Hpd基因修饰制备高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型
【摘要】 目的利用CRISPR/Cas9技术敲除巴马小型猪4-羟基苯丙酮酸氧化酶(4-OHphenylpyruvatedioxygenase,4HPPD/HPD)制备高酪氨酸血症III型巴马小型猪模型。方法分别从质粒pGL3-U6-gRNA-PGKpuromycin和pST1374-NLS-flag-linker-Cas9中通过PCR扩增sgRNA-Hpd和Cas9体外转录用模板,接着体外转录出Cas9mRNA和sgRNA-Hpd,最后将Cas9mRNA和sgRNA-Hpd共注射入巴马小型猪受精卵的胞质内,以制备Hpd基因敲除巴马小型猪。结果胞质内共注射后,共移植20枚受精卵至2只代孕母猪。获得子代Hpd基因敲除巴马小型猪共4只。结论本研究成功制备了高酪氨酸血症III型巴马小型猪模型,将为研究酪氨酸代谢通路提供更好的模型。
