抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠内质网应激CHOP通路的影响
【摘要】 目的:探究抗纤益心方对扩张型心肌病(Dilatedcardiomyopathy，DCM)大鼠内质网应激C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)通路的影响。方法:采用呋喃唑酮水溶液制备DCM模型大鼠，将大鼠分为模型组、抗纤益心方20、40、80mg生药/kg、卡维地洛10mg/kg组，另设正常对照组，超声检测心室功能变化;右颈总动脉插管检测血流动力学变化;对比全心脏以及左心室心重指数(HW/BW、LVM/BW);HE染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化;Tunel染色观察心肌细胞凋亡情况;免疫*基金项目:国家自然科学基金(课题编号:81573920)。作者简介:柴松波，医学博士，研究方向:中医药防治心血管内科疾病的基础及临床研究，邮箱:chaisongbo12@163.com。中药药理与临床;()2352019921印迹法检测大鼠心肌组织中钙网蛋白(CRT)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激酶R样内质网激酶(PERK)、转录激活因子4(ATF4)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组相比，模型组心肌组织病理半定量评分、LVEDD、LVESD升高，LVEF、SV、FS降低，LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmix降低，HW/BM、LVW/BM升高;心肌细胞大量坏死，间质水肿、纤维化，伴有炎性细胞浸润;心肌细胞凋亡率显著升高;CRT、GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达明显升高，Bcl-2蛋白表达明显降低。与模型组相比，抗纤益心方各组、卡维地洛组心肌组织病理半定量评分、LVEDD、LVESD显著降低，LVEF、SV、FS显著升高，+dp/dtmax、-dp/dtmix显著升高，LVEDP显著降低，HW/BM显著降低;心肌细胞坏死、纤维化程度减少，间质水肿、炎性细胞浸润均得到改善，心肌细胞凋亡率显著降低，GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高，抗纤益心方40、80mg/kg组、卡维地洛组LVDP显著升高，LVW/BM、CRT蛋白表达显著降低。结论:抗纤益心方能够改善DCM大鼠心室功能，缓解内质网应激引发的心肌细胞凋亡，其机制可能与下调CHOP通路相关。关键词抗纤益心方;扩张型心肌病;心室功能;内质网应激;环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白C/EBP]1。，50%DCM扩张型心肌病(dilatedcardiomyopathy)为临床常见原发性心肌病，该病发病隐匿，多数患者出现明显心衰症状时才确诊，错过最佳治疗时期，预后不良，五年生存率不足，目前该病的发病率逐年升高，严重威胁人类健康[目前DCM近期研究发现内质网应激所引发的细的发病机制尚不明确抗纤益心方胞凋亡与心室重构丹参等中药组成，具有益气活血的功由黄芪白术、、效，临床研究显示能够明显改善心力衰竭患者气虚血瘀症本研究状[通过制备DCM心室功能的改善作用，并初步探究其作用机制，以期为临床治疗心力衰竭的发生密切相关[、茯苓、]，然而其与内质网应激是否有关，目前尚不明确大鼠，并给予抗纤益心方干预，以观察其对提供一定的参考党参、DCM。。。]23DCM。1材料与方法10β-川芎红花党参30g。10g、15g、15g、20g、15g、10g、30g、15g、丹参按云苓泽兰白术赤芍药环糊精包合，将药渣与其他药物用水煎煮(1.1试验药物抗纤益心方干浸膏由河南省中医院制剂室制作，处方:黄芪益母倍处方草10g、川芎用水蒸气蒸馏提取挥发油，量称取各味药材粗粉，将白术、并用小时，将药液合并后过滤，浓缩至相对密度加入乙醇使其含醇量达到醇后再次浓缩至相对密度后将药液浓缩至相对密度为干浸膏含生药量为为1)以上并1.15后过滤，滤液回收乙，过滤，加入挥发油包合物，，使用时溶于蒸馏水中，配制浓度分别抗纤益心方药剂(含生药量分别为48h)，加水稀释冷藏1.30~1.40次，每次50%(，静置1.154g/g50℃50℃48h320、40、30mg/10mg/。呋喃唑酮片(福建省三明天泰制药有限公司，);卡维地洛片(齐鲁制药有限公司，20150505)20150204级周龄，许可证号:SPFSD。2016-0005。大鼠，购自北京维通利华公司，体(豫)所有实验动物湿度中周后进行模型制备实验本研究严饲养大鼠，获得动物伦理委员会批》22℃~25℃、50%。5、10、20mg/kgSCXK)80mg/kg片，批号:片，批号:1.2动物8重180g~200g均于本院实验动物饲养中心统一环境，自由摄食格遵循准同意1.3试剂HE20140726裂解液(测试剂盒(南京建成生物研究所，批号:抗鼠钙网蛋白(饮水，正常饲养、1实验动物管理条例公司，批号:20160703TUNELSigma，);《。)calreticulinCRT、78-kD染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司，批号:染色试剂盒(罗氏，批号:20140320);蛋白提取试剂盒);、BCARIPA检);兔kDglucose-reguIatedprotein，)一抗(GRP78);兔抗鼠磷酸化蛋白激酶-，)p-PERK、)ATF4、C/EBPp-proteinkinaseR-likeERkinase20140623、20150203((元件结合转录因子同源蛋白(activatingtranscriptionfactor4，BD公司，批号:样内质网激酶R转录激活因子4环磷酸腺苷反应，C/EBP-homologousprotein)一抗(CHOP20151012AbMART);兔抗鼠，)celllymphoma-2cleaved-caspase3、B相关X公司，批号:20151107、20140908、淋巴细胞瘤蛋白(-2蛋白(B-Bcl-2、Bcl-2公司，批号:Bcl-2associatedX);))。。CSTR&DBio-Rad，批号:2015060120150809、20141124、20160114)一抗(protein羊抗兔二抗(1.4仪器彩色多普勒超声检测仪(西门子);荧光显微镜(奥林巴斯);凝胶成像仪(1.5方法只大1.5.1鼠，自主服用呋喃唑酮水溶液(按呋喃唑酮配置)，每日更换一次并用超声诊断仪完成造模时间为心脏超声心动图监测，超声心动图显示左心室壁弥漫性运动减弱，射血分数较对照组大鼠射血分数均值减少为造模成功只，自主饮水连续的标志模型制备参照文献法制备另设正常组大鼠。动物分组与给药排除死亡大鼠，存活的大鼠，选取DCM水加20%周1kg周700mg120。。。1288601.5.2功大鼠共卡维地洛组，每组组、生药/kg续给药周只，分为模型组只抗纤益心方药剂[周[对照组。12]685。DCM造模成生药/kg抗纤益心方、模型制备后分别灌胃20、40、80mg。]和模型组灌胃等体积生理盐水，连续、卡维地洛，每日20、40、80mg次，连10mg/kg18超声检测大鼠左室功能末次给药后，麻醉大鼠，采取1.5.3仰卧位，采用彩色多普勒超声检测仪，检测大鼠左心室长轴切面，获取二维图像，检测左室收缩末期内径(Leftventricularendsystolicdiameter、enddiastolicdiameterLVEDD)，LVESD，心搏量(、，LVEF左室舒张末期内径()，左室短轴缩短率(Leftventricularfractionalstrokevolume)，至少连续检测，SV)，左心射血分数(E-个完整心动周期，求取3shortening)，FSjectionFractions平均值。大鼠左心室血流动力学检测大鼠麻醉后，迅速分离左1.5.4股动脉及右颈动脉，于远端用丝线结扎，于近端用动脉夹夹闭，导管至左心室内，右侧颈动脉插管注入肝素生理盐水经采集信号，待信号稳定，LVDP，后统计左心室舒张压()左心室舒张末期压(、)leftventricu-左心室内压升高或降低最高、lardevelopedpressureleftventricu-PE205min20150508、20150126葡萄糖调节蛋白(larenddilatedpressure速率(+dp/dtmaxLVEDP)，-dp/dtmax。78-031中药药理与临床;()2352019左心室重量测定各组大鼠称重后()将大鼠处死，1.5.5获取心脏组织，清洗残余血液后，称取全心脏重量，随后将右心)，计算全心脏以及左心室房心重指数(心室等出去后，称取左心室(、)LVMBWHW/BW、LVM/BW。HE4%-80℃多聚甲醛中固定，一部分组织置于心肌组织病理形态学检测左心室称重后，一部分心肌1.5.6组织置于中保存。常规制备石蜡组织切片，经二甲苯脱蜡，乙醇中分级脱水后，参染色试剂盒对心肌组织石蜡切片进行染色，经中性树脂照封片，置于光学显微镜下观察组织形态学变化]对。分:无炎症细胞浸心肌组织炎症心肌坏死;分:润心肌坏死面积2、、分:炎症心肌坏死面积、心肌坏死面积、坏死病理变化半定量评分，、0分:炎症细胞浸润炎症细胞浸润心肌坏死、3分:炎症细胞浸润25%≤细胞浸润参照文献[50%≤<50%<25%<75%41;;;7≥75%。染色观察心肌细胞凋亡情况制备冷冻心肌切试剂盒染色心肌切片，置于荧光显微镜镜下观察软件定量分析心肌细1.5.7TUNEL片采用细胞凋亡情况，拍照保存后应用胞凋亡率，凋亡率(TUNEL阳性染色细胞数目Image-J)总细胞量/×%=通路相关蛋白表达取出心肌组织剪碎后，添加100%。1.5.8免疫印迹法(WesternblotCHOP解液，于匀浆器中充分匀浆，抽提总蛋白，BCA蛋白，转模后，加1000r/min法检测蛋白含量后，封闭，加入5%BSAATF4、CHOP、Bax、cleaved-caspase3、Bcl-2后，添加二抗室温下孵育像仪内观察蛋白表达情况，并保存图片，用析各蛋白相对表达量，于ECL2h。)分析心肌组织中内质网应激裂后，收集上清电泳分离目的离心RIPA3minSDS-PAGECRT、GRP78、p-PERK、一抗，中孵育过夜中发光显影后，置于凝胶成软件定量分4℃Image-J2结果2.1抗纤益心方对DCM大鼠心室功能的影响与对照组相显著降低;比，模型组LVEDD、LVESD与模型组相比，抗纤益心方卡维地洛、组LVEF、SV、FS组显著升高显著升高，显著降低，20、40、80mg生药/kgLVEF、SV、FS。LVEDD、LVESD表1抗纤益心方对DCM大鼠心室功能的影响(，n=12)珋x±s组别对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛与模型组比较剂量(/生药)/kgmgLVEDD/()mmLVESD/()mm--20408010(下同)*P<0.05。5.56±0.45*7.86±0.376.48±0.29*5.99±0.37*5.27±0.39*5.31±0.28*3.16±0.38*5.64±0.375.27±0.29*4.84±0.26*4.67±0.35*4.58±0.67*LVEF/()%84.29±5.37*67.43±4.6275.26±4.12*79.33±5.17*81.94±4.29*82.36±5.12*SV0.34±0.05*0.16±0.030.22±0.04*0.25±0.06*0.30±0.05*0.31±0.04*()%FS/46.06±4.64*22.64±2.9728.39±4.35*32.67±3.63*41.29±3.41*43.16±3.39*表3抗纤益心方对DCM大鼠心室HW/BM、LVW/BM的影响，n=12组别剂量生药)()/mg/kgHW/BMLVW/BM珋x±s正常对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛--204080102.06±0.18*2.95±0.272.67±0.25*2.35±0.23*2.24±0.29*2.20±0.25*1.47±0.29*1.79±0.211.66±0.341.58±0.26*1.52±0.22*1.51±0.25*LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmix2.2抗纤益心方对DCM大鼠血流动力学的影响与对照组相比，模型组显著升高;与模型组相比，抗纤益心方卡维、显著降低;抗地洛组纤益心方显著升高+dp/dtmax、-dp/dtmix组显著降低，生药LVEDP组20、40、80mg显著升高，卡维地洛组、LVDP表2抗纤益心方对DCM大鼠血流动力学的影响(，n=1240、80mgLVEDP生药。)/kg/kg珋x±s(组别(mg对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛剂量/生药/kg--20408010LVDP/)mmHg()210±23*162±18171±16184±16*197±18*192±17*LVEDP/()mmHg26±5*51±444±5*36±3*32±3*31±3*(+dp/dtmax/)103mmHg/s3.72±0.58*-dp/dtmix/)(103mmHg/s3.49±0.47*1.79±0.261.98±0.262.23±0.38*2.45±0.38*2.85±0.47*2.84±0.46*3.12±0.39*3.07±0.32*3.23±0.41*3.12±0.28*2.3抗纤益心方对DCM大鼠左心室重量的影响与对照组相显著升高;与模型组相比，抗纤益比，模型组显著降低，心方卡维地洛组、抗纤益心方组显著降低HW/BM、LVW/BM组卡维地洛组、20、40、80mg/kg生药LVW/BM40、80mgHW/BM生药/kg。2.4抗纤益心方对DCM大鼠心肌组织形态的影响对照组心肌组织形态完整，心肌横纹较清晰，细胞结构正常，未出现病理性浸润;模型组可见心肌细胞排列紊乱大量坏死，间质水肿、且出现纤维化区域，伴有炎性细胞浸润;抗纤益心方各组卡维、地洛组心肌细胞坏死炎性细胞浸、分，模型对照组心肌组织病理半定量评分为润均得到改善)分，抗纤益心方组为(纤维化程度减少，间质水肿、3.57±0.72)分，抗纤益心方2.98±)分，抗纤2.62±0.71)分，卡维地洛组为生药)分，与对照组比较，模型组心肌组织病理评分显卡维地洛组病理评分、0.66益心方(1.93±0.83著升高，与模型组相比，抗纤益心方各组显著降低，见图40mg组为(2.27±0.5420mg组为(0组为(生药生药80mg/kg/kg/kg。1。中药药理与临床;()2352019131A:正常对照;B:模型对照;C:抗纤益心方20mg生药/kg;D:抗纤益心方40mg生药/kg;E:抗纤益心方80mg生药/kg;F:卡维地洛10mg/kg。图1抗纤益心方对DCM大鼠HE染色观察心肌组织病理形态学的影响(100×)2.5抗纤益心方对DCM大鼠心肌细胞凋亡的影响与对照组相比，模型组心肌细胞凋亡率显著升高;与模型组相比，抗纤益心方降低，见表20、40、80mg图4、2。生药组卡维地洛组心肌细胞凋亡率显著、/kgA:正常对照;B:模型对照;C:抗纤益心方20mg生药/kg;D:抗纤益心方40mg生药/kg;E:抗纤益心方80mg生药/kg;F:卡维地洛10mg/kg。图2抗纤益心方对DCM大鼠心肌细胞凋亡的影响(TUNEL法，×100)(珋x±s))mg(/剂量生药表4抗纤益心方对DCM大鼠心肌细胞凋亡率的影响，n=12组别正常对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛凋亡率--/kg26.97±3.51*17.24±3.01*12.59±1.27*(/)%5.72±0.81*61.44±4.67204080109.36±0.34*2.6抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠内质网应激相关蛋白表达的影响与对照组相比，模型组蛋白表达显著升高;与模型组相比，抗纤益心方各组蛋白GRP78表达显著降低，抗纤益心方卡维地洛组卡维地洛组、生药组CRT、GRP78/kg、蛋白表达显著降低，见表CRT40、80mg图5、3。A:正常对照;B:模型对照;C:抗纤益心方20mg生药/kg;D:抗纤益心方40mg生药/kg;E:抗纤益心方80mg生药/kg;F:卡维地洛10mg/kg(下同)。图3WB法检测抗纤益方对DCM大鼠心肌CRT、GRP78蛋白表达的影响231中药药理与临床;()2352019(珋x±s/)()mg剂量生药表5抗纤益心方对DCM大鼠心肌CRT、GRP78蛋白表达的影响，n=12组别正常对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛GRP78/β-CatinCRT/β-Catin0.32±0.04*0.79±0.16*0.44±0.08*0.57±0.05*1.05±0.09*0.88±0.06*0.71±0.09*1.36±0.080.96±0.181.16±0.29/kg204080--100.47±0.06*0.67±0.08*2.7抗纤益心方对DCM大鼠CHOP通路蛋白表达的影响与对照组相比，模型组蛋白表达显著升高;与模型组相比，抗纤益心方各组p-PERK、ATF4、CHOPp-PERK、ATF4、蛋白表达显著降低，见表CHOP卡维地洛组、图6、4。图4WB法检测抗纤益心方对DCM大鼠心肌CHOP通路蛋白表达的影响表6抗纤益心方对DCM大鼠心肌p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达的影响(，n=12)珋x±smg组别(正常对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛剂量/生药/kg)PERK/β-Catinp-PERK/β-CatinATF4/β-CatinCHOP/β-Catin--204080100.76±0.170.25±0.05*0.29±0.03*0.19±0.02*0.73±0.190.58±0.071.31±0.030.72±0.130.76±0.140.43±0.04*1.13±0.04*0.58±0.08*0.71±0.150.37±0.04*0.96±0.08*0.46±0.05*0.74±0.150.29±0.03*0.89±0.05*0.31±0.04*0.77±0.160.25±0.02*0.63±0.06*0.27±0.03*2.8抗纤益心方对DCM大鼠心肌组织凋亡蛋白表达的影响与对照组相比，模型组高，卡维地洛组白表达显著升高，见表蛋白表达显著升蛋白表达显著降低;与模型组相比，抗纤益心方各组、蛋蛋白表达显著降低，Bax、cleaved-caspase3Bax、cleaved-caspase3Bcl-2Bcl-2图7、5。图5WB法检测抗纤益心方对DCM大鼠心肌Bcl-2Bax、cleaved-caspase3蛋白表达的影响表7抗纤益心方对DCM大鼠心肌Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达的影响(，n=12)珋x±s剂量/生药/kgmg)Bcl-2/β-CatinBax/β-CatinCleaved-caspase3/β-Catin--204080100.75±0.05*0.17±0.03*0.19±0.03*0.18±0.020.96±0.040.97±0.080.26±0.04*0.67±0.03*0.83±0.05*0.37±0.04*0.42±0.06*0.69±0.07*0.49±0.05*0.35±0.03*0.41±0.04*0.51±0.05*0.23±0.04*0.23±0.03*组别(正常对照模型对照抗纤益心方抗纤益心方抗纤益心方卡维地洛3讨论810]。、、、、、、、，]9DCM茯苓DCM党参心室超速起博多项临床研究显示抗纤益心方能减轻大鼠，稳定性较强白术抗纤益心方由黄芪党参可益气生血，白术补气健脾，茯苓，健脾、DCM道采用呋喃唑酮水溶液制备济[。成，黄芪功效，丹参活血化瘀，对于著[状，改善患者心室功能[水平，进而缓解调可反应心功能状态毒性药物等多种因素会诱导病毒感染，呋喃唑酮是诱导药物之一，有致毒性且价格低廉，文献报费用经丹参等中药组益心安神、气虚下陷的症状效果较显患者临床症动物研究显示抗纤益心方能够下心功能指标大鼠心室重构[本研究发现，与对照组相比，模型组模型心处理大鼠建模成功，影响大鼠心功能显著降显著升高，提示给予抗纤益心方干预后，大鼠指标向心功能良好状态发展，提模型大鼠可缓解心功能指标，进而改善LVEDD、LVESD功能指标相似，提示状态低，与模型组相比，各抗纤益心方组降低，与以往LVEDD、LVESD。升高，LVEF、SV、FSLVEF、SV、FSLVEDD、LVESD、LVEF、SV、FS示抗纤益心方干预心功能状态AngIIDCMDCMDCMDCMDCM。。。，12]]1113。进一步研究发现与对照组相比，模型组降低，以上进一步验证max、-dp/dtmix大量坏死，间质水肿率升高张亡。LVDP、+dp/dt-升高;心肌细胞LVEDP、HW/BM、LVW/BM纤维化，伴有炎性细胞浸润;心肌细胞凋亡、会影响心脏舒引起细胞凋、建模成功，DCMDCM增加心脏组织重量、。收缩能力使心肌组织病变、、与模型组相比，各抗纤益心方组升高，LVDP、+dp/dtmax、-dp/dt-降低，心肌细胞mix炎性细胞浸润等情况均减轻，表明抗纤益心方能纤维化坏死、、收缩能力，缓解心肌组织损伤，减缓心肌细胞凋改善心脏舒张、亡，从而改善患者心功能HW/BM、LVW/BM显著降低，LVEDP。14。等[CRTDCMGRP78水平，Li以及标志蛋白内质网应激导致的心肌细胞凋亡在GRP78组中发现心肌细胞凋亡程度与随着反应进一步增加，激活，进而活化的发生发展中发当内质网平衡状态被打破后，蛋白折叠功能出现挥重要作用异常，导致内质网应激反应，初始反应则会升高内质网伴侣蛋白]在研究心衰动物模型蛋白表达水平升高有关;被复合体解离，进而激活]研究发现上调心肌肥厚大鼠本研究发现与蛋白表达显著升高;与模型组蛋白表达显著降低，纤益心方中、中内质网伴侣蛋白表达量升高是内质网应激引起的，而CHOP对照组相比，模型组相比，各抗纤益心方组高组信号通路[蛋白水平，可明显促进其诱导蛋白凋亡GRP78蛋白表达显著降低信号通路上游转录因子CHOP/ATF4等[以及标志蛋白CRT、GRP78ATF4，1615，促使提示CHOPCHOPPERKDCMYang]，CRT。。17GRP78CRT中药药理与临床;()2352019331。。提示内质网应激会导致心肌细胞凋亡，抗纤益心方可降低p-PERK、ATF4、CHOP与对照组相比，模型组CRT胞凋亡升高;与模型组相比，各抗纤益心方组白表达降低纤益心方可使该信号通路相关蛋白的激活水平降低GRP78、表达量，可能会改善改善内质网应激状况进而缓解心肌细蛋白表达蛋信号通路相关蛋白被激活，抗说明。水平水DCM平升高可能激活进而蛋白活化从而加强内质网应激进而促进蛋白凋亡，抗纤益心方可抑制信号通路蛋白，缓解内质网应激状况，以及标志蛋白信号通路使该信号通路上引起的内质网伴侣蛋白复合体解离分离出p-PERK、ATF4、CHOPCHOP/ATF4从而使p-PERKGRP78CHOPCHOPCHOP抑制ATF4DCMCRT中GRP78、CRT、减缓细胞凋亡，如图CHOP，改善患者心功能6。图6CHOP信号通路影响心肌细胞凋亡路线进一步研究发现，与对照组相比，模型组Bax、cleaved-caspase3级联反应加速细胞凋亡[蛋白表达显著升高，Bcl-2Bcl-2蛋白表达显著升高caspase3组相比，各抗纤益心方组低，。Bcl-2因，是各种凋亡信号通路的节点，高后激活促凋亡蛋白caspase-3Bax、cleaved-蛋白表达显著降低;与模型蛋白表达显著降是最早与抗凋亡相关的基为抗凋亡基因，其水平升使提示，19]18Bax表达量升高DCM。抗凋亡蛋白、Bax、cleaved-caspase3Bcl-表达量降低从而引起心肌细胞凋亡;抗纤益心方能使促凋亡表达升2蛋白高从而减缓心肌细胞凋亡，改善患者心功能抗凋亡蛋白、Bax、cleaved-caspase3表达降低Bcl-2DCM综上所述，抗纤益心方能够减轻内质网应激引发的心肌细大鼠心室功能，其作用是改善内质网相关蛋胞凋亡，改善白，下调抗凋亡蛋白、然而通路表达上调进而实现抑制心肌细胞凋亡的作用下游凋亡通路较多，抗纤益心方对其下游基因的作用基因是否有影响进而抑制心肌细胞凋亡，还有待后续深入研究通路，以及使促凋亡蛋白表达下调CHOPCHOP。。[]2CongZX，LangLI，HongW，etal.MicroRNA-128inhibitionattenu-atesmyocardialischemia/reperfusioninjury-inducedcardiomyocyteapoptosisbythetargetedactivationofperoxisomeproliferator-activatedreceptorgamma.，，()MolecularMedicineReports2016[]王振涛，韩丽华，柴松波，等3大鼠心肌基质金属蛋白酶∶129~136.14抗纤益心方对扩张型心肌病心力衰竭，中医杂志，及其抑制剂表达的影响1..2011-1)16∶1406~1408.(52[]高鸿山，宋堃，高焕萍4实验研究[]王振涛，韩丽华，朱明军，等5表达的影响浙江中西医结合杂志，型胶原...mRNAⅠ、Ⅲ[]盛蕾，祝聪聪，洪李锋6模型心功能的影响[，]7RezkallaS..真武胶囊联合苯那普利治疗扩张性心肌病(，26)7∶615~617.2016抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌中成药，()10∶1496~1500.，312009.香菇多糖对卡维地洛增强扩张型心肌病大鼠医药导报，，(，362017)2，∶167~170.KlonerRAKhatibGetal.Effectofmetoprololina-cutecoxsackievirusB3murinemyocarditis.JournaloftheAmericanCollegeofCardiology[]8ZhangM1988，，)2(，12，，∶412~414.WeiJShanHetal.Calreticulin-STAT3SignalingPathwayModulatesMitochondrialFunctioninaRatModelofFurazolidone-InducedDi-....]李思耐，林谦，高群，等latedCardiomyopathy.PlosOne[]王振涛，常红波，吴鸿，等9功能及心室重构的影响[10极时间的干预研究[11指标的影响[12察[13血管紧张素[，]曾垂义，王振涛，陈磊.世界科学技术]曾垂义，王振涛，陈磊.中国实验方剂学杂志，2013]王振涛，韩丽华，惠玲，等表达的影响.，]，Ⅱ...14LiHZhuX，(，8)2013抗纤益心浓缩丸对扩张型心肌病大鼠心∶e66779.6中国中医急症，，(2017263∶394~396.黄芪党参对心肌梗死后心衰小鼠心肌复中国中西医结合杂志，，)2018382∶232~236.)(抗纤益心方对扩张型心肌病患者心脏超声中医药现代化，-抗纤益心方治疗扩张型心肌病患者疗效观∶109~111.2014，(1))(，19抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌∶321~323.23中华中医药杂志，(，31)3∶563~565.2011FangFetal.Down-regulationofGRP78enhancesap-optosisviaCHOPpathwayinretinalischemia-reperfusioninjury.Neuro-scienceLetters[，]JiangQ15，2014)8(，575，ChenSRenW∶68~73.，etal.Escherichiacoliaggravatesendoplas-micreticulumstressandtriggersCHOP-dependentapoptosisinweanedpigs.AminoAcids[，]16YuL，49(，2017，)12，∶2073~2082.LiSTangXetal.Diallyltrisulfideamelioratesmyocardialis-chemia-reperfusioninjurybyreducingoxidativestressandendoplasmicreticu-lumstress-mediatedapoptosisintype1diabeticratsroleofSIRT1activa-:tion.Apoptosis[，]YangW17，2017227，，()∶1~13.，WuFLuoTetal.CCAAT/enhancerbindingproteinho-mologousproteinknockdownalleviateshypoxia-inducedmyocardialinjuryin参考文献，NavaratnamG，etal.Diagnosisandassessment[]1MathewT，WilliamsL:ofdilatedcardiomyopathyaguidelineprotocolfromtheBritishSocietyofEchocardiography.EchoResearch&Practice2017∶1~13.，(，4)2ratcardiomyocytesexposedtohighglucose.Experimental&Therapeutic。18VasilikosLSpilgiesLMKnopJ，，etal.Regulatingthebalancebe-，2018()5∶4213~4222.Medicine[]，15，，tweennecroptosisapoptosisandinflammationbyinhibitorsofapoptosispro-teins.ImmunolCellBiol[]，19PanLLWangAY2017，HuangYQ∶160~165.，etal.Mangiferininducesapoptosis，，()952byregulatingBcl-2andBaxexpressionintheCNE2nasopharyngealcarcino-macellline.AsianPacJCancerPrev20141517∶7065~7068.，，()431中药药理与临床;()2352019EffectofKangxianyixinRecipeonendoplasmicreticulumstressCHOPpathwayinratswithdilatedcardiomyopathyChaiSongbo，WangZhentao，ZhangShujuan，LiuShunyuTheSecondAffiliatedHospitalofHenanUniversityofTraditionalChineseMedicine/HenanProvinceHospitalofTraditionalChineseMedicineZhengzhouHenan450002，，)(ToexploretheeffectofKangxianyixinPrescriptiononendoplasmicreticulumstressC/EBPhomologousproteinpathwayinratswithdilatedcardiomyopathyDCM.Methods():dividedintothemodelgroupKangxianyixinPrescriptiongroups，DCMmodelratswerepreparedbyfurazolidoneaqueoussolution()，，，2040and80mg/kgofcrudedrugsrespectively10mg/kgCarvedilol(，)CHOPandwereObjective:()groupCARandthecontrolgroup.Changesofventricularfunctionweredetectedbyechocardiography.Hemodynamicchangesweredetec-tedbyrightcommoncarotidarterycatheterization.WholeheartandleftventricularmassindexHW/BWLVM/BWwerecompared.HEstainingwasusedtoobservethepathomorphologicalchangesofmyocardialtissuesinrats.Tunelstainingwasusedtoobservetheapoptosisof，)myocardialcells.Expressionsofcalreticulin()，(PERKtranscriptionactivator4:)，()，CRTglucose-regulatedprotein78GRP78kinaseR-likeendoplasmicreticulumkinaseATF4C/EBPhomologousproteinCHOPcleaved-caspase3Bax()，()，(，，，，，andBcl-2proteinsweredetec-，，thelevelsofLVEDDLVESDand-dp/dtmixwerede-，inflammatorycellinfiltration，，，，p-PERKATF4tedbyWesternblotting.ResultsComparedwiththecontrolgroupthepathologicalsemi-quantitativescoreHW/BMandLVW/BMinthemodelgroupwereincreased，whilethoseofLVEF，SV，FS，，LVDP+dp/dtmax，creased.Myocardialcellwerenecroticinlargenumbersedemaandfibrosiswereobservedintheinterstitium，wasalsoobserved.TheapoptoticrateofcardiomyocyteswassignificantlyincreasedtheexpressionsofCRTGRP78，，，CHOPBaxcleaved-caspase3proteinweresignificantlyincreasedwhiletheexpressionofBcl-2proteinexpressionwassignificantlyde-creased.Comparedwiththemodelgroup，，thepathologicalsemi-quantitativescore，，，，，thelevelsofLVEDDLVESDLVEDPHW/BMwere，，，levelsofLVEFSVFS+dp/dtmaxand-dp/dtmixweresignificantlyincreased.Myocardialcellnecrosisandfi-interstitialedemaandinflammatorycellinfiltrationwereimprovedmyocardialcellapoptosisratewassignificantlyde-creased.ExpressionsofGRP78p-PERKATF4CHOP，，，，，expressionwassignificantlyincreased.LevelsofLVDPin40cleaved-caspase3proteinsweresignificantlydecreasedBax，80mg/kgKangxianyixinPrescriptiongroupsandCARgroupweresignificantlyandBcl-2protein，significantlydecreased，brosiswerereducedincreased.TheexpressionsofLVW/BMandCRTproteinweresignificantlydecreased.ConclusionKangxianyixinPrescriptioncanimprovetheventricularfunctioninDCMratsandalleviatetheapoptosisofcardiacmyocytesinducedbyendoplasmicreticulumstress.Itsmechanism:，，mayberelatedtothedown-regulationofCHOPpathway.，Dilatedcardiomyopathy，Ventricularfunction，Endoplasmicreticulumstress，C/EBP-homologousKeywordsKangxianyixinPrescriptionprotein毷櫴毷临床研究櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴櫴毷櫴毷DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2019.02.029基于"久病及肾"理论论治扶正抑癌1号方联合GP化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察*曾珠1，孙剑峰1，张巍2，何成诗3**，肖玮3(1成都中医药大学，成都610075;2成都体育学院，成都6100413成都中医药大学附属医院，成都610072);摘要目的:基于"久病及肾"理论，观察扶正抑癌1号方联合GP化疗与单纯化疗对比治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效、安全性及对患者生活质量的影响。方法:选取2017年9月1日至2018年9月1日于成都中医药大学附属医院及四川省肿瘤医院就诊的晚期非小细胞肺癌患者86例，随机分为两组，试验组46例，对照组40例，对照组给予GP方案化疗，试验组在对照组基础上联合中药扶正抑癌1号方治疗，4周期后，比较两组实体瘤目标病灶疗效、中医临床证候疗效、生活质量及毒副反应。结果:试验组实体瘤目标病灶总有效率有大于对照组的趋势;而在生活质量及中医临床证候疗效方面，试验组均优于对照组，化疗毒副作用的发生率明显低于对照组。结论:基于"久病及肾"，以扶正抑癌1号方联合GP化疗治疗晚期非小细胞肺癌，在客观疗效上与单纯GP方*基金项目:四川省中医药科学技术研究专项项目(2016C018)。**通讯作者
