利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯
【摘要】 目的:以大肠杆菌为底盘细胞，利用合成生物学手段导入外源杂合蒎烯合成代谢途径，构建高效合成蒎烯的微生物工厂。方法:将来源于酵母和粪肠球菌的异源杂合甲羟戊酸（MVA）代谢途径和来源于北美巨冷杉的牻牛儿焦磷酸合酶（GPPS）和蒎烯合成酶（PS）基因序列共同导入大肠杆菌，构建催化蒎烯合成的大肠杆菌工程菌。首先优化合成GPPS、PS基因，再分别以pETDuet-1和pET-24a（+）载体为基础构建GPPS、PS共表达和融合表达载体，并分别转化大肠杆菌获得工程菌E.hzh01和E.hzh02，摇瓶培养后利用GC-MS技术检测E.hzh01和E.hzh02的蒎烯产量。进一步获取MVA代谢途径相关酶基因mvaE、mvaS、ERG12、ERG8、ERG19、IDI序列，分别利用多顺反子模型和Bio⁃Brick方法构建2种不同方案的异源MVA代谢途径，再将异源MVA代谢途径和GPPS、PS融合表达基因共同转化大肠杆菌，构建完整蒎烯合成代谢工程菌株E.hzh03和E.hzh05。结果:摇瓶培养E.hzh01和E.hzh02的蒎烯产量分别为0.85和1.86mg/L，结果表明融合表达更有利于蒎烯的合成。E.
