miR-186海绵载体的构建及其在EA.hy926细胞株中的表达
【摘要】 目的:构建微小RNA-186（miR-186）基因的海绵载体，建立稳定敲减miR-186的EA.hy926细胞株。方法:化学合成miR-186海绵体序列，并克隆到慢病毒FV040表达载体上;采用lipofectamine2000共转染FV040-miR-186-sponge载体和慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞，包装慢病毒，测定病毒滴度;FV040-control慢病毒作为对照组，FV040-miR-186-sponge作为实验组，分别感染EA.hy926细胞，筛选稳转细胞株;采用荧光定量PCR（qPCR）法检测空白对照组、FV040-control对照组及FV040-miR-186-sponge实验组中EA.hy926细胞miR-186的相对表达水平。结果:测序结果显示克隆的目的基因序列与设计的miR-186海绵体序列完全一致。在感染的EA.hy926细胞中观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FV040-control包装的慢病毒滴度为2×108TU·mL-1，FV040-miR-186-sponge组慢病毒滴度为6×108TU·mL-1;成功建立了稳定表达miR-186
