去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价
【摘要】 水痘-带状疱疹病毒（varicellazostervirus，VZV）糖蛋白E（glycoproteinE，gE）是VZV亚单位疫苗的主要候选蛋白，但目前原核表达系统制备的gE蛋白以包涵体形式为主，可溶性差。本研究采用去除第1~30氨基酸序列的VZVgE胞外域基因，将其与原核表达载体pET32a连接，并转化至感受态细胞BL21（DE3）中。使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-thiogalactoside，IPTG）诱导表达，His-tag柱纯化重组gE蛋白，蛋白质印迹法（Westernblot，WB）检测其特异性。用该重组gE蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）和间接免疫荧光法检测多克隆抗体效价及特异性。结果显示，BL21/pET32a-VZVgE工程菌可以表达可溶性重组gE蛋白，纯化后纯度约为90%。WB鉴定该重组蛋白具有良好的免疫反应性。ELISA检测显示小鼠抗VZVgE多克隆抗体效价>1∶10000，间接免疫荧光实验结果显示该抗体特异性较
