黑曲霉ZF-34脂肪酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达
【摘要】 为了使黑曲霉脂肪酶基因在毕赤酵母中表达并实现高密度发酵生产，采用PCR方法从黑曲霉基因组DNA中扩增出脂肪酶基因LipA，测序结果表明LipA基因编码区全长894bp，编码297个氨基酸，与其他黑曲霉脂肪酶基因列序相似性高达99%。将LipA基因连接到质粒pPIC9K上，构建了pPIC9K-LipA重组载体。将该重组载体转化到毕赤酵母GS115中，经甲醇诱导，该酶基因在酵母细胞中获得活性表达，并能将酶蛋白分泌到胞外。重组菌株GS115/pPIC9K-LipA经100L发酵罐发酵144h，菌体湿重高达100.5g/L，发酵液中酶活性达1950U/mL。
