蒙药山沉香护肝、抗氧化活性部位研究
【摘要】 目的研究蒙药山沉香不同提取物护肝、抗氧化作用，筛查山沉香具有护肝、抗氧化作用的活性部位。方法以浓度为乙醇回流提取山沉香粉末浓缩得到乙醇提取物浸膏，用水分散制成混悬液后按极性从小萃取，减压浓缩干燥后称质量用于药效学实验。将到大依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇按比例只雄性昆明种小鼠随机分成空白组（羧甲基纤维素钠花生油）、阳性对照组（联苯双酯）、山沉香乙醇部位提取物组、山沉香石油醚部位提取物组、山沉香乙醚部位提取物组、山沉香乙酸乙酯部位提取物组、山沉香正丁醇部位提取物组，每组次，连续灌胃）造成急性肝损伤模型，空白）、谷草转氨酶）含量，并观察肝组评分。结果与空白组比较，模型组小鼠体型偏瘦，毛发黯淡无含量明显升高）;模型组小鼠肝组织外观呈暗棕色，体积增大;病理切片表现）。与模型组比较，SOD含量明显降低（P<）含）。结醇提物的乙酸乙酯提取物组注射等量花生油。（织形态外观、切片病理特征及对其进行光且较稀疏，灵活度下降，容易聚堆;血清（P<为肝小叶中央静脉周围出现凝固性坏死、肝索肝窦排列不整齐山沉香乙醇提取物组和乙酸乙酯提取物组小鼠毛色光泽，体型较为丰满;血清0.01AST评分明显升高（P<0.010.01、（P<95%评分明显降低（P<100.1%CCl4-GPx），量明显升高;且该组肝组织形态外观与空白组接近，病理损伤有明显改善，论蒙药山沉香具有护肝作用，而且可通过抗脂质过氧化来保护肝脏，山沉香是其护肝、抗氧化的活性部位。关键词:山沉香;乙酸乙酯提取物;护肝;抗氧化;活性部位中图分类号:doi:A10.19378/j.issn.1003-9783.2020.03.006IshakALT0.01）;山沉香乙酸乙酯提取物组小鼠肝匀浆0.050.01（P<03-0281-06）、超氧化物歧化酶（1003-9783含量明显升高（P<含量明显降低（P<含量明显降低（P50%1.按试剂盒说明测定肝组织中。1.5.4肝脏组织形态学观察肉眼及显微镜下观察肝脏外形、颜色。1.5.5肝脏病理学观察从福尔马林固定液中取出肝脏，剪每个样本相同位置的肝大叶纵向切片和肝小叶横向切片进行脱水、包埋。冷却后制备肝组）染色后晾干，置织切片，烘干后用苏木精于显微镜下观察病理切片并采集图像。根据评，对不同损伤特征:门管区周围或周围间隔分系统区交界面肝炎（碎片状坏死）、融合性坏死、局灶性（斑状）溶解性坏死，凋亡及局灶性炎症、门管区炎症，进行系统性评分。门管区周围或周围间隔区交界面肝炎（碎片状坏死）:轻微（局灶性，中等（局灶性，大多数门管少数门管区）;区）;的门管区及间隔区）;融合部分区域偶多发性全小叶或多发性小局灶性（斑状）溶解性坏死，凋亡及局灶个坏死区或更无;倍个轻度，部分中见门管区门管区叶坏死。性炎症:少;每视野下有以上坏死区。4./或所有门管区;度1.6统计学处理方法采用统计软件进行s）表统计分析。计量资料结果以均数示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用0.-C.0.×105~10D.个坏死区;每门管区炎症:P-CP-C×10严重（连续性，无;SPSS16.0±中度，部分或所有门管区;每倍视野下有×10103.的门管区及间隔区）。局灶性融合性坏死;严重，所有门管区;严重，所有门管区。2.4.3×100.2~44.大多数区域倍视野下有倍视野下有个坏死区;中心静脉（中心静脉（标准差（x性坏死:区坏死;区坏死;）桥接;）桥接;4.35.3区坏死区坏死无;B.6.1.每3.2.2.3.-11.++3.±3SNK-0.05q检验。P<为差异有统计学意义。2结果2.1模型复制后一般情况观察小鼠模型复制前皮毛亮白且光滑，浓密舒顺，活动迅速敏捷，眼睛圆而发亮，大便呈黑褐色颗粒状。模型复制后，各组小鼠均有不同程度的精神状态萎靡，活动能力明显下降，且聚堆现象明显。其中，以模型组小鼠最为明显，表现为毛发稀疏且杂乱，体型骨感消瘦，反应迟钝并且行动不敏捷，眼神黯淡无光。联苯双酯组、山沉香乙醇提取物组和山沉香乙酸乙酯部位组小鼠经肉眼观察外观上均无明显差异，毛发较为浓密，毛色光泽，体型较为丰满，活动快捷灵敏，眼1睛灵动明亮。山沉香各提取物组小鼠皮毛较显暗淡，体型稍偏瘦，毛发密度比空白组稀疏，行动也较空白组小鼠稍显迟钝。2.2对急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量的影响AST表含量明显升高（P<），表明急性肝损伤模型复制成功。与模型组比较，山沉香乙醇提取物组与乙酸乙酯提取物组），山沉香其他溶剂提取物组无明显变化（P>显示，与空白组比较，模型组血清含量明显降低（P0.010.01）。±表3山沉香醇提物不同极性溶剂提取物对CCl4致急性肝损伤小鼠肝组织Ishak评分结果（xlivertissueIshakscoresofextractsofTable3Pathologicaldifferentpolarsolventsfromalcoholextract±onmicewithacuteliverinjuryinducedbyCCl4（x=10=10s，n）Syringapinnatifolia/剂量（组别空白组模型组联苯双酯组乙醇提取物组石油醚提取物组乙醚提取物组乙酸乙酯提取物组正丁醇提取物组注:与空白组比较，3讨论H2O2氧化损伤具有保护作用，为保护心肌、抗细胞氧化的活性部位。本研究为明确山沉香护肝、抗氧化药理学作用及其护肝、抗氧化活性部位，考察了山沉香乙醇提取物及其石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等不同极性部位抗伤作用。CCl4致小鼠急性肝损95%[17]P450联苯双酯是治疗病毒性肝炎和药物性肝损伤引起转氨酶升高的常用药物，所以选择此药作为阳性药。CCl4是一种典型的肝脏毒性物质，作用机制复CCl4进入肝细胞后，经过细胞色素表明其与氧化应激和脂质过氧化反应有酶代CCL3·）和过氧化三氯OOCCL3·），这些自由基与肝细胞膜、内杂，研究关:当谢激活，产生三氯甲基自由基（甲基自由基（质网和线粒体上的磷脂分子发生共价结合，引发脂质过氧化反应损害膜的结构和功能。肝细胞膜的结构与功能损伤后，胞内的转氨酶溢出，，这在一定程度上反映了肝使血浆细胞的损伤程度，因此血浆升高被认为是判断急性肝损伤严重程度的重要指标。ALTASTALTALTASTAST升高、、、[18]脂质过氧化会引起正常生理过程的失控，导致生理功能紊乱、抗病能力下降、诱发并加速氧自由基对生物膜的侵害，造成神经、器官、内脏等损伤。脂质过氧化形成的是脂质过氧化反应的终产物和重要指标，也是显示细胞氧化程度，病变进程的指示指标。人体内氧化与抗氧化是一个动态平衡的MDA[19]g·kg-1）--0.150.650.650.650.650.65评分s，n）Ishak0.1±0.3212.5±2.46##12.7±0.9510.9±1.20*13.2±2.2013.0±1.635.8±1.48**11.8±1.550.05**，P<0.010.01##P<;与模型组比较，*P<[15]山沉香为木犀科丁香属植物，文献报道，丁香属植物具有抗菌消炎、抗氧化、护肝利胆、退热等广泛的药理学作用;赵小静等研究结果提示，山沉香提取物乙醚部位和乙酸乙酯部位对大鼠乳鼠心肌[16]TraditionalChineseDrugResearch&ClinicalPharmacologySODGPx[6].2020March，，Vol.31No.3百里香精油提取、抗氧化活性、护肝作用及其应用的研究286··、）是SODCCl4致肝细胞损伤CCl4损伤造成的自由基对肝细胞破坏，过程，肝脏中的主要抗氧化酶系（包括能够抑制氧化损伤的第一道防线。时自由基大量增加，是体内主要的抗氧化防御活性物质，它可对抗与阻断因氧化对细胞造成的损害，能阻止因此其活性高低是衡量机体抗氧化能力的重要因是以半胱氨酸、谷氨酸与甘氨酸为原料的素多肽物质，是的底物，具有多种生理功能，解毒是其功能之一，其对脂自由基及脂质过氧化自由基等基团具有较强的清除作用。活性高低直接影响的解毒功能GSHGSHGPxGPx。。[20][21]、ALTASTSODIshakGPx本研究结果显示，山沉香乙酸乙酯提取物组可以含量，改善肝组织评分，还可降低肝匀浆和明显降低小鼠血清中病理损伤，降低含量。由此说明，山含量，升高肝匀浆沉香具有较确切的护肝作用，而且是通过抗氧化应激、减少自由基、增加抗氧化酶系来保护肝脏，山沉香醇提物的乙酸乙酯提取物是其护肝、抗氧化的活性部位。MDA95%参考文献:[1][J].查报告中国民族医药杂志，，（）:.2007.13641-41.[J].曾孝杰，王国才，吴霞，等山沉香化学成分研究中草药，2013131721-1725.，（）:禹玉洪蒙药山沉香挥发油的化学组分研究中国化学会连国际色谱学术报告会和展览会文集大连:中国化学会，:[C]//...2007大168-170.苏国柱，陈洁，曹愿，等蒙药山沉香的化学成分和药理活性研究进展中国中药杂志，奥乌力吉，王青虎，王秀兰，等山沉香中个新木脂素的提取与结构解析中草药，，（）:.201540（）:224333-4338.3790-793.，.744201344.[J].[J].[2][3][4][5]西安:陕西师范大学，2018.2018.刘星[D]..王菲菲[D]..[7][8][9][10][11][12][13][14][15][16][17][18][19][20][21]环烯醚萜苷及酯类成分基于抗氧化应激的生物活性研究北京:北京中医药大学，杨琳，梁雪琰，赵洪海，等护肝片对作用及机制研究江西中医药大学学报，[J].CCl4急性肝损伤小鼠肝保护80-83.[D].201729）:1，（杨柳三种中药提取多糖及其复合多糖抗氧化作用研究广州:广东药科大学，2017.胡凤娇，宋文杰，王张，等四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型造..[J].20189，模要素及中医药防治的数据挖掘研究中药与临床，5（）:34-3744.，.[D]..[D].2014.CCl42017.金钟沙棘叶黄酮提取物体内外抗氧化活性、应用与护肝作用的研究哈尔滨:东北农业大学，王馨云五味子叶粗木脂素对急性肝损伤的保护作用机制及应用研究锦州:锦州医科大学，..[J].[J].陈玉胜，陈全战大豆水提物对四氯化碳诱导的肝损伤小鼠肝脏抗氧化活力的影响大豆科学，CCl4陈冬雪，陈亮甘草多糖对诱导急性肝损伤模型小鼠的保护201627101322-1325.作用及其机制研究中国药房，，（）:2015342，（）:341-344.于陶钧，王立波，吴立军丁香属植物化学成分及药理作用研究442168-170.进展安徽农业科学，，（）:马加庆，云宇，后文俊，等三七总皂苷对药物性肝损伤小鼠的.2016.保护作用中国实验方剂学杂志，，（）:20131923246-249.[D].赵小静蒙药山沉香化学成分及生物活性初步研究武汉:华[J].2011.[J]...中科技大学，华雨薇[D].究南京:南京农业大学，江文易，黄涛，李芸达，等亚麻子提取物对四氯化碳致小鼠急2015332426-[J].中华中医药学刊，，（）:性肝损伤的保护作用428.李国栋，陈园园，王盼，等野菊花中萜类和黄酮类化合物保肝2013243510-3514.[J].作用研究中草药，，（）:刘斯琪，赵永峰，高明阳，等茵陈蒿汤复方配方颗粒、单味配方颗粒和传统汤剂对四氯化碳致小鼠肝损伤模型的比较中国2017235124-129.实验方剂学杂志，，（）:[J].2016...44.（编辑:修春）阿拉嘎，图门乌力吉，陈苏依勒贺兰山丁香（山沉香）的资源调蓝莓叶多酚抗氧化活性及其降压、降脂、护肝作用的研
