miR-155-5p靶向核因子κB抑制蛋白E在人单核巨噬细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究
【摘要】 目的 分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用。方法 体外培养THP-1细胞,按照数量5∶1将热灭活新生隐球菌加入培养瓶内,分析0 h、3 h、6 h、9 h和12 h这5个时间点的miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化;双荧光素酶报告系统验证miR-155-5p和IKBKE 3'UTR的靶向关系;分别转染miR-155-5p mimics和IKBKE siRNA,观察在6 h miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化。结果 新生隐球菌干预THP-1细胞后,miR-155-5p表达增加,6 h达到峰值,随后逐渐下降,而IKBKE在6 h表达降低,TNF-α和IL-6的表达量随时间逐渐增加;双荧光素酶报告系统中miR-155-5p mimics作用后IKBKE 3'UT