构建ECE13'UTR荧光素酶报告基因载体验证其与miR-199a-5p靶向关系
【摘要】 目的：通过构建双荧光素酶报告基因重组质粒验证miRNA-199a-5p(miR-199a-5p)与ECE1基因的靶向调控关系。方法：通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-199a-5p与ECE1基因3'UTR潜在的互补结合位点，PCR技术扩增ECE1基因3'端非翻译区，将此序列与miR-199a-5pmimics或空质粒（NC）共转染到pmirGLO-ECE1-野生型（WT）的293细胞里；将此序列突变序列与miR-199a-5pmimics或NC共转染到pmirGLO-ECE1-突变型（MUT）的293细胞里，共四组，检测四组细胞中荧光素酶活性。结果：成功构建双荧光素酶报告基因重组质粒pmirGLO-ECE1-WT和pmirGLO-ECE1-MUT。与野生型NC（4.30±0.53）组及突变型miR-199a-5pmimics组（4.465±0.3968）比较，野生型miR-199a-5pmimics组(1.686±0.4098)荧光素酶活性明显降低，P<0.05，有显著差异；突变型miR-199a-5pmimics组（4.465±0.3968）与突变型m
