型糖尿病中BMAL1调节骨髓间充质干细胞用于骨缺损修复的研究

【摘要】 目的探讨Ⅱ型糖尿病环境下,过表达生物钟基因编码芳香烃受体核转运蛋白)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化能力的影响,以及其在骨缺损修复中的应用。方法构建自发性Ⅱ型糖尿病(BMAL11Goto-KakizakiWistar(GK)大鼠模型为实验组,以同期Wistar(WT)大鼠为对照。取两组BMSCs进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶(ALP)染色及定量法、茜素红染色检测不同组BMSCs的成骨分化能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(Westernblot)检测BMAL、ALP、Runt相关转录因子(Runx-)、骨122钙蛋白(Ocn)mRNA表达量与蛋白表达水平。将GK组BMSCs根据慢病毒转染处理不同分为四组:慢病毒转染过表达BMAL组、慢病毒转染空载对照组、未转染对照组、无细胞空白对照组,分别植入GK大鼠颅骨缺损区,周获取标本,使用Micro-CT扫描标本并进行组织学分析。结果成骨诱导后,WT组ALP活性及矿化1结节数目均多于GK组;qRT-PCR