抑制素基因敲除小鼠模型的构建及表型初步分析
【摘要】 目的利用成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeat（CRISPR）/CRISPR-associatedprotein9（Cas9）]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型，并对其表型进行初步分析。方法根据抑制素a亚基的第一外显子碱基序列，设计单链向导RNA（singleguideRNA，sgRNA）识别序列，构建sgRNA表达质粒。利用T7RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9mRNA后，将sgRNA/Cas9mRNA显微注射入C57BL/6J小鼠的受精卵，通过PCR和基因测序法检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变情况。选取F2代基因敲除纯合子的雄鼠和雌鼠，分别取雄鼠睾丸和雌鼠卵巢进行观察，并进行石蜡切片和HE染色分析。结果共获得了12只F0代抑制素基因敲除小鼠，选取8号雄鼠与C57BL/6J雌鼠回交，得到F1代小鼠，再相互交配得到F2代小鼠。F2代小鼠
