新型芹菜素纳米脂质体对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响
【摘要】 目的观察新型芹菜素纳米脂质体对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡水平的影响ꎮ方法采用薄膜水合结合超声分散技术制备新型芹菜素纳米脂质体并进行质量考察ꎮ将健康雄性SD大鼠60只ꎬ随机分成正常对照组、模型对照组、空白脂质体组及芹菜素脂质体组ꎬ每组15只ꎮ采用大鼠腹腔注射链脲佐菌素(70mgkg-1)建立糖尿病模型ꎬ2周后ꎬ芹菜素脂质体组尾静脉给予芹菜素纳米脂质体30μgkg-1ꎬ空白脂质体组尾静脉给予等剂量空白纳米脂质体ꎬ模型对照组及正常对照组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液ꎮ12周之后处死大鼠ꎬ取出心肌组织ꎬ分别采用TUNEL凋亡染色测定大鼠心肌细胞凋亡指数ꎬWesternblotting分析各组大鼠心肌Bax及Bcl~2蛋白表达ꎮ结果TUNEL凋亡染色显示ꎬ与正常对照组比较ꎬ模型对照组及空白脂质体组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.05)ꎻ芹菜素脂质体组凋亡指数显著下降(P<0.05)ꎮWesternblotting分析显示ꎬ与正常对照组比较ꎬ模型对照组及空白脂质体组大鼠心肌细胞Bax含量显著升高(P<0.01)ꎬBcl~2含量显著下降(P<0.01)ꎻ与模型对照组及空白纳米脂质体组比较ꎬ芹菜素脂质体组心肌细胞Bax含量显著下降(P<0.01)ꎬBcl~2含量显著升高(P<0.01)ꎮ结论芹菜素纳米脂质体能够通过调节细胞凋亡相关蛋白Bcl~2/Bax途径ꎬ降低糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡水平ꎮ关键词芹菜素ꎻ纳米脂质体ꎻ细胞凋亡ꎻ心肌病ꎬ糖尿病文献标识码A中图分类号R282.71ꎻR285.5DOI10.3870/j.issn.1004~0781.2019.05.004开放科学(资源服务)标识码(OSID)文章编号1004-0781(2019)05-0555-05DiabeticCardiomyopathyEffectofApigenin~loadedNanoliposomesonMyocardialCellsApoptosisInducedbyZHANGYadan(DepartmentofPharmacyꎬNingboCityMedicalTreatmentCenterLihuiliHospitalꎬNingbo315040ꎬChina)ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectofapigenin~loadednanoliposomesonmyocardialcellsapoptosisinducedbydiabeticcardiomyopathy.MethodsTheapigenin~loadednanoliposomeswerepreparedbyfilmhydrationandultrasonicdispersiontechnologyandtheirqualityinspectionswerealsoinvestigated.SixtySDratswererandomlydividedintonormalcontrolgroupꎬmodelcontrolgroupꎬblankandapigenin~loadednano~liposomesgroup.RatmodeloftypeⅠdiabeteswasinducedbysingleintraperitonealinjectionofSTZ.AftertwoweeksofSTZinjectionꎬthemodelratswereusedforthisstudy.Theratsofapigeninloadednano~liposomestreatmentgroupweretreatedwithapigeninloadednano~liposomesviacaudalveinadministrationfor12weeks(threetimesaweek).Andtheratsofnormalcontrolgroupandmodelcontrolgroupwereadministratedequivalentvolumeof0.9%sodiumchloridesolution.Aftertreatmentfor12weeksꎬtheexperimentalanimalsweresacrificedandtheirheartswereharvestedafter0.9%sodiumchloridesolutionperfusion.ThemyocardialcellapoptosisindexwasdetectedbyTUNELstainingandtheexpressionsofBcl~2andBaxꎬwhichwererelatedtothecellapoptosisꎬwereexaminedbyWesternblottinganalysis.ResultsTUNELstainingshowedtheapoptosisindexintheratsofdiabetesandblanknano~liposomesgroupsweresignificanthigherthanthenormalcontrolgroup(P<0.05).Howeverꎬtherewassignificantdecreaseofapoptosisindexinthediabetesratsafterthetreatmentofapigeninloadednano~lipsomes(P<0.05).MoreoverꎬWesternblottinganalysisconfirmedthattherewassignificantlowerexpressionofBcl~2andhigherexpressionofBaxintheheartsofmodelcontrolgroupandblanknano~liposomestreatedratscomparedwithnormalcontrolrats(P<0.01).Comparedwiththediabetesandblanknano~liposomesgroupꎬtheapigeninloadednano~liposomestreatedgroupsshowedhigherexpressionofanti~apoptosisproteinBcl~2(P<0.01)andlowerexpressionofpro~apoptosisproteinBax(P<0.01).ConclusionApigeninloadednano~liposomeshavereducedtheapoptosisofmyocardialcellsindiabeticcardiomyopathyratsviatheBcl~2/Baxpathway.KEYWORDSApigeninꎻNanoliposomesꎻCellsapoptosisꎻCardiomyopathyꎬdiabetic糖尿病已经成为危害人类健康的重大疾病之一[1~2]ꎮ糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathyꎬDCM)是糖尿病患者心肌细胞原发性损伤引起的心脏结构以及功能的障碍ꎬ已经成为患者致死的主要原因[3]ꎮ糖655尿病引起的高血糖、高脂血症可以造成心肌细胞凋亡ꎬ是DCM的主要病理特征之一ꎬ可进一步引起左心室功能紊乱以及心肌细胞纤维化[4]ꎮ研究显示ꎬ芹菜素能够显著降低糖尿病动物血糖及血脂水平ꎬ是潜在的防治DCM的药物[5]ꎮ然而ꎬ由于其存在溶解性低、在体应用难吸收等问题限制了临床应用[6]ꎮ脂质体是一种新型的被动靶向药物递送载体ꎬ应用脂质体包载难溶性药物ꎬ能够提高药物溶解度ꎬ同时促进药物的细胞膜渗透性ꎬ增加药物的吸收[7~8]ꎬ从而实现难溶性药物在体临床应用ꎮ笔者制备新型纳米脂质体包载难溶性药物芹菜素ꎬ考察其对于DCM大鼠心肌细胞凋亡的预防作用及相关机制ꎮ1材料与方法1.1实验动物健康雄性SD大鼠60只ꎬ体质量为180~220gꎬ清洁级ꎬ由温州医科大学实验动物中心购自上海斯莱克实验动物有限公司ꎮ实验动物使用许可证号:SYXK(浙)2015~0001ꎬ合格证号:wydw2013~0050ꎬ饲养条件符合实验动物管理与使用指南ꎮ1.2主要试剂芹菜素(Sigma~Aldrich公司ꎬ含量≥99%ꎬCAS号:520~36~5)ꎬ注射级蛋黄卵磷脂(上海艾韦特医药科技有限公司ꎬCAS号:93685~90~6)ꎬ戊巴比妥钠(Sigma~Aldrich公司ꎬCAS号:57~33~0)ꎬ链脲佐菌素(Sigma~Aldrich公司ꎬCAS号:18883~66~4)ꎬTUNEL凋亡试剂盒(RocheAppliedScienceꎬ批号:11684795910)ꎬBcl~2蛋白(SantaCruzBiotechnologyꎬ批号:sc~71957)以及Bax一抗(SantaCruzBiotechnologyꎬ批号:sc~70407)ꎬ辣根过氧化酶标记羊抗兔二抗(SantaCruzBiotechnologyꎬ批号:sc~2004)ꎬ血糖试纸(德国罗氏活力型血糖仪专用试纸ꎬ批号:Accu~ChekPerformateststrips)ꎮ1.3芹菜素纳米脂质体的制备及其性质考察参考JIN等[9]介绍的方法制备新型芹菜素纳米脂质体:芹菜素1mgꎬ蛋黄卵磷脂10mgꎬ加入到处方量无水乙醇中完全溶解ꎬ将上述溶液在真空条件下旋转蒸发乙醇ꎬ形成载药脂质薄膜ꎬ然后加入适量纯化水水化12hꎬ形成胶体溶液ꎮ将上述胶体溶液在室温(25℃)及高压(73.5MPa)条件下ꎬ超声分散15s(循环3次)ꎬ制备芹菜素纳米脂质体ꎮ应用上述方法同时制备空白纳米脂质体ꎮ采用扫描电子显微镜考察载药脂质体表观形态ꎬ收稿日期2018-01-22修回日期2018-05-23作者简介章雅丹(1986-)ꎬ女ꎬ浙江宁波人ꎬ主管药师ꎬ学士ꎬ研究方向:医院药学及药剂学ꎮORCID:0000~0003~0459~788Xꎮ电话:0574-87018762ꎬE~mail:2234446854@qq.comꎮHeraldofMedicineVol38No5May2019同时应用动态光衍射法测定载药及空白脂质体的粒径和Zeta电位分布ꎮ包封率测定:将上述制备载药脂质体溶液放入透析袋(截留相对分子质量10000~12000)ꎬ室温透析2hꎬ除去未包封药物及他制备辅料ꎮ然后甲醇破坏脂质体ꎬ应用高效液相色谱(HPLC)法测定载药脂质体中药物含量ꎮ载体包封率(%)=载药脂质体中药物含量/最开始加入药物×100%ꎮ1.4糖尿病实验动物模型建立及给药方法采用随机数字表法将60只大鼠分为正常对照组、模型对照组、空白脂质体组、芹菜素脂质体组ꎬ每组15只ꎮ饲养1周后ꎬ参考ZHAO等[10]介绍的方法建立大鼠1型糖尿病模型ꎬ腹腔注射1%链脲佐菌素(70mgkg-1)ꎬ正常对照组腹腔注射同剂量0.9%氯化钠溶液ꎮ于注射后第3天、第7天以及第14天尾静脉取血测定血糖ꎮ3次测定结果均大于16.7mmolL-1且实验动物明显出现多饮、多食、多尿以及体质量下降等现象即说明造模成功ꎮ此后芹菜素脂质体组尾静脉给予芹菜素纳米脂质体(30μgkg-1)ꎬ空白脂质体组尾静脉给予等剂量空白纳米脂质体ꎬ每周3次ꎬ持续给药12周ꎮ模型对照组以及正常对照组每周尾静脉给予同剂量0.9%氯化钠溶液ꎮ12周之后处死大鼠ꎬ迅速开胸ꎬ取出心脏ꎬ在左心室中部沿横轴切取厚度为0.5cm的心肌组织ꎬ放置在4%多聚甲醛中ꎬ剩余心肌细胞-80℃保存ꎮ1.5心肌细胞TUNEL染色按照罗氏TUNEL凋亡试剂盒说明书ꎬ将组织切片脱蜡、乙醇梯度浸洗ꎬProteinaseK工作液透化ꎬ在切片上加TUENEL反应液ꎬ盖膜ꎬ37℃孵育60minꎬ磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次ꎬDAB室温显色10minꎬPBS冲洗3次ꎬ每次5minꎬ乙醇梯度脱水、透明和封片ꎬ于光镜下观察ꎬ每只大鼠做切片3张ꎬ每张切片随机计数无重叠、具有代表性的5个400倍视野ꎬ以平均每100个细胞核中含凋亡细胞的数量作为心肌细胞凋亡指数(apoptosisindexꎬAI)ꎮ1.6Westernblotting检测将组织从-80℃冰箱中取出ꎬ在裂解缓冲液中匀浆ꎬ4℃离心ꎬ取上清液ꎬ高速离心ꎬ沉淀用TritonX~100缓冲液1mL溶解ꎬ二喹啉甲酸试剂盒测定蛋白浓度备用ꎮ每组按20μg蛋白的溶液体积上样ꎬ进行聚丙烯酰胺凝胶电泳ꎬ电压设为90Vꎬ根据Maker移动情况适时终止电泳ꎮ进行转膜ꎬ封闭ꎬ洗膜ꎬ加入15000稀释的Bax以及Bcl~2一抗ꎬ4℃孵育过夜ꎮTBST洗膜3次ꎬ加二抗室温孵育1hꎮ以β~actin为参照ꎬDAB医药导报2019年5月第38卷第5期显色后应用凝胶成像分析仪分析ꎮ1.7统计学方法采用SPSS18.0版统计软件进行分析ꎮ正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示ꎬ多组间均数比较采用单因素方差分析ꎬ组间两两比较采用LSD~t检验ꎮ以P<0.05为差异有统计学意义ꎮ2结果2.1芹菜素纳米脂质体的性状表征扫描电镜观察空白及载药纳米脂质体如图1所示ꎬ空白及载药纳米脂质体的形态圆整、分散性好、无粘连ꎮ动态光衍射法测定载药及空白脂质体的粒径和Zeta电位分布结果显示:空白及载药纳米脂质体的平均粒径分别(98.3±1.3)和(103.4±1.2)nmꎬ说明载药前后纳米脂质体的粒径无明显变化ꎮ同时空白及载药纳米脂质体的多分散系数(polydispersityindexꎬPDI)分别为0.102和0.108ꎬ均<0.2ꎬ说明载药及空白纳米脂质体稳定性好ꎬ粘连少ꎮZeta电位测定结果显示:空白及载药纳米脂质体的Zeta电位分别为(-23.8±1.6)和(19.8±1.3)mVꎬ绝对值均大于15mVꎮ包封率是评价纳米载体的重要质量指标ꎬ本次研究制备的纳米脂质体的包封率测定结果为(93.42±3.41)%ꎬ说明新型纳米脂质体能够较好地实现对于芹菜素的包载ꎮ2.2心肌细胞TUNEL凋亡染色结果各组实验大鼠TUNEL染色结果见图2所示:正常心肌细胞核呈蓝色ꎬ755凋亡细胞核呈棕褐色ꎬ箭头所示为凋亡心肌细胞的细胞核ꎮ与正常对照组比较ꎬ模型对照组大鼠及空白脂质体干预组12周之后心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.05)ꎮ与模型对照组及空白脂质体组比较ꎬ经过连续12周芹菜素脂质体治疗的实验大鼠心肌细胞凋亡水平显著下降(P<0.05)ꎮA.空白纳米脂质体ꎻB.芹菜素纳米脂质体图1空白及载药纳米脂质体电镜图A.blanknanoliposomesꎻB.apigenin~loadednanoliposomesFig.1Blankanddrug~loadednanoliposomesobservedbyscanningelectronmicroscope2.3心肌细胞Westernblotting检测结果各实验组大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl~2及Bax的Westernblotting结果分析如图3所示ꎮ与正常对照组比较ꎬ糖白Bcl~2显著降低(P<0.01)ꎬBax显著升高(P<0.01)ꎮ尿病大鼠及空白纳米脂质体干预大鼠心肌凋亡相关蛋A.正常对照组ꎻB.模型对照组ꎻC.空白脂质体组ꎻD.芹菜素脂质体组ꎮ与正常对照组比较ꎬ∗1P<0.05ꎻ与芹菜素脂质体组比较ꎬ∗2P<0.05图24组大鼠心肌细胞凋亡情况(n=15)A.normalcontrolgroupꎻB.modelcontrolgroupꎻC.blanknanoliposomegroupꎻD.apigeninloadednanoliposomegroup.Comparedwithnormalcontrolgroupꎬ∗1P<0.05ꎻcomparedwithapigenin~loadednanoliposomegroupꎬ∗2P<0.05Fig.2Myocardialapoptosisinfourgroupsofrats(n=15)855nanoliposomeA.正常对照组ꎻB.模型对照组ꎻC.空白脂质体组ꎻD.芹菜素纳米脂质体组ꎮ与正常对照组比较ꎬ∗1P<0.01ꎻ与芹菜素脂质体组比较ꎬ∗2P<0.01groupꎻD.apigenin~loaded图34组大鼠心肌Bcl~2及Bax的表达情况(n=15)A.normalcontrolgroupꎻB.modelcontrolgroupꎻC.blanknanoliposomegroup.Comparedwithnormalcontrolgroupꎬ∗1P<0.01ꎻcomparedwithapigenin~loadednanoliposomegroupꎬ∗2P<0.01Fig.3ExpressionofBcl~2andBaxinmyocardiuminfourgroupsofrats(n=15)与模型对照组大鼠及空白纳米脂质体组比较ꎬ芹菜素纳米脂质体治疗组的心肌Bcl~2含量显著升高(P<0.01)ꎬBax含量显著降低(P<0.01)ꎮ3讨论糖尿病引起的高血糖能够通过氧化应激损伤及Bax途径等诱导患者心肌细胞凋亡ꎬ加重DCM的进程[11~12]ꎬ最终导致患者死亡ꎮ芹菜素是一种天然的抗氧化剂[13]ꎬ能够改善脂肪肝患者的血脂异常以及肥胖型糖尿病动物的的胰岛素抵抗ꎬ降低其血糖水平[14]ꎮ同时芹菜素还能够显著降低缺血~再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡水平[15]ꎮ然而芹菜素存在溶解度低及在体吸收差等生物药动学参数缺陷ꎬ限制了其临床应用ꎮ载体质量考察结果显示ꎬ空白及载药纳米脂质体的形态圆整ꎬ载药前后形态无明显变化ꎮ多分散系数PDI均小于0.2ꎬ说明本次实验制备的载药纳米脂质体分散性好ꎬ粘连少ꎮ粒径分析及Zeta电位测定显示ꎬ载药及空白纳米脂质体的粒径接近100nmꎬZeta电位绝对值均大于15ꎬ说明载药及空白纳米脂质体的稳定模型对照组大鼠及空白纳米脂质体组大鼠的心肌细胞蛋白家族在各类刺激信号引起的凋亡中起到关键作HeraldofMedicineVol38No5May2019性好[16]ꎮ另外包封率测定结果显示:芹菜素纳米脂质体的包封率高ꎬ说明采用薄膜水合结合超声分散法能够较好地实现对于芹菜素的包载ꎮ12周之后模型对照组大鼠及空白脂质体干预大鼠心肌细胞的凋亡指数显著高于正常对照组(P<0.05)ꎬ说明各组大鼠DCM动物模型成功ꎬ其心肌细胞出现明显凋亡ꎮ而经过芹菜素纳米脂质体持续干预12周之后的糖尿病大鼠心肌细胞凋亡指数显著低于模型对照组大鼠(P<0.05)ꎬ接近正常水平ꎬ说明芹菜素脂质体能够有效降低DCM引起心肌凋亡ꎮ另外ꎬ本次实验研究还初步考察了芹菜素纳米脂质体对于降低DCM大鼠心肌细胞凋亡水平的作用机制ꎮ研究表明ꎬ在目前已知的凋亡调节蛋白中ꎬBcl~2用ꎮBcl~2和Bax蛋白水平的高低与凋亡调控直接相关ꎬBax升高ꎬ促进细胞凋亡ꎻBcl~2增高ꎬ抑制细胞凋亡[17]ꎮ本次研究应用Westernblotting技术检测了各组大鼠心肌细胞Bcl~2及Bax的蛋白含量ꎮ结果显示ꎬ凋亡相关蛋白Bax含量显著提高(P<0.01)ꎬ抗凋亡相关蛋白Bcl~2含量显著降低(P<0.01)ꎻ与糖尿病及空白纳米脂质体组大鼠比较ꎬ经过剂量芹菜素纳米脂质体干预后的糖尿病大鼠心肌细胞Bcl~2含显著升高(P<0.01)ꎬ而Bax含量显著下降(P<0.01)ꎬ说明芹菜素纳米脂质体可能通过调节Bcl~2/Bax途径降低DCM大鼠的心肌细胞凋亡水平ꎮ尿病引起的大鼠心肌细胞凋亡ꎬ为临床DCM患者的防治提供了一种新的思路ꎮ[1]SHAWJEꎬSICREERAꎬZIMMETPZ.Globalestimatesoftheprevalenceofdiabetesfor2010and2030[J].DiabetResClinPractꎬ2010ꎬ87(1):4-14.[2]ZIMMETPꎬALBERTIKGꎬSHAWJ.Globalandsocietalimplicationsofthediabetesepidemic[J].Natureꎬ2001ꎬ414(6865):782-787.cardiovascularriskfactors:theFraminghamstudy[J].Circulationꎬ1979ꎬ59(1):8-13.cardiomyopathy[4]CAILꎬKANGYJ.Celldeathanddiabetic[J].CardiovascToxicolꎬ2003ꎬ3(3):219-228.[5]刘俊法.芹菜素对糖尿病大鼠降血糖、调节血脂和抗氧化能力的影响[J].中药药理与临床ꎬ2014ꎬ5(1):44-47.[6]ZHANGJꎬLIUDꎬHUANGYꎬetal.Biopharmaceuticsclass~ificationandintestinalabsorptionstudyofapigenin[J].IntJPharmacꎬ2012ꎬ436(1/2):311-317.[3]KANNELWBꎬMCGEEDL.Diabetesand本实验证实了芹菜素纳米脂质体能够有效抑制糖参考文献offoralphainterferon[8]JORAHOLMENMWꎬBASNETPꎬACHARYAGꎬet医药导报2019年5月第38卷第5期[7]CASTOLDIAꎬHERRCꎬNIEDERSTRASSERJꎬal.ettreatmentoflocalliposomesCalcifediol~loadedJPharmacinfections[J].EurpulmonarybacterialBiopharmaceuticsꎬ2017ꎬ118(1):62-67.al.therapyimprovePEGylatedliposomesfortopicalvaginalJPharmacdelivery[J].EurBiopharmaceuticsꎬ2017ꎬ113(1):132-139.[9]JINXꎬYANGQꎬZHANGY.SynergisticapoptoticeffectsofapigeninTPGSliposomesandtyroservatide:implicationsforeffectivetreatmentoflungcancer[J].IntJNanomedicineꎬ2017ꎬ12(5):109-118.[10]ZHAOYZꎬZHANGMꎬWONGHLꎬetal.PreventdiabeticcardiomyopathyindiabeticratsbycombinedtherapyofaFGF~loadedultrasound~targetedmicrobubbledestructiontechnique[J].JControlRelSocꎬ2016ꎬ223(1):11-21.inducedapoptosisinmousemyocardium:mitochondrialcytochromeC~mediatedcaspase~3activationpathway[J].Diabetesꎬ2002ꎬ51(6):1938-1948.[11]CAILꎬLIWꎬWANGGꎬetal.Hyperglycemia~[12]ZOUMHꎬXIEZ.Regulationofinterplaybetweenauto~nanoparticlesand[14]JUNGUJꎬCHOYYꎬCHOIMS.Apigenin955phagyandapoptosisinthediabeticheart:newroleofAMPK[J].Autophagyꎬ2013ꎬ9(4):624-625.[13]LEFORTECꎬBLAYJ.Apigeninanditsimpactongastro~intestinalcancers[J].MolecularNutritFoodResꎬ2013ꎬ57(1):126-144.amelioratesdyslipidemiaꎬhepaticsteatosisandinsulinresistancebymodulatingmetabolicandtranscriptionalprofilesintheliverofhigh~fatdiet~inducedobesemice[J].Nutrientsꎬ2016ꎬ8(5):E305.[15]HUJꎬLIZꎬXULTꎬetal.Protectiveeffectofapigeninonischemia/reperfusioninjuryoftheisolatedratheart[J].CardiovasToxicolꎬ2015ꎬ15(3):241-249.Using[16]ZHAOYZꎬZHANGMꎬTIANXQꎬetal.basicfibroblastnanoliposomecombinedwithultrasound~introducedtechnologytoearlyintervenethediabeticcardiomyopathy[J].IntJNanomedicꎬ2016ꎬ11(4):675-686.[17]XIEZꎬKOYAMATꎬSUZUKIJꎬetal.Coronaryreperfusionfollowingischemia:differentexpressionofbcl~2andbaxproteinsꎬandcardiomyocyteapoptosis[J].JapanHeartJꎬ2001ꎬ42(6):759-770.growthfactor绿茶多酚对缺血~再灌注氧化损伤肾脏的保护作用曹智修ꎬ柳懿鹏ꎬ章传华ꎬ袁敬东(武汉市第一医院泌尿外科ꎬ武汉430022)摘要目的观察绿茶多酚对缺血~再灌注氧化损伤肾脏的保护作用ꎮ方法SPF级雄性成年SD大鼠30只ꎬ随机分为假手术组(Sham组)、缺血~再灌注组(I/R组)、绿茶多酚+缺血~再灌注组(I/R+G组)ꎬ每组10只ꎮSham组给予0.9%氯化钠溶液ꎻI/R组和I/R+G组分别给予0.9%氯化钠溶液60mgkg-1d-1和绿茶多酚60mgkg-1d-1灌胃ꎬ4周后行缺血~再灌注处理50minꎮ所有大鼠手术结束后1h取肾脏标本进行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肾损伤分子~1(KIM~1)和细胞凋亡检测ꎮ结果Sham组SOD和MDA分别为(510.67±16.91)Umg-1ꎬ(0.02±0.03)nmolmg-1ꎻI/R组SOD和MDA分别为(174.02±9.62)Umg-1ꎬ(4.10±0.09)nmolmg-1ꎻI/R+G组SOD和MDA分别为(439.17±8.27)Umg-1ꎬ(1.78±0.08)nmolmg-1ꎮSham组和I/R+G组SOD明显较I/R组高ꎬ而MDA明显较I/R组低ꎻSham组、I/R组和I/R+G组KIM~1表达评分分别为0.02±0.02ꎬ4.52±0.11ꎬ1.98±0.09ꎮI/R组KIM~1表达明显较Sham组和I/R+G组高(P<0.05)ꎻSham组、I/R组和I/R+G组凋亡指数分别为0.08±0.08ꎬ53.39±2.95ꎬ14.86±1.19ꎬSham组和I/R+G组凋亡指数明显较I/R组低(P<0.05)ꎮ结论绿茶多酚对缺血~再灌注氧化损伤肾脏具有较好的保护作用ꎮ关键词绿茶多酚ꎻ肾脏ꎻ缺血~再灌注ꎻ保护作用中图分类号R282.71ꎻR285.5DOI10.3870/j.issn.1004~0781.2019.05.005文献标识码A文章编号1004-0781(2019)05-0559-04开放科学(资源服务)标识码(OSID)ProtectiveEffectofGreenTeaPolyphenolsonRenalIschemia/ReperfusionInjuryCAOZhixiuꎬLIUYipengꎬZHANGChuanhuaꎬYUANJingdong(DepartmentofUrologicSurgeryꎬWuhanNO.1HospitalꎬWuhan430022ꎬChina)ABSTRACTObjectiveToobservetheprotectiveeffectofgreenteapolyphenolsonischemia/reperfusioninjuryofratkidney.MethodsAtotal30maleSpragueDawleyratswererandomlydividedintoshamgroup(n=10)ꎬI/Rgroup(n=10)andI/R+Ggroup(n=10)ꎬrespectively.BothshamgroupandI/Rgroupweregavagedwith0.9%sodiumchloridesolution
