大鼠Adrb3基因重组慢病毒干扰载体的构建及其对血管平滑肌细胞Adrb3表达的影响
【摘要】 目的构建大鼠Adrb3（rAdrb3）基因慢病毒干扰载体，筛选高效率rAdrb3基因干扰序列，观察其对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）Adrb3基因表达的影响，为进一步研究Adrb3在心力衰竭中的作用机制提供实验工具。方法设计2条rAdrb3基因shRNA寡核苷酸序列，构建慢病毒干扰质粒并进行测序鉴定。三质粒法共转染293T细胞包装慢病毒，测定慢病毒滴度。大鼠VSMC设置正常对照组（Normal组），空载慢病毒组（Lv-rAdrb3-shRNA-control组），携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体1组（Lv-rAdrb3-shRNA-1组），携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体2组（Lv-rAdrb3-shRNA-2组），感染5d后，收集细胞。提取细胞总RNA和蛋白，Real-timePCR检测rAdrb3mRNA表达，Westernblot检测rAdrb3蛋白表达。结果构建2个携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体，滴度均为2×108TU/mL。慢病毒感染大鼠VSMC72h后，感染效率可达80%。与Normal组比较，Lv-rAdrb3-shRNA-1、Lv-rAdrb3-shRNA-2组
