牛副流感病毒3型HNex蛋白表达及其多克隆抗体的制备
【摘要】 本研究旨在获得牛副流感病毒3型(BPIV3)的HNex蛋白及其多克隆抗体&以提取的BPIV3细胞毒的RNA为模板，利用RT-PCR方法扩增包含血凝素神经氨酸酶(HN)的基因片段，然后以此为模板扩增编码HN蛋白膜外区片段(HNex基因)，并进行氨基酸序列测定。将HNex基因插入克隆载体pEASY-BluntSimple中，经双酶切连接至pET-30a(_)表达载体中，构建重组原核表达载体pET-30a-BPIV3-HNex,转化大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS感受态细胞IPTG诱导后，用SDS-PAGE和Westernblotting方法鉴定表达产物&经亲和层析方法纯化的HNex蛋白作为免疫原，制备兔抗BPIV3-HNex多克隆抗体。结果显示，本研究成功克隆BPIV3HNex基因&原核表达蛋白结果表明53ku处有特异条带出现，并且可以与鼠抗His发生特异性免疫反应&免疫兔的血清中BPIV3HNex抗体效价为1:819200&Westernblotting结果表明，制备的兔抗BPIV3HNex多克隆抗体能与BPIV3蛋
