LncRNATUG1/miR-525-5p/NLRC5在缺氧复氧大鼠心肌细胞中的作用机制研究
【摘要】 目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（TUG1）对缺氧复氧心肌细胞焦亡、自噬的影响及调控机制。方法建立缺氧复氧大鼠心肌细胞H9c2损伤模型;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测TUG1、miR-525-5p、NOD样受体家族CARD结构域包含分子5（NLRC5）在细胞中的表达;用脂质体分别转染pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-525-5pmimics、anti-miR-525-5p、pcDNA-NLRC5、si-NLRC5至H/RH9c2细胞;或共转染pcDNA-TUG1和miR-525-5pmimics、miR-525-5pmimics和pcDNA-NLRC5至H/RH9c2细胞;双荧光素酶报告基因检测细胞的荧光活性。流式细胞术检测细胞焦亡率;Westernblot检测细胞自噬标志基因自噬相关基因（Beclin1）、微管相关蛋白轻链3（LC3），焦亡相关基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸酶（caspase-1）的蛋白表达。结果与H9c2细胞相比，H/RH9c2细胞中TUG1、NLRC5表达显著升高，miR-525-5p表达显著降低（P<0.05）。TUG1能够靶向miR-525-5p，miR-525-5p又可靶向NLRC5。过表达TUG1可明显增强H/R对H9c2细胞的焦亡诱导和自噬抑制作用，并上调NLRP3、caspase-1，下调Beclin1、LC3。回复miR-525-5p能够部分逆转TUG1对H/RH9c2细胞的调控，回复NLRC5也可部分逆转miR-525-5p对H/RH9c2细胞的调控作用。结论LncRNATUG1促进缺氧复氧心肌细胞焦亡，抑制自噬的机制与靶向miR-525-5p/NLRC5通路相关。[关键词]长链非编码RNATUG1;miR-525-5p;NLRC5;焦亡;自噬[中图分类号]R542.2[文献标识码]A[DOI]10.16695/j.cnki.1006-2947.2020.03.011StudyonthemechanismofLncRNATUG1/miR-525-5p/NLRC5incardiaccellsofhypoxia/reoxygenationrats（EmergencyDepartment,SecondAffiliatedHospitalOfChengduMedicalCollege/416NuclearIndustryHospital,Chengdu610500,China）LONGQin,XIAOXiao-pei,FANGKai*[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectoflong-chainnoncodingRNAtaurineupregulatedgene1(TUG1)oncellscorchandautophagyofhypoxicreoxygenatedcardiomyocytes.MethodsH9c2injurymodelwasestablishedincardiomyocytesofhypoxia-reoxygenationrats;real-timefluorescentquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-qPCR)wasusedtodetecttheexpressionofTUG1,miR-525-5p,NODlikereceptorfamilyCARDdomaincontainsmolecule5(NLRC5)incells.pcDNA-TUG1,si-TUG1,miR-525-5pmimics,anti-miR-525-5p,pcDNA-NLRC5,si-NLRC5toH/RH9c2cellsweretransfectedwithliposomes,orpcDNA-TUG1,miR-525-5pmimics,miR-525-5pmimicsandpcDNA-NLRC5toH/RH9c2cellswereco-transfected.Thefluorescentactivityofcellswasdetectedbydualluciferasereportergene.Flowcytometrywasusedtodetectcellpyroptosis.WesternblotwasusedtodetecttheexpressionofautophagymarkergeneBeclin1,microtubule-associatedproteinlightchain3(LC3),nucleotidebindingoligomerizationdomainlikereceptorprotein3(NLRP3)andcaspase-1(cysteineaspartase).ResultsComparedwithH9c2cells,theexpressionofTUG1andNLRC5inH9c2cellsofH/Rgroupwasincreasedsignificantly,andtheexpressionofmir-525-5pwasdecreasedsignificantly(P<0.05).TUG1cantargetmir-525-5p,andmir-525-5pcanalsotargetNLRC5.OverexpressionofTUG1cansignificantlyenhancethescorchinginductionandautophagyinhibitionofH9c2cellsinH/Rgroup,upregulatetheexpressionofNLRP3,caspase-1,downregulatetheexpressionofBeclin1,LC3.Recoveryofmir-525-5pcanpartiallyreversetheregulationofTUG1onH/RH9c2cells,andrecoveryofNLRC5canalsopartiallyreverse[收稿日期]2019-08-09[基金项目]*通信作者（Towhomcorrespondenceshouldbeaddressed)四川省卫生和计划生育委员会科研课题（17PJ026）2020年第26卷第3期龙琴等LncRNATUG1/miR-525-5p/NLRC5在缺氧复氧大鼠心肌细胞中的作用机制研究·285·theregulationofmir-525-5ponH/RH9c2cells.ConclusionLncRNATUG1promotespyroptosisinhypoxia-reoxygenatedcardiomyocytes,andthemechanismofinhibitingautophagyisrelatedtotargetingmiR-525-5p/NLRC5pathway.[Keywords]longnon-codingRNATUG1;miR-525-5p;NLRC5;pyroptosis;autophagy[2,3]心肌损伤是世界范围内发病和死亡的常见原因[1]之一。分化良好的心脏组织需要大量的氧气来支持其基本功能。当氧气短缺时，线粒体的氧化磷酸化迅速停止，导致心肌的不可逆损害。目前，仍需探讨心肌损伤的机制。细胞焦亡也称作细胞的炎性坏死，能够反映细胞在各种损伤下的生存状态。据报道，长链非编码RNA（longnon-codingRNA，LncRNA）参与了心血管疾病心功能和重构的病理变化过程，但是这些LncRNA在心肌损伤中的潜在作用机制尚不清楚。长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（taurineupregulatedgene1，TUG1）在心肌损伤中发挥关键作用，但是其作用机制仍有待探索。本研究旨在探讨TUG1调控缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞焦亡和自噬的潜在机制。[6,7][4][5]1材料与方法1.1资料大鼠心肌细胞H9c2购自中国科学研究院细胞库;半胱氨酸天冬氨酸酶（caspase-1）活性检测试剂盒购自Biovision公司;改良杜氏细胞培养基（dulbecco'smodifiedeaglemedium，DMEM）培养基购自Gibco公司;荧光素酶载体GV306购自上海吉凯基因化学技术有限公司;细胞核染料碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染色液购自北京百奥莱博生物公司;双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自Abcam公司。1.2细胞培养及缺氧复氧模型制造2H9c2细胞用DMEM培养基（含10%胎牛血清），在37℃、5%CO的恒温细胞培养箱中常规培养和传代。将正常培养的H9c2细胞标记为Blank组。将H9c2细胞按照刘启方等的方法进行缺氧复氧模型制备，H9c2细胞培养于95%N、5%CO的培养箱内缺氧处理12h，随后置于含有O、5%CO的培养箱内复氧处理6h，标记为H/R组。1.3细胞分组[8]2222将缺氧复氧模型细胞H/R组随机分为H/R+pcDNA-TUG1组（转染pcDNA-TUG1）、H/R+si-TUG1组（转染si-TUG1）、H/R+miR-525-5p组（转染miR-525-5pmimics）、H/R+anti-miR-525-5p组（转染anti-miR-525-5p）、H/R+pcDNA-NLRC5组（转染pcDNA-NLRC5）、H/R+si-NLRC5组（转染si-NLRC5）、H/R+pcDNA-TUG1+miR-525-5p组（共转染pcDNA-TUG1和miR-525-5pmimics）、H/R+miR-525-5p+pcDNA-NLRC5组（共转染miR-525-5pmimics和pcDNA-NLRC5），各组细胞用5倍质粒或DNA量的脂质体与其混匀在与H/R组细胞共培养4h，然后添加新培养液继续培养至48h再用RT-qPCR检测转染效率如何，确认转染成功后用于后续实验。1.4RT-qPCR实验-△△Ct收集待检测的细胞，提取细胞总RNA，并将其反转录为cDNA。将其作为模板用RT-qPCR试剂盒检测细胞中TUG1、miR-525-5p、NLRC5的表达，结果用2法计算，以GAPDH、U6为内参，表示待检基因的表达情况。引物序列（5'-3'）:TUG1上游引物GCACCAGTACAAGCAGCAGC，下游引物AATGGCACCCAGTGTAAAGC;miR-525-5p上游引物CUCCAGAGGGAUGCAC，下游引物GTGCAGGGTCCGAGGT;NLRC5上游引物GCTCGGCAACAAGAACCTGT，下游引物GGTCCAAGGTCTCGTTCCT;GAPDH上游引物GTCAGCCGCATCTTCTTTTG，下游引物GCGCCCAATACGACCAAATC;U6上游引物CTCGCTTCGGCAGCACA，下游引物AACGCTTCACGAATTTGCGT。1.5Westernblot实验将需要检测的细胞收集，用细胞蛋白裂解液充分裂解。提取总蛋白，再进行沸水浴法变性处理，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis，SDS-PAGE）蛋白电泳，在将蛋白转移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidenefluoride，PVDF）膜。将膜用5%的脱脂奶粉封闭处理2h，再进行相对应的一抗溶液（1:1000~1500）4℃孵育过夜，洗膜后在二抗溶液（1:1000）中37℃孵育2h。将膜用超敏电化学发光（electrochemicalluminescence，ECL）发光试剂盒进行显影曝光。再用QuantityOne软件处理分析条带灰度值，以磷酸甘油醛脱氢酶（reducedglyceraldehyde-phosphatedehydrogenase，GAPDH）为内参，用目的蛋白灰度值与内参蛋白灰度值之比表达蛋白表达。·286·解剖科学进展2020年第26卷第3期1.6双荧光素酶报告实验通过生物信息学在线网站Starbase（http://starbase.sysu.edu.cn）预测TUG1存在的潜在靶基因。用同样的方法预测miR-525-5p的潜在靶标。然后送由上海吉玛公司通过NCBI基因库设计合成TUG1-WT、TUG1-MUT、NLRC53'UTR-WT、NLRC53'UTR-MUT。将以上各质粒克隆至荧光素酶载体GV306，构建荧光素酶报告载体GV306-TUG1-WT、GV306-TUG1-MUT、GV306-NLRC53'UTR-WT、GV306-NLRC53'UTR-MUT。将其分别与miR-NC、miR-525-5p、anti-miR-NC、anti-miR-525-5p共转染至H9c2细胞。按照双荧光素酶报告基因检测试剂盒操作说明书操作，先检测细胞的萤火虫荧光素酶活性再检测细胞的海肾荧光素酶活性，结果分析以萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性的比值表示细胞的荧光活性。1.7流式细胞术实验收集待检测的细胞，使用caspase-1活性检测试剂盒和PI对细胞染色，再用流式细胞仪检测caspase-1和PI阳性的细胞。细胞焦亡率为caspase-1阳性细胞率与PI阳性细胞率之和。1.8统计学分析本实验所有数据的分析均使用SPSS22.0专业统计分析软件分析。所有数据均使用均数±标准差（x±s）表示。多组间数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验，两组数据分析采用独立样本t检验。P<0.05表示差异有意义。2结果2.1TUG1、miR-525-5p、NLRC5在缺氧复氧大鼠心肌细胞中的表达如图1所示，与Blank组相比，H/R组细胞NLRC5蛋白表达的平均光密度值显著升高（1.00±0.07vs1.52±0.10）;TUG1mRNA、NLRC5mRNA的相对表达水平显著升高，miR-525-5pmRNA表达明显降低（P<0.05）。2.2TUG1靶向调控miR-525-5p/NLRC5通路生物信息学预测网站Starbase（http://starbase.sysu.edu.cn）发现TUG1与miR-525-5p之间存在互补的核苷酸序列（图2A），miR-525-5p与NLRC5之间也存在互补的核苷酸序列（图2B）。随后我们通过双荧光素酶实验验证结合关系，结果发现，与miR-NC组相比，miR-525-5p组TUG1-WT和NLRC53'UTR-WT细胞的荧光活性均显著降低，与anti-miR-NC组相比，anti-miR-525-Fig1.TheexpressionofTUG1,miR-525-5pandNLRC5inH/RH9c2cellsA:TheexpressionofNLRC5wasdetectedbyWestern;B:TherelativeexpressionlevelofTUG1,miR-525-5pandNLRC5inH/RH9c2cellswasdetectedbyRT-qPCR,P<0.05,vsH9c2group*ABCFig2.TUG1targetedregulationofmir-525-5p/NLRC5pathwayA:ThetargetedbindingsitesofTUG1tomiR-525-5p;B:TargetbindingsitesofmiR-525-5pandNLRC5;C:ResultsofdualPluciferasereportergeneassay,<0.05vsmiR-NCgroup,#P<0.05vsanti-miR-NCgroup*5p组TUG1-WT和NLRC53'UTR-WT细胞的荧光活性均显著升高（P<0.05），见图2C。结果提示TUG1靶向调控miR-525-5p/NLRC5通路。2.3TUG1对缺氧复氧大鼠心肌细胞焦亡和自噬的调控如图3所示，与Blank组相比，H/R组细胞TUG1表达显著升高，细胞焦亡率显著升高，焦亡相关基因NLRP3和caspase-1蛋白表达显著升高，自噬标志基因Beclin1和LC3蛋白表达显著降低（P<0.05）。与H/R组相比，H/R+pcDNA-TUG1组细胞TUG1表达显著升高，细胞焦亡率显著升高，焦亡相关基因NLRP3和caspase-1蛋白表达显著升高，自噬标志基因Beclin1和LC3蛋白表达显著降低，而2020年第26卷第3期龙琴等LncRNATUG1/miR-525-5p/NLRC5在缺氧复氧大鼠心肌细胞中的作用机制研究·287·AB3讨论CFig3.TheRegulationofTUG1oncardiomyocyteapoptosisandautophagyinanoxiareoxygenationratsofH9c2cellsofeachgrouATherelativeexpressionlevelofTUG1wasdetectedbyRT-::,qPCRBPyroptosisrate(%)CTheexpressionofNLRP3,caspase-1Beclin1andLC3wasdetectedbyWesternP<0.05vsBlankgroup;P<0.05vsH/Rgroup;,,*,:#Fig4.Effectsofreversionofmir-525-5porNLRC5oncardiomyocyteapoptosisandautophagyinanoxiareoxygenationratsA:TherelativeexpressionlevelofTUG1andmir-525-5pwasdetectedbyRT-qPCR,B:Pyroptosisrate(%),C:TheexpressionofNLRP3,caspase-1,Beclin1andLC3wasdetectedbyWestern,P<0.05vsBlankgroup;<0.05vsH/Rgroup;P#*H/R+si-TUG1组细胞则具有相反的调控作用（P<0.05）。2.4回复miR-525-5p、NLRC5对缺氧复氧大鼠心肌细胞焦亡和自噬影响结果如图4所示，与H/R+pcDNA-TUG1组相比，H/R+pcDNA-TUG1+miR-525-5p组细胞TUG1表达水平、细胞焦亡率、NLRP3、caspase-1蛋白表达均显著降低，Beclin1和LC3蛋白表达显著升高（P<0.05）。与H/R+miR-525-5p组相比，H/R+miR-525-5p+pcDNA-NLRC5组细胞miR-525-5p表达明显降低，细胞焦亡率、NLRP3、caspase-1蛋白表达均明显升高，Beclin1和LC3蛋白表达明显降低（P<0.05）。[9][10]本研究结果显示，TUG1在H/R心肌细胞中高表达，并且过表达TUG1能够加重H/R诱导的心肌细胞焦亡和自噬抑制，敲减TUG1则发挥保护作用，并且TUG1还可靶向miR-525-5p。TUG1在心肌损伤中的作用已得到很多研究的认可，但是其发挥作用的机制仍有待研究。Su等报道，TUG1在过氧化氢诱导的心肌细胞损伤中的表达明显上调，敲减TUG1明显的促进细胞增殖，抑制细胞凋亡并减少心肌细胞中活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）的产生，减轻缺血再灌注诱导的心肌梗死，其作用机制为TUG1靶向miR-132-3p/HDAC3通路。随后，该研究团队又报道，TUG1通过靶向miR-142-3p，上调HMGB1和Rac1，在刺激缺血/缺氧心肌细胞自噬细胞凋亡中起中心作用。TUG1在心肌梗塞中作为miR-9的竞争性内源RNA发挥作用，其机制为TUG1靶向miR-9/KLF5通路心肌梗塞的进展。这些实验揭示了TUG1在心肌损伤中的重要作用，其发挥促进疾病进展功能的机制各不相同，本研究发现的其靶向miR-525-5p为其中之一，为TUG1在心肌损伤中的功能机制研究提供依据。[11][12]本研究发现，miR-525-5p在H/R心肌细胞中的表达异常下调，揭示了miR-525-5p可能参与心肌细胞损伤的调控。通过生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证了miR-525-5p靶向NLRC5，这可能是miR-525-5p发挥调控H/R心肌细胞损伤的机制之一。miR-525-5p在多种癌症中发挥调控作用，并作为癌症的诊断、治疗的生物标志物，但是其在心肌损伤中的功能有待深入探讨。Zhang等报道，LncRNA生长抑制特异性转录本5（growtharrest-specifictranscript5，GAS5）能够靶向miR-525-5p促进心肌梗死的发展进程，说明miR-525-5p参与心肌梗死的调控作用。[13]本研究结果显示，NOD样受体家族CARD结构域包含分子5(NLRfamily,CARDdomaincontaining5,NLRC5)在H/R心肌细胞中表达异常升高，提示NLRC5可能对H/R诱导的心肌细胞损伤具有调控作用。回复实验结果显示，过表达NLRC5部分逆转miR-525-5p对H/R诱导心肌细胞损伤保护作用。[参考文献][1]MihanfarA,NejabatiHR,FattahiA,etal.Theroleofsphingosine1phosphateincoronaryarterydiseaseandischemiareperfusioninjury[J].JCellPhysiol,2019,234(3):2083-2094.（下转第291页）2020年第26卷第3期宋厦等青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响·291·[15]胞增殖、细胞存活等生命活动。但是，青蒿素能否通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响膀胱癌T24细胞的生物学行为尚未见文献报道。在本研究中，我们发现200μmol/L青蒿素干预48h后，T24细胞中PI3K，p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平均显著降低。结果提示，调控PI3K/Akt/mTOR信号通路很可能是青蒿素抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭，并促进凋亡的信号机制之一。[参考文献][1]宫雪,刘嘉,刘屹立,等.Rab11在膀胱癌组织中的表达及临床意义[J].解剖科学进展,2018,24(2):143-145.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2016,66(2):115-132.[3]LinWF,LuJY,ChengBB,etal.ProgressinresearchontheeffectsoftraditionalChinesemedicineonthetumormicroenvironment[J].JIntegrMed,2017,15(4):282-287.[4]HuangMY,ZhangLL,DingJ,etal.AnticancerdrugdiscoveryfromChinesemedicinalherbs[J].ChinMed,2018,13:35-38.[5]YangND,TanSH,NgS,etal.Artesunateinducescelldeathinhumancancercellsviaenhancinglysosomalfunctionandlysosomaldegradationofferritin[J].JBiolChem,2014,289(48):33425-33441.[6]杨华,谭先杰.青蒿素及其衍生物的抗肿瘤特性研究进展[J].中（上接第287页）[2]高鲁方,周涛,杨列红,等.内质网应激预处理缺血再灌注心肌时糖原合成酶激酶-3β变化对线粒体通透性转换孔的影响[J].中华实验外科杂志,2019,36(7):1236-1239.[3]陈慧颖,贾晓丽,赵淑琴,等.多胺通过调节线粒体通透性转换孔在心肌缺血再灌注损伤中发挥双重作用[J].生理学报,2019,71(05):681-688.[4]TsuchiyaK.Inflammasome-associatedcelldeath:pyroptosis,apoptosis,andphysiologicalimplications[J].MicrobiolImmunol,2020,7.doi:10.1111/1348-0421.12771.[5]SallamT,SandhuJ,TontonozP.LongnoncodingRNAdiscoveryincardiovasculardisease:decodingformtofunction[J].CircRes,2018,122(1):155-166.[6]ZouX,WangJ,TangL,etal.LncRNATUG1contributestocardiachypertrophyviaregulatingmiR-29b-3p[J].InVitroCellDevBiolAnim,2019,55(7):482-490.[7]GuoC,QiY,QuJ,etal.PathophysiologicalfunctionsofthelncRNATUG1[J].CurrPharmDes,2019,27.doi:10.2174/1381612826666191227154009.[8]刘启方,黄晶,田龙海,等.microRNA-25通过HMGB1途径降低缺氧/复氧H9C2心肌细胞纤维化[J].中国免疫学杂志,2019,35(12):1416-1420.[9]WuZ,ZhaoS,LiC,etal.LncRNATUG1servesanimportantroleinhypoxia-inducedmyocardialcellinjurybyregulatingthemiR-145-5p-Binp3axis[J].MolMedRep,2018,17(2):2422-2430.[10]SuQ,LiuY,LvXW,etal.LncRNATUG1mediatesischemic国医学科学院学报,2013,35(4):466-471.[7]FarombiEO,AbolajiAO,AdedaraIA,etal.Artemisinininduceshormonalimbalanceandoxidativedamageintheerythrocytesanduterusbutnotintheovaryofrats[J].HumanExpToxicol,2015,34(1):83-92.[8]SunX,ZhengX,ZhangJ,etal.MathematicalmodelingrevealsacriticalroleforcyclinD1dynamicsinphenotypeswitchingduringgliomadifferentiation[J].FebsLett,2015,589(18):2304-2311.[9]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CACancerJClin,2016,66(2):115-132.[10]DeGeorgeKC,HoltHR,HodgesSC.Bladdercancer:DiagnosisandTreatment[J].AmFamPhysician,2017,96(8):507-514.[11]张昊,孔垂泽,辛鹏,等.PKCα和PLK1在膀胱癌中的表达与相关性[J].解剖科学进展,2019,25(6):622-625.[12]JiaJG,QinYY,ZhangLG,etal.Artemisinininhibitsgallbladdercancercelllinesthroughtriggeringcellcyclearrestandapoptosis[J].MolMedRep,2016,13(5):4461-4468.[13]FrhlichT,apcKaragzA,ReiterC,etal.Artemisinin-deriveddimers:potentantimalarialandanticanceragents[J].JMedChem,2016,59(16):7360-7388.[14]Bhaw-LuximonA,JhurryD.Artemisininanditsderivativesincancertherapy:statusofprogress，mechanismofaction,andfutureperspectives[J].CancerChemotherPharmacol,2017,79(3):451-466.[15]SaxtonRA,SabatiniDM.mTORsignalingingrowth,metabolism,anddisease[J].Cell,2017,168(6):960-976.myocardialinjurybytargetingmiR-132-3p/HDAC3axis[J].AmJPhysiolHeartCircPhysiol,2019,318(2):318.doi:10.1152/ajpheart.00444.[11]SuQ,LiuY,LvXW,etal.InhibitionoflncRNATUG1upregulatesmiR-142-3ptoamelioratemyocardialinjuryduringischemiaandreperfusionviatargetingHMGB1-andRac1-inducedautophagy[J].JMolCellCardiol,2019,133(8):12-25.[12]YangD,YuJ,LiuHB,etal.Thelongnon-codingRNATUG1-miR-9a-5paxiscontributestoischemicinjuriesbypromotingcardiomyocyteapoptosisviatargetingKLF5[J].CellDeathDis,2019,10(12):908-908.[13]ZhangY,HouYM,GaoF,etal.lncRNAGAS5regulatesmyocardialinfarctionbytargetingthemiR-525-5p/CALM2axis[J].JCellBiochem,2019,120(11):18678-18688.[14]HanF,GaoY,DingCG,etal.KnockdownofNLRC5attenuatesrenalI/RinjuryinvitrothroughtheactivationofPI3K/Aktsignalingpathway[J].BiomedPharmacother,2018,103(7):222-227.[15]MaSR,XieXW.NLRC5deficiencypromotesmyocardialdamageinducedbyhighfatdietinmicethroughactivatingTLR4/NF-κB[J].BiomedPharmacother,2017,91(7):755-766.[16]LiuZY,LiuJ,WeiY,etal.LncRNAMALAT1preventstheprotectiveeffectsofmiR-125b-5pagainstacutemyocardialinfarctionthroughpositiveregulationofNLRC5[J].ExpTherMed,2020,19(2):990-998.
