稳定表达人源GRM4基因的乳腺癌细胞株的筛选及鉴定
【摘要】 目的构建重组人源GRM4基因慢病毒载体，筛选稳定表达GRM4蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法PCR扩增GRM4基因片段，扩增产物连接到带有绿色荧光蛋白GFP的慢病毒载体表达质粒中，构建重组荧光慢病毒质粒GFP-GRM4，同时以慢病毒空载体作为阴性对照组;将GFP-GRM4与包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T包装细胞中，24h后观察荧光表达情况及被感染细胞的形态;48h后收集病毒上清液，以病毒上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞，利用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达GRM4蛋白的细胞株;采用实时荧光定量PCR和Westernblot方法检测细胞系中GRM4基因的转录及蛋白表达量。结果DNA测序证实重组慢病毒质粒构建成功;重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后，获得表达GRM4的重组慢病毒;乳腺癌MDA-MB-231细胞经慢病毒感染、药物筛选后，可在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光;实时荧光定量PCR和Westernblot结果表明稳定表达
