结核杆菌伽马干扰素释放试验联合NK细胞及炎症因子变化检测在肺结核诊断及预后中的应用价值分析
【摘要】 目的研究结核杆菌伽马干扰素释放试验（NK355TB-IGRAsNK201512TB-IGRAs的应用价值。方法回顾性分析600康对照67.35%和预后中的应用价值。结果TB-IGRAsROC胞以及所有细胞因子联合诊断的敏感性、特异性以及准确度均显著高于单项检测（PMIP-1α<0.05IP-10IL-8细胞水平显著低于非肺结核组和健康组（P细胞及炎症因子变化检测在肺结核诊断及预后中例，选择同期于我院体检正常的健细胞及炎症因子变化情况，评价各指标单独及联合检测在肺结核诊断例，水平以及细以及联合检测的），水平显著高于生存组，联合诊断阳性组患细胞及炎症因）。结论其中死亡组患者者死亡率（子变化可提高活动性肺结核诊断的灵敏度、准确度，以及有效反应患者预后进展，值得临床推广。IL-8、、），差异有统计学意义（PTB-IGRAs38NK165NK10.70%MIP-1α<0.05MIP-1αIL-15，差异具有统计学意义（P0.784TB-IGRAs）。个月治疗后，死亡阳性率显著高于非肺结核组和健康组，而例，非肺结核患者主要疾病为肺部感染（NK11.24%阳性率差异显著，其中肺结核组细胞水平显著低于生存组，而<0.05IP-10细胞、炎症因子水平以及IL-26.51%TB-IGRAs<0.056曲线下面积分别为、、）。肺结核患者经）显著高于阳性组（0.7130.898）。、例，非肺结核共IL-8、例（、、、、联合NK[关键词]结核杆菌伽马干扰素释放试验;[中图分类号]R446.11细胞;炎症因子;肺结核;诊断B[文献标识码][Abstract]TheclinicalvalueofTB-IGRAscombinedNKcellsandinflammatoryfactorsmeasurementinthediagnosisandprognosisofpulmonarytuberculosisCHENZhenyong1,LIQiong2,LOUSiyu1,HUANGBo1,*1.RespiratorySection2,DepartmentofRespiratoryandCriticalCareMedicine,AffiliatedHospitalofZunyiMedicalUniversity,Zunyi563006,China;2.ComprehensiveWard,AffiliatedHospitalofZunyiMedicalUniversity,Zunyi563006,China*CorrespondingAuthor:HUANGBo,E-mail:13985229382@139.comToevaluatetheclinicalvalueofTB-IGRAscombinedwithNKcellsandinflammatoryfactorsmeasurementinthediagnosisandprognosisofpulmonarytuberculosis,totalof600patientswithsuspectedtuberculosisadmittedtoourhospitalwereretrospectivelyanalyzed,and200healthyindividualsconfirmedbyphysicalexaminationinthesameperiodwereselectedashealthycontrols.AllsubjectsweretreatedwithTB-IGRAS,andthechangesinNKcellsandinflammatorycytokinesweredetected.Amongthe600patients,thereare355patientswithpulmonarytuberculosisand245patientswithnontuberculosis,inwhich,themaindiseasewaspulmonaryinfection(67.35%).ThelevelofIP-10,MIP-1α,IL-8andTB-IGRAspositiverateinthetuberculosisgroupwassignificantlyhigherthanthatinthenon-tuberculosisgroupandthehealthygroup,whiletheNKcelllevel<0.05).Thesensitivity,wassignificantlylowerthanthatinthenon-tuberculosisgroupandthehealthygroup(specificityandaccuracyofthecombineddiagnosisofPTB-IGRAs,NKcellscytokineswereallandsignificantlyhigherthanthatofsingletest(<0.05).TheareaundertheROCcurveofIL-8,MIP-1αand,,E-mail:13985229382@139.com医学科呼吸二病区（陈镇永，娄思玉，黄波），遵义医科大学附属医院呼吸与危重症563006作者单位:综合病房*P（李琼）通信作者:黄波2019103510IMMUNOLOGICALJOURNALVol.35No.10Oct.2019免疫学杂志年月第卷第期917··combineddiagnosiswere0.713,0.784and0.898,respectively(<0.05).NKcelllevelsofpatientsinthedeathgroupweresignificantlylowerthanthoseinthesurvivalgroup,whilethelevelsofIL-2,IL-8,IL-15,IP-10andMIP-1αweresignificantlyhigherthanthoseinthesurvivalgroup.Themortalityrateofpatientsinthecombinedpositivediagnosisgroup(11.24%)wassignificantlyhigherthanthatintheTB-IGRAspositivegroup(6.51%)(<0.05).Takentogather,TB-IGRAscombinedwithNKcellsandinflammatoryfactorsdetectioncouldimprovethePsensitivityandaccuracyofactivetuberculosisdiagnosis.PIGRAs;NKcell;Inflammatoryfactor;Pulmonarytuberculosis;Diagnosis[Keywords]IGRAsIFN-γT结核病是我国发病率、病死率最高的慢性传染[1-2]。性疾病，其中每年引起死亡的人数高达随着耐多药结核病的蔓延，导致治疗难度的增加，因此寻找有效的结核病诊断治疗手段对结核病的防控至关重要。结核杆菌伽马干扰素释放试验（TB-万170Tγ-，（T细胞释放），通过检测IFN-γ淋巴细胞，从而促进）主要是通过于体外采用结核特异抗原诱导干扰素活化患者（含量从而进行判断，单分子检测易受机体其他因素干扰，仅能检测到结核杆[3-4]。菌的感染，使得敏感性低，且难以区分感染状态已有文献报道显示结核患者的外周血淋巴细胞在受到结核特异性抗原诱导后可大量分泌多种炎性因子，如:干扰素诱导蛋白10interferon-inducibleinterleukinmacrophage[4-5]IP-10protein10ILinflammatoryprotein1alphaTB-IGRAs）、多种白细胞介素（（）等MIP-1α），以及巨噬细胞炎症蛋白，因此在IFN-γ诊断基础上联合检测多种炎症因子，可弥导致的假阳性或者假阴性。同时补单独检测[6]，结核分枝杆菌侵入肺部组织后可文献报道显示细胞水平，由导致机体免疫功能受损，从而降低于细胞与肺结核的发展和转归密切关联，因此可作为诊断指标，进一步分析联合检测对于肺结核诊断及预后价值，现报道如下。NKNKα，，年X月至241201720151资料与方法121.1一般资料回顾性分析359射线及细菌学检查确诊为肺结核月我院收治的疑似肺结核患者例，平均年龄为（例，女性年例，其中男性）岁，所例例，其中非肺例、慢性阻塞性例。选择同期于我院体检正常的健康对照组受试者的性别、年龄比较差异不明显）。研究项目通过医院伦有患者行（研究组），非肺结核患者（对照组）结核患者为肺部感染肺疾病202003>0.05（P1260055.03±9.3424573），具有可比性（表例、肺炎355152例。1表1313）入组前基线资料比较。排除标准:2001[7]2理委员会审批，患者知情并同意本研究的整个过程。纳入及排除标准:符合中华医学会结核病学分年颁布的《肺结核诊断与治疗指南》诊断标）心、肝、肾等重要脏器功能严重）伴随免疫系统疾病，甲状腺疾病、糖尿病、系个月内服用激素或免疫会准障碍;统性红斑狼疮者;抑制剂，病历资料不完整，不配合治疗、检查等。Tab1ThecomparisonofbaselineinformationGender(male/female)210/145149/96120/80>0.05XP(yearsold)55.24±9.6454.84±9.8155.04±9.52>0.05PPhthisisgroupHealthgroupWithouttuberculosisgroup1.2实验方法所有受试者均接受射线及细菌学X检查以确诊患者肺结核类型（活动性、潜伏性），其中射线及细菌学检查为阳性，且伴随盗汗、低热、咳n355245200GroupAgeTB-IGRAs嗽、咳血等中毒症状则判断为活动性肺结核。、、N离心，随后1ml/管，轻柔混匀后于内将全血平均分装到待测。按照结核感染4ml×21h24h37℃3000r/minPT10minT-80℃MULTISKANFCINF-γ检测:所有受试者入组后，于清晨空管，采用肝素抗凝得全血标培养恒温培养箱中，腹取外周静脉血本，其中一管于管中，垂直放置并培养取上层血浆保存于细胞检测试剂说明书（北京万泰生物药业股份有限酶标仪（美国公司）进行操作，使用伯乐）进行检测、，则表明结。另一管抗14.0pg/ml[8]FACSCalibur果为阳性，判断为该患者为结核感染凝血（管，一管采用37℃16~流式细胞仪（50min在含有FCMNK2000r/minINF-γ2特异抗原的培养管中于TG16-80℃4mlTB，随后放入离心仪（公司）检测外周血含量，检测波长IMARK630nm细胞。另一管450nm2ml/含量超过24h。其中）分装BD孵育管，离心）待测。采用，检测各取上层血浆保存于918··免疫学杂志201910年月第35卷第10期CBAcytometricbeadarrayMIP-1α2细胞因子含量。研究拟通过流式微球阵列法（）检测活动性感染者外周血经结核特异性抗原剌激后、阳性，判定为肺结核患者。。以各水平均值为临界值，高于该值则为IL-15IP-10IL-8IL-、，、、6NK细胞及炎症因子差异。其中确诊为肺结核的患者采用标准疗法治疗个月后，记录患者的生存情况，并统计分析生存、死亡患者治疗前1.3统计学分析采用据。其中计量资料以均数计数资料以（n比较采用单因素方差分析，绘制价值，采用积。PSPSS19.0±软件分析所有数χ2标准差表示，采用t检验，组间计量资料曲线判断诊断曲线下面/%Hanley-McNeil3ROCROC认为差异具有统计学意义。）表示，采用<0.05方法比较检验，2结果6002.1245测结果比较23组受试者TB-IGRAs、NK细胞、炎症因子检例，非肺结核例，肺165例，其中肺部感染例，肺占位性病变3TB-IGRAsNK例患者中肺结核24355IMMUNOLOGICALJOURNALVol.35No.10Oct.2019333NKIP-1023TB-IGRAsNK2MIP-1α、。、组例。），见表IL-8<0.05例，支气管扩张脓肿水平差异显著，其中肺结核组患者细胞、炎症因子、阳性率显著高于非肺结核细胞水平显著低于非肺结核组和水平以及组和健康组，而健康组（P2.2单项或联合检测诊断肺结核诊断效能分析对肺结核诊断效能分析发现细胞以及所有细胞因子联合诊断的敏感性、特异性以及准确IL-8度均显著高于单项检测（P80%TB-IGRAs<0.05以及联合检测的诊断真确率均超NK3ROC），见表），见图<0.05曲线作图，，联合检测积明显高于种检测方式进行、过曲线下面355单独诊断，差异具有统计学意义（P3810.70%2.3肺结核患者预后分析IP-10MIP-1αIL-2个月治疗后，死亡11.24%。例肺结核患者经），其中死亡组患者、水平显著高于生细胞水平显著低于生存组，联合诊断阳阳性。存组，而性组患者死亡率（组（IL-8NK6.51%TB-IGRAs4），差异有统计学意义（PIL-15）显著高于<0.05），见表MIP-1α30.713ROC1、，对这0.7840.898例（、表65。、、、、、表组受试者细胞、炎症因子检测结果比较Tab2ThecomparisonoftheTB-IGRAstest,NKcellsandinflammatorycytokinesamongthethreegroupsHealthgroup16.33±3.84（n53.56±5.221.26±0.714.39±1.63Non-tuberculosis11.33±3.84（n123.54±10.822.04±0.645.68±1.72Phthisis=35513.66±4.21（n128.82±15.462.88±1.043.60±1.38=245））（）=200）（）IndexNKcell/%ng·ml-1IL-2/IL-8/ng·ml-1IL-15/ng·ml-1ng·ml-1IP-10/9108.39±1365.45MIP-1α/ng·ml-11122.14±203.46TB-IGRAspositive15042.25%Alldataarerepresentedasmean±SD.（3））（（（））6133.42±412.63673.6±82.523413.87%（）4132.62±461.87503.6±71.22147.00%（）P<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001表Youdenindex单项或联合检测诊断肺结核诊断效能分析Tab3DiagnosticefficacyanalysisofsingleorcombineddetectionforpulmonarytuberculosisNegativepredictionrate0.650.640.780.730.670.790.93MethodNKcelltextIL-2textIL-8textIL-15textIP-10textMIP-1αtextCombinedtextCombinedtestpositiveindicatesTB-IGRAs,NKcellsandallcytokineswereidentifiedaspulmonarytuberculosis;Positivepredictionrate0.780.740.810.820.790.850.97Sensitivity74.65%a76.06%a85.92%a80.85%a75.21%a85.35%a95.21%specificity68.98%a62.04%a71.43%a75.10%a71.43%a78.37%a95.10%Positive2.412.003.013.252.633.9519.440.470.460.660.590.490.680.90likelihoodratioNegativeAccuracylikelihoodratio72.33%a0.370.3970.33%a0.2080.00%a0.2678.50%a0.3573.67%a0.1982.50%a0.0595.17%<0.05,comparedwitha)Pcombineddetection.免疫学杂志201910年月第3510期卷第IMMUNOLOGICALJOURNALVol.35No.10Oct.2019919··1ROCFig1AnalysisofROCcurve曲线分析图表Tab4Thecomparisonofcytokinelevelsinpatientswithactivepulmonarytuberculosisunderdifferentsurvivalconditions肺结核患者不同生存状态下各细胞因子水平比较4IndexNKcell/%ng·ml-1IL-2/IL-8/ng·ml-1IL-15/ng·ml-1IP-10/ng·ml-1ng·ml-1MIP-1α/（（（（（））））））Survival=31714.86±3.68（n128.43±22.693.26±1.124.20±1.2310936.69±2141.611163.63±215.64表）预后分析307casesSurvival=31728793.49%（n88.76%3005Tab5PrognosticanalysisDetectionmethodTB-IGRAspositiveCombinedpositivediagnosis338casesDeath=38206.51%（n11.24%382=4.390=0.036χPcytokineswereidentifiedaspulmonarytuberculosis.CombinedtestpositiveindicatesTB-IGRAs,NKcellsandall））（）（）（）（）（）（3讨论1/390010%万的新近感染者，且全球超过的潜伏型结核病会发展为活动型结核病结核病作为极为严重的的全球性公共卫生问题，主要由结核分枝杆菌侵入机体而引起，研究显示全球每年有约的人有结核分枝杆菌感染史，若诊断治疗不及时，约[9-11]。结核病临床表现主要为肺部感染，伴随乏力、低热、潮热、咳嗽、盗汗等临床症状，容易被其他病症所掩是细胞免疫盖，从而增加诊断、治疗难度的体外诊断技术，目前已被美国疾病预防控制中心[13]，推荐为卡介苗接种地区结核病筛查的首选方法淋巴细胞是结核感且由于结核特异抗原诱导活化IGRAT。[12]）Death=3812.27±3.79（n144.56±26.654.38±1.014.97±1.4112362.60±2242.421305.58±221.46/χ22.509t4.0615.8833.5883.8593.824TB-IGRAsIFN-γP0.0130.0000.0000.0000.0000.000IFN-TTB-染的可靠标志，使得[8]用逐步广泛，但是γ在结核病诊断中的应释放实验只能够检测分子，易受到机体状态、伴随疾病已经饮食等因素IL-MIP-1αNKIP-10、、IL-2IP-10IGRAsIL-8IL-15NKTB-IGRAs的干扰，导致敏感性较低。活动结核的外周血中淋巴细胞收到核特异抗原诱导活化后可分泌大量的细胞因子，如、诊断基础上联合评估患者等，因此在细胞及炎症因子变化情况，可进一步弥补诊断的不足，降低机体其他因素干扰的风险，从而增加诊断准确性，指导治疗方案的正常、及时开展，降低死亡风险。细胞及炎症因子水本次实验中组受试者的3、、T[4,14]），NKIP-10TB-IGRAs8平差异显著，其中肺结核组患者<0.05、组（P康组，与李晓非等疫反应增强，导致患者刺激后，可大量分泌细胞因子，如阳性水平显著高于非肺结核组和健康细胞水平显著低于非肺结核组和健报道一致，即肺结核患者的免淋巴细胞收到核特异抗原、等，全血结核特异的以上各细胞因子检测可以作为结核病患者的辅助诊断。同时通过单项或联合检测诊断活动性肺结核诊断效能分析发现，细胞以及所有细胞因子联合诊断的敏感性、特异性以及真确率显著高于单项检测。以及联合检测的诊断准确率均超过TB-IGRAsMIP-1αMIP-1αIL-15IL-8IL-2IL-8NK、、、、、920··免疫学杂志80%335月第10期卷第ROC2019年10ROC0.898、、、、例（，对这阳性组（IL-80.713<0.05）显著高于IL-156.51%11.24%TB-IGRAsTIFN-γ种检测方式进行、6IL-2NK个月治疗后，死亡、0.784TB-IGRAs3553810.70%MIP-1αIP-10曲线作图，曲，联合检测积明显线下面分别为高于单独诊断，差异具有统计学意义（P），说明诊断可显著提高结核多种细胞因子联合例活动性肺结核患者诊断的敏感性和特异性。），其中死亡组患经者水平显著高于生存组，表明死亡组患者具有更高的细胞因子水平。细胞显著低于生存组，联合诊断阳性组患者死亡率（），分析认为患者外周血淋巴细胞收到核特异抗原刺激后，可产生更多的，以及免疫功能更受损更严重，导致细胞水平显著降低，与孙巍等人报道一细胞在结核病发病不同阶段水平的变化致与肺结核的发展和转归密切关联，急性期细胞大幅降低表明患者病情存在重症化倾向。当然，此次试验考察的细胞因子大多由亚群分泌或者与亚群密切相关，然而机体免疫功能的平衡是多种免疫细胞亚群（）共同调控的结果，因此仍需进一步考察其他细胞亚群在肺结核中的免疫调控作用，以及细胞亚群之间的相互关系。细胞及炎症因子变化可提高肺结核诊断的灵敏度、准确度，以及有效反应患者预后进展，值得临床推广。Th1Th17TB-IGRAsNKNKT综上所述，NKTTregTh1Th2Th1NK联合，、、及[15][参考文献].，[J].2017免疫学杂志，tuberculosis肺结核患者外周血低密度黄自坤，姚芳苡，邓亚婷，等粒细胞检测的临床意义33(1):40-45.[2]EshetieS,GizachewM,DagnewM,etal.Multidruganditsresistantassociationwithprevioushistoryofanti-tuberculosistreatment:asystematicreviewandmeta-analysis[J].BMCInfectDis,2017,17(1):219-230.[J].inEthiopiansettingsAIDS2015,44(11):赵磊，薛剑，杜君晓，等结核感染患者中的诊断价值干扰素释放试验在重庆医学，[3]合并.1484-1486.[1][4]李晓非，黄山，梁桂亮，等性结核与潜伏性结核鉴别诊断的预测价值分析细胞因子联合检测对活动中国[J]..IMMUNOLOGICALJOURNALVol.35No.10Oct.20192016,26(20):34-39.[6][7][8]现代医学杂志，[5]AabyeMG,LatorreI,DiazJ,etal.Driedplasmaspotsinthediagnosisoftuberculosis:IP-10releaseassayonfilterpaper[J].EurRespirJ,2013,42(2):495-503.T[J].蔡灵芝，何丽波，林宇航，等杆菌抗原特异性多能征中华医院感染学杂志中华医学会结核病学分会中华结核和呼吸杂志，陶叶海，杨小林，金法祥，等试验在结核病诊断中的应用研究志，2017,27(18):4081-4084.2001活动性结核患者结核分枝淋巴细胞细胞因子的分泌特.,2019,29(2):179-183..24(2):5-9..T[J].淋巴细胞γ-肺结核诊断和治疗指南干扰素释放中华医院感染学杂[J].[9]KhanN,VidyarthiA,JavedS,etal.Innateim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