巨噬细胞过表达Wnt5a对其炎性反应及共培养体系中MSCs成软骨分化的影响研究
【摘要】 目的:通过构建和比较经Wnt5a基因修饰的巨噬细胞分别与骨髓干细胞（MSCs）2D单层贴壁与骨髓液跨小室共培养模型，旨在探索Wnt5a信号通过调控巨噬细胞炎症反应对MSCs成软骨分化产生的影响。方法:自2015年9月至2018年12月收集6例重度膝关节骨关节炎拟行全膝关节置换术者的巨噬细胞、MSCs和骨髓液，其中男2例，女4例;年龄58~71岁。膝关节囊滑膜组织常规消化取得单细胞，经反复贴壁并行Ficoll液密度梯度离心和抗CD14抗体流式细胞术测定巨噬细胞纯度。将上述经鉴定的巨噬细胞置于IFN-γ联合TNF-α刺激48h后，再使用重组腺相关病毒（rAAV）-lacZ或Wnt5a转染24h，分别与MSCs2D单层贴壁或骨髓液构建跨小室共培养模型，采用HE染色、软骨特殊染色、X-gal染色、抗Wnt5a、抗Ⅱ和X型胶原免疫组化染色对细胞形态与增殖能力、病毒转染效率和成软骨分化能力等进行检测。结
