siRNA沉默PIM1基因表达对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响
【摘要】 目的:探讨PIM1基因沉默对人胃癌MKN-45细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计2条针对PIM1mRNA靶序列的干扰RNA正义链和反义链及阴性对照序列，构建重组pSIREN-retroQ质粒载体，并转染胃癌MKN-45细胞。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测PIM1在mRNA水平及蛋白水平的表达。CCK-8法检测胃癌MKN-45细胞的增殖，流式细胞分析胃癌细胞的凋亡，蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase3和Caspase9的表达。结果:重组克隆通过PCR扩增及测序，证明干扰序列插入正确。与正常对照组和阴性对照组相比，两个RNA干扰组胃癌MKN-45细胞PIM1在mRNA及蛋白水平的表达量都显著降低（P<0.05），细胞增殖能力下降（P<0.05）。此外，干扰组细胞凋亡明显增多（P<0.01），Caspase3和Caspase9蛋白表达上调（P<0.01）。结论:PIM1siRNA能有效下调靶基因表达，产生特异性基因沉默效应;PIM1基因沉默显著抑制胃癌MKN-45细胞的增殖并促进其凋亡。
