueplasminogenactivator(rt-PA).Methods·Atotalof213consecutivepatientswithischemicstrokewhounderwentrt-PAintravenousthrombolysisintheDepartmentofNeurology,ShanghaiNinthPeople'sHospital,ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine,wereretrospectivelyincludedfromMay2012toAugust2018.Thyroid-relatedhormonesandantibodiesweretestedonadmission,andassessment of intracranial hemorrhage (ICH) was conducted 24 hours after thrombolysis. Functional outcomes were assessed by modified Rankin Scale (mRS)after3monthsoffollow-up.Therelationshipbetweenthyroid-relatedhormonesandantibodiesandtheprognosis(includingfunctionaloutcomeandICH)wasanalyzedbylogisticregressionanalysis.Results·Inunivariateregressionanalysis,freetriiodothyronine(fT3),totaltriiodothyronine,(tT3)andtotalthyroxine(tT4)levelswereassociatedwithpoorfunctionalprognosis(P=0.000,P=0.028,P=0.000)andfT3,andfreethyroxine(fT4)levelswereassociatedwithICH(P=0.008,P=0.014).However,afteradjustmentforothervariables,lowfT3levelswereindependentlyassociatedwithpoorprognosis(OR=0.35,95%CI0.138-0.890,P=0.027),andbothfT3andfT4levelshadnothingtodowithICH.Inaddition,fT3wasnegativelycorrelatedwithstrokeseverity(r=-0.291,P=0.000).Conclusion·LowfT3levelsareassociatedwithstrokeseverityandfunctionaloutcome.[Keywords]ischemicstroke;intravenousthrombolysis;thyroid-relatedhormones;functionaloutcome;intracranialhemorrhage急性脑血管病（脑卒中）已成为全世界成年人死亡和致残的主要疾病，给社会和患者家庭带来了沉重的负担[1]。缺血性脑卒中是最常见的脑卒中类型，占所有脑卒中人群的85%[2]。重组组织型纤溶酶原激活剂（recombinanttissueplasminogenactivator，rt-PA）静脉溶栓是脑卒中急性期恢复血流的常用治疗方法[3]。然而，血流再通后可能会出现血管再闭塞、脑水肿、脑出血等并发症，影响患者的预后。因此，除了已知的预后因素外，探索新的可能影响预后的因素也是必要的。[基金项目] 上海市科学技术委员会科研计划项目（14411972200）;上海吴孟超医学科技基金项目（JJHXM-2019009）。[作者简介] 徐婧涵（1993-），女，硕士生;电子信箱:Xjhaniu@163.com。[通信作者] 包关水，电子信箱:baogs@163.com。[FundingInformation] Scientific Research Program of the Shanghai Municipal Science and Technology Commission (14411972200); Program of Shanghai WU Meng-chao MedicalScienceFoundation(JJHXM-2019009).[CorrespondingAuthor]BAOGuan-shui,E-mail:baogs@163.com.JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)Vol.40No.4Apr.2020Vol.40No.4Apr.2020上海交通大学学报（医学版）JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)徐婧涵，等 甲状腺相关激素及抗体与缺血性脑卒中患者静脉溶栓的预后相关性研究479近年来，越来越多的研究发现甲状腺激素（thyroidhormone）在心脑血管病中的预测价值。动物模型实验证实，下丘脑-垂体-甲状腺轴激素在急性缺血性脑卒中的神经保护和修复等机制中发挥作用[4]。在对人类的研究[5-6]中，促甲状腺激素（thyroidstimulatinghormone，TSH）水平与缺血性脑卒中功能预后的关系是相互矛盾的。有研究[7-8]认为三碘甲腺原氨酸（triiodothyronine，T3）浓度下降与急性缺血性脑卒中预后不良有关。目前，甲状腺激素与急性缺血性脑卒中静脉溶栓治疗预后之间关系的研究报道较少，对于接受rt-PA静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者，甲状腺激素水平与其预后是否相关还不清楚。同时，TSH、T3、甲状腺素（thyroxine，T4）、抗甲状腺过氧化物酶自身抗体（thyroidperoxidaseautoantibody，TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（thyroglobulinantibody，TGAb）对脑卒中患者rt-PA溶栓治疗预后的相关性研究也较少。因此，本研究旨在探索甲状腺相关激素及抗体与接受静脉溶栓治疗的急性缺血性脑卒中患者预后，包括功能结局及颅内出血（intracranialhemorrhage，ICH）的相关性，以期为临床治疗提供依据。1对象与方法1.1研究对象本研究为回顾性研究，连续纳入2012年5月-2018年8月在上海交通大学医学院附属第九人民医院神经内科接受rt-PA静脉溶栓治疗的脑卒中患者。纳入发病4.5h时间窗内接受rt-PA静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者。排除标准:①严重肝肾功能衰竭。②急性或慢性感染性疾病。③甲状腺疾病或者类风湿免疫疾病。④肿瘤疾病。⑤无法配合大部分临床检查。⑥3个月后失访。研究获医院伦理委员会批准（沪九院伦审2018-89-T80号）。家属或患者均知情同意并签署知情同意书。NIHSS）]评分，开始出现神经症状至静脉溶栓时间，是否桥接取栓治疗，血清同型半胱氨酸（Hcy）水平等。实验室生化指标、影像资料:入院第2日清晨抽取患者血液样本，经全自动化学发光免疫分析仪（ADVIA®CentaurXPT，西门子股份公司，德国）检测TSH、T3、T4、TPOAb、TGAb。所有患者在溶栓治疗后24h再次复查头颅CT，并在住院期间进行头颅磁共振成像、CT血管造影或数字减影血管造影、心脏超声、心电图等检查。根据急性脑卒中Org10172治疗试验（trialofOrg10172inacutestroketreatment，TOAST）分型，确定脑卒中病因。1.2.3观察指标主要观察指标为溶栓治疗后3个月的功能预后，采用改良Rankin量表（modified Rankin Scale，mRS）评估患者功能预后。根据mRS评分，分为预后良好组（0~1分）和预后不良组（2~6分）。次要观察指标为脑卒中严重程度和颅内出血。根据NIHSS评分评估患者脑卒中严重程度，NIHSS评分≥8分为中重度脑卒中，NIHSS评分<8分为轻度脑卒中。颅内出血包括无症状性出血和症状性出血。1.3统计学分析采用SPSS22.0统计软件进行数据分析。定量资料采用Kolmogorov-Smirnov检验进行正态性分析，正态性定量资料以x-±s表示，非正态性定量资料以M（Q1，Q3）表示;组间差异比较采用t检验或者秩和检验。定性资料采用n（%）表示，组间差异比较采用χ2检验。甲状腺激素与脑卒中严重程度之间的相关性采用Spearman相关分析进行检验。采用二元Logistic回归分析甲状腺激素与功能预后、颅内出血之间的关系。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.12组患者的基本资料1.2研究方法1.2.1治疗方法患者接受标准的神经系统检查、常规血液检测以及头颅CT扫描。应用rt-PA（勃林格殷格翰药业有限公司，德国），按照体质量0.9mg/kg计算总量（最大量为90mg），进行静脉溶栓。先将总量的10%在1min内缓慢静脉推注，剩余剂量在60min内静脉泵入。1.2.2患者基本资料基线资料包括人口学信息（年龄、性别），脑血管危险因素[9]（高血压、糖尿病、血脂异常、冠心病、房颤、吸烟、饮酒），基线NIHSS[美国国立卫生研究院脑卒中量表（NationalInstituteofHealthStrokeScale，根据入排标准，本研究共纳入213例患者，其中111例（52.1%）功能预后良好，102例（47.9%）功能预后不良;181例（85.0%）未发生颅内出血，32例（15.0%）发生颅内出血。患者资料见表1。患者年龄40~95岁，平均年龄（67.3±12.5）岁，其中男性132例，占62.0%。溶栓前NIHSS评分为0~28分，平均得分为（8±6）分。发病至溶栓时间为15~300min，平均为（167.3±66.7）min。其中，26例患者在静脉溶栓后接受动脉取栓治疗。根据TOAST病因分型，所有患者中39.9%为大动脉粥样硬化型，25.3%为心源性栓塞，18.8%为小动脉闭塞型，16.0%为其他/未确定的病因。http://xuebao.shsmu.edu.cn上海交通大学学报（医学版），2020，40(4)480比较患者基线资料见表1，预后良好组和预后不良组患者除了年龄、糖尿病、高血压、房颤、溶栓前NIHSS评分和溶栓至发病时间外，其他变量比较无统计学差异;合并有房颤、饮酒行为、较高NIHSS评分、桥接取栓治疗的患者更易发生颅内出血。表14组脑卒中患者的基线资料（N=213）Tab1Baselinecharacteristicsoffourgroupsofstrokepatients(N=213)IndicatorGoodprognosis（n=111）Poorprognosis（n=102）PvalueNoICH（n=181）ICH（n=32）Pvalue62（55,72）69（62.2）73（62,82）63（61.8）DemographicdataAge/yearMale/n（%）Strokeriskfactors/n（%）HypertensionDiabetesmellitusDyslipidemiaCoronaryheartdisease Atrial fibrillationSmokingDrinkingLaboratorydataHaemoglobinA1c/%76（68.5）24（21.6）77（69.4）19（17.1）18（16.2）46（41.4）27（24.3）5.8（5.4,6.3）84（82.4）36（35.3）64（62.7）27（26.5）33（32.4）36（35.3）16（15.7）5.8（5.4,6.4）12.7（9.7,18.3）Homocysteine/（μmol·L-1）12.1（8.7,16.0）StrokeevaluationNIHSSscores/score4（2,10）9（4,15）①Onsettothrombolytictime/min147（105,187）182（143,210）Thrombectomy/n（%）TOASTsubtypes/n（%）Large-arteryatherosclerosisSmall-vesselocclusionCardioembolismOtherdetermined/undetermined11（9.9）15（14.7）45（40.5）33（29.7）15（13.5）18（16.2）40（39.2）21（20.6）25（24.5）16（15.7）0.0001.0000.0260.0330.3150.1330.0060.3990.1270.5320.0770.0000.0000.3030.1570.0750.9470.6450.1990.3760.1500.0000.1910.0330.9640.8520.0000.2440.0000.00064（57,78）112（61.9）73（64,83）20（62.5）137（75.7）54（29.8）122（67.4）36（19.6）34（18.8）73（40.3）41（22.7）23（71.9）6（18.8）19（59.4）10（31.3）17（53.1）9（28.1）2（6.3）5.8（5.3,6.3）5.8（5.5,6.3）12.4（9.0,16.6）11.6（9.9,17.3）5（3,12）13（7,17）158（119,207）155（115,179）13（7.2）13（40.6）71（39.2）54（49.8）25（13.8）31（17.1）14（43.8）0（0）15（46.9）3（9.4）2.2单因素分析fT3和脑卒中严重程度的关系探讨游离三碘甲腺原氨酸（freetriiodothyronine，fT3）与脑卒中严重程度之间的关系，见图1。结果发现其与溶栓前NHISS评分存在相关性（r=-0.291，P=0.000）。根据NIHSS评分评估脑卒中严重程度，轻度脑卒中112例，中重度脑卒中101例。中重度组患者的fT3水平低于轻度组[2.59（2.40，2.79）vs2.75（2.58，3.07），P=0.000]。Note:①P=0.000,comparedwithmildstroke.图1fT3水平在不同脑卒中严重程度组别之间的比较Fig1ComparisonoffT3levelsofdifferentstrokeseverity上海交通大学学报（医学版）2020,40(4)JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)Vol.40No.4Apr.2020徐婧涵，等 甲状腺相关激素及抗体与缺血性脑卒中患者静脉溶栓的预后相关性研究4812.3单因素分析TSH、fT3、fT4、tT3、tT4和甲状腺抗体与预后的关系对TSH、fT3、游离甲状腺素（freethyroxine，fT4）、总三碘甲腺原氨酸（totaltriiodothyronine，tT3）、总甲状腺素（totalthyroxine，tT4）、甲状腺抗体进行单因素分析，比较其在各预后类别（功能预后和颅内出血）的差异。3个月后比较，预后不良的患者，fT3和tT3较低（P=0.000，P=0.028），fT4较高（P=0.000）;发生颅内出血的患者fT3较低（P=0.008），fT4较高（P=0.014）。在每个预后类别中的TSH、tT4以及甲状腺抗体，差异均无统计学意义（表2）。fT3水平在预后良好组与预后不良组的组间差异有统计学意义[2.62（2.39，2.77）vs.2.75（2.58，3.08）;P=0.000]，结果见表2、图2。表2甲状腺相关激素及抗体与预后的关系Tab2Therelationshipbetweenthyroid-relatedhormonesandantibodiesandprognosisIndicatorPoorprognosisICHYes（n=102）No（n=111）PvalveYes（n=32）No（n=181）PvalveTSH/（μU·mL-1）0.94（0.61,1.60）1.22（0.64,2.03）tT3/（ng·mL-1）0.79（0.64,0.90）0.87（0.69,0.98）fT3/（pg·mL-1）2.62（2.39,2.77）2.75（2.58,3.08）tT4/（μg·dL-1）8.47（7.20,9.69）8.07（7.16,9.01）fT4/（ng·dL-1）0.99（0.84,1.11）0.87（0.81,0.97）TPOAb/（IU·mL-1）0.65（0.30,2.13）0.70（0.38,1.43）TGAb/（IU·mL-1）13.24（10.00,22.00）11.79（10.00,18.98）0.0890.0280.0000.1210.0000.8140.1710.92（0.54,1.58）1.06（0.67,1.81）0.78（0.58,0.93）0.83（0.68,0.95）2.52（2.41,2.70）2.71（2.53,2.98）8.29（7.02,9.11）8.09（7.26,9.22）1.00（0.86,1.15）0.90（0.82,1.02）0.65（0.33,1.85）0.70（0.30,1.70）11.87（10.00,27.00）12.09（10.00,20.29）0.1970.1980.0080.9120.0140.7800.864Note:①P=0.000,comparedwithgoodprognosisgroup.图2fT3水平与脑卒中不同功能结局的比较Fig2ComparisonoffT3levelsindifferentfunctionaloutcomesofstroke2.4多因素分析fT3、fT4、tT3与预后的关系在对混杂因素进行校正后，发现fT3仍是溶栓治疗缺血性脑卒中患者不良功能预后的独立预测因子（OR=0.35，95%CI0.138~0.890，P=0.027），tT3，fT4与功能预后无关;fT3、fT4均与颅内出血无关，结果见表3。表3多因素分析fT3、fT4、tT3与脑卒中预后的关系Tab3MultivariateanalysisoftherelationshipbetweenfT3,fT4,tT3andtheprognosisofstrokeIndicatorfT3/（pg·mL-1）fT4/（ng·dL-1）tT3/（ng·mL-1）PoorprognosisICHOR（95%CI）0.350（0.138-0.890）0.998（0.697-1.428）0.672（0.124-3.650）Pvalue0.0270.9900.646OR（95%CI）0.737（0.212-2.567）0.817（0.417-1.601）-Pvalue0.6320.555-http://xuebao.shsmu.edu.cn上海交通大学学报（医学版），2020，40(4)4823讨论研究发现，fT3与接受静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者脑卒中严重程度和功能预后相关，与颅内出血无关。在校正潜在混杂因素后，低fT3是功能预后的独立危险因素。此外，TSH、tT3、fT4、tT4、甲状腺激素抗体与功能预后和颅内出血均无关。既往一些研究[10-11]已经证实脑卒中后数小时内，血清T3水平下降，且变化幅度与脑卒中的严重程度相关。有研究[12]探索了血清T3浓度与脑卒中严重程度的放射学标志物之间的关系，发现较低的T3浓度与较大的脑卒中体积和局灶性脑水肿等有关。在1项临床试验的研究[13]中，使用甲状腺素抑制低T3综合征，减轻了缺血性脑卒中急性期的神经功能损害程度。同样，在本研究中，缺血性脑卒中患者经静脉溶栓治疗后，低fT3水平仍然反映了更大程度的脑卒中神经功能损害。然而，是否应对静脉溶栓伴有低T3的患者进行激素治疗，目前尚缺乏证据。在以往的研究[14-15]中，认为急性脑血管事件阶段低fT3水平与死亡率以及不良功能结局有关。另有研究[16]支持tT3而不是fT3，作为缺血性脑卒中患者功能结果的独立预测因子。还有研究[17]认为，甲状腺抗体水平越高，缺血性脑卒中患者预后越差。然而，关于甲状腺激素及抗体对缺血性脑卒中溶栓治疗的研究比较罕见，其关系尚不清楚。目前，仅有1项涉及缺血性脑卒中溶栓治疗的研究[18]和1项小样本研究[19]提出，经静脉rtPA治疗的缺血性脑卒中患者，入院时fT3水平低与症状性出血和3个月时预后不良是独立相关的。在本研究中，同时对fT3、tT3、fT4、tT4、TSH、甲状腺相关抗体与功能预后的关系进行了分析。在单变量分析中，较低的fT3、tT3、fT4浓度与3个月的功能不良和颅内出血相关;然而，在包括脑卒中严重程度、年龄、脑卒中危险因素、溶栓时间窗在内的多变量分析中，仅较低的fT3浓度与功能结局相关，所有甲状腺相关激素均与颅内出血无关。与前2项研究结果并不一致，可能和不同脑卒中中心选择的人群不同、患者的溶栓时间窗不同，以及本研究中对颅内出血人群的定义不同等因素有关。总之，对于接受静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者，较低的fT3水平提示潜在的不良功能结局。因此，对这部分患者的神经功能变化应进行更密切的监测，必要时在发病24h内可考虑启动更积极的动脉取栓等血管内介入治疗。许多机制可以解释接受静脉溶栓治疗的缺血性脑卒中患者预后较差和血清fT3水平低之间的关系。首先，甲状腺激素在减少继发性脑损伤方面有潜在的作用。一些体外研究[20]报道T3通过刺激神经元和胶质细胞脂肪酸氧化，抑制细胞凋亡，抑制谷氨酸毒性。另有研究[21]发现，注射T3的小鼠缺血性脑卒中模型中组织梗死和水肿明显减少。其次，甲状腺激素在脑卒中后内源性脑修复方面发挥着重要作用。众所周知，T3对于新生神经元的产生、成熟和轴索髓鞘形成尤为重要[22]。有研究[23]提出，外源性T3和T4可提高脑缺血再灌注大鼠脑源性神经营养因子和胶质细胞源性神经营养因子的浓度。因此，我们推测fT3水平较低的患者在缺血性脑卒中后神经保护功能下降，继发性脑损伤增加，自我修复功能下降，导致预后较差。因此，我们认为fT3可以作为静脉溶栓治疗缺血性脑卒中患者预后的一个有价值的预测因子，即低fT3会增加患者出现功能预后不良的风险，低fT3水平与较重的脑卒中严重程度相关。本研究亦有其局限性。首先，本研究为单中心回顾性研究，样本量有限;其次，没有对甲状腺激素水平进行动态监测，并且甲状腺激素水平可能受到脑卒中严重程度的影响。未来我们将进行多中心前瞻性队列研究来进一步探索。参·考·文·献[1][2][3][4][5]GBDStrokeCollaborators.Global,regional,andnationalburdenofstroke,1990-2016:asystematicanalysisfortheGlobalBurdenofDiseaseStudy2016[J].LancetNeurol,2019,18(5):439-458.LiuLP,WangD,WongKS,etal.StrokeandstrokecareinChina:hugeburden,significantworkload,andanationalpriority[J].Stroke,2011,42(12):3651-3654.PowersWJ,RabinsteinAA,AckersonT,etal.2018guidelinesfortheearlymanagementofpatientswithacuteischemicstroke:aguidelineforhealthcareprofessionalsfromtheAmericanheartassociation/Americanstrokeassociation[J].Stroke,2018,49(3):e46-e110.BaiMF,GaoCY,YangCK,etal.Effectsofthyroiddysfunctionontheseverityofcoronaryarterylesionsanditsprognosis[J].JCardiol,2014,64(6):496-500.DelpontB,Aboa-EbouléC,DurierJ,etal.Associationsbetweenthyroidstimulatinghormonelevelsandbothseverityandearlyoutcomeofpatientswith[6][7][8][9]ischemicstroke[J].EurNeurol,2016,76(3-4):125-131.AkhoundiFH,GhorbaniA,SoltaniA,etal.Favorablefunctionaloutcomesinacuteischemicstrokepatientswithsubclinicalhypothyroidism[J].Neurology,2011,77(4):349-354.FortiP,MaioliF,CoveriM,etal.Thyroidfunctiontestsandearlyoutcomesofacuteischemicstrokeinoldereuthyroidpatients[J].ExpGerontol,2015,61:8-14.BuneviciusA,KazlauskasH,RaskauskieneN,etal.IschemicstrokefunctionaloutcomesareindependentlyassociatedwithC-reactiveproteinconcentrationsandcognitiveoutcomeswithtriiodothyronineconcentrations:apilotstudy[J].Endocrine,2014,45(2):213-220.中华医学会神经病学分会,中华医学会神经病学分会脑血管病学组.中国脑血管病一级预防指南2015[J].中华神经科杂志,2015,48(8):629-643.上海交通大学学报（医学版）2020,40(4)JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)Vol.40No.4Apr.2020徐婧涵，等 甲状腺相关激素及抗体与缺血性脑卒中患者静脉溶栓的预后相关性研究483[10]WartofskyL,BurmanKD.Alterationsinthyroidfunctioninpatientswithsystemicillness:the“euthyroidsicksyndrome”[J].EndocrRev,1982,3(2):164-217.[11]AlevizakiM,SynetouM,XynosK,etal.Lowtriiodothyronine:astrongpredictorofoutcomeinacutestrokepatients[J].EurJClinInvest,2007,37(8):651-657.[12]AmbrosiusW,KazmierskiR,GuptaV,etal.Lowfreetriiodothyroninelevelsarerelatedtopoorprognosisinacuteischemicstroke[J].And,2011,119(3):139-143.[13]SkvortsovaVI,PlatonovaIA,ShamalovNA,etal.Clinicalandimmunobiochemicalstudyofefficacyandstress-protectivepropertiesofthyroliberinattheacutestageofcarotidischemicstroke[J].ZhNevrolPsikhiatrImSSKorsakova,2006,Suppl(16):51-59.[14]BuneviciusA,IervasiG,BuneviciusR.Neuroprotectiveactionsofthyroidhormonesandlow-T3syndromeasabiomarkerinacutecerebrovasculardisorders[J].ExpertRevNeurother,2015,15(3):315-326.[15]WangYP,ZhouSJ,BaoJH,etal.LowT3levelsasapredictormarkerpredicttheprognosisofpatientswithacuteischemicstroke[J].IntJNeurosci,2017,127(7):559-566.[16]XuXY,LiWY,HuXY.Alterationofthyroid-relatedhormoneswithinnormalRangesandearlyfunctionaloutcomesinpatientswithacuteischemicstroke[J].IntJEndocrinol,2016,2016:3470490.[17]ChoHJ,KimSS,SungSM,etal.Impactofthyroidautoantibodiesonfunctionaloutcomeinpatientswithacuteischemicstroke[J].JStrokeCerebrovascDis,2014,23(7):1915-1920.[18]QiuMJ,FangM,LiuXY.Lowfreetriiodothyroninelevelspredictsymptomaticintracranialhemorrhageandworseshort-termoutcomeofthrombolysisinpatientswithacuteischemiastroke[J].Medicine(Baltimore),2017,96(45):e8539.[19]LiuJF,WangDR,XiongY,etal.Lowfreetriiodothyroninelevelsarerelatedtosymptomaticintracranialhemorrhageandpoorfunctionaloutcomesafterintravenousthrombolysisinacuteischemicstrokepatients[J].NeurolRes,2016,38(5):429-433.[20]SayreNL,SifuentesM,HolsteinD,etal.Stimulationofastrocytefattyacidoxidationbythyroidhormoneisprotectiveagainstischemicstroke-induceddamage[J].JCerebBloodFlowMetab,2017,37(2):514-527.[21]SadanaP,CoughlinL,BurkeJ,etal.Anti-edemaactionofthyroidhormoneinMCAOmodelofischemicbrainstroke:PossibleassociationwithAQP4modulation[J].JNeurolSci,2015,354(1-2):37-45.[22]LemkineGF,RajA,AlfamaG,etal.Adultneuralstemcellcyclinginvivorequiresthyroidhormoneanditsalphareceptor[J].FASEBJ,2005,19(7):863-865.[23]MokhtariT,AkbariM,MalekF,etal.ImprovementofmemoryandlearningbyintracerebroventricularmicroinjectionofT3inratmodelofischemicbrainstrokemediatedbyupregulationofBDNFandGDNFinCA1hippocampalregion[J].Daru,2017,25(1):4.[收稿日期]2019-08-16[本文编辑]徐敏抗疫小知识新型冠状病毒肺炎鉴别诊断新型冠状病毒感染轻型表现需与其他病毒引起的上呼吸道感染相鉴别。主要与流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等其他已知病毒性肺炎及肺炎支原体感染鉴别，尤其是对疑似病例要尽可能采取包括快速抗原检测和多重PCR核酸检测等方法，对常见呼吸道病原体进行检测。此外，还要与非感染性疾病，如血管炎、皮肌炎和机化性肺炎等鉴别。--摘自《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》http://xuebao.shsmu.edu.cn上海交通大学学报（医学版），2020，40(4)
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两种慢性应激对ICR小鼠抑郁样行为表现及海马中FGF2-FGF9含量的影响
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针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶的影响
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穿刺引流治疗幕上脑出血：引流管位置的影响
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农村12148名绝经后妇女宫颈癌筛查结果分析
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