FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响
【摘要】 目的:探讨FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法:收集2017年6月-2018年6月于我院接受手术治疗的87例乳腺癌患者癌组织及其距离癌组织超过2.5cm处的癌旁组织，另收集同期因良性乳腺肿瘤接受手术的34例患者的病变组织，免疫组化检测FRY蛋白的表达情况。将FRY的表达与乳腺癌的相关临床病理指标进行相关性分析。构建rAAV9-FRY过表达载体和对照rAAV9-FRY-NC，转染人乳腺癌细胞株MCF7，实验分为正常组（细胞常规培养，不进行干预）、对照组（细胞转染rAAV9-FRY-NC后，常规培养）、实验组（细胞转染rAAV9-FRY后，常规培养）;EdU标记实验、[收稿日期]2019-11-27[修回日期]2019-12-23[基金项目]昆山市科技计划项目（编号:SYSD2018029）[作者单位]昆山市第二人民医院，江苏昆山215300[作者简介]石国建（1979-），男，江苏南通人，副主任医师，研究方向:乳腺癌诊断治疗，乳房重建。E-mail:t0djq3@163.com[通讯作者]郭斌（1981-），男，江苏泰州人，副主任医师，研究方向:乳腺癌，甲状腺癌诊治。·8433·石国建，等FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响吖啶橙（acridineorange，AO）/溴化乙锭（ethidiumbromide，EB）双染法、Transwell小室、裸鼠肿瘤异种移植模型、Westernblot检测各组MCF细胞的增殖、凋亡、迁移、在裸鼠体内增殖与肺转移的情况、FRY和神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP1）表达的水平。结果:免疫组化结果显示，FRY在癌旁组织中阳性率最高，FRY的阳性表达在良性肿瘤中明显高于恶性乳腺癌组织（P<0.05）。FRY的阳性表达在乳腺癌的不同分级具有统计学差异（P<0.05），不同年龄以及TNM分期的FRY表达比较差异无统计学意义（P>0.05）;而肿瘤直径和浸润深度与FRY的阳性表达相关（P<0.05）。与正常组和对照组相比，实验组MCF7细胞的EdU阳性细胞比例、迁移能力、移植瘤的瘤体重量、瘤体肺脏转移的病灶比例及NRP1的表达明显下降;细胞凋亡率、FRY的表达明显上升;差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:FRY在乳腺癌组织中表达下调，在乳腺癌细胞中FRY特异性结合NRP1来抑制细胞的增殖、迁移，并促进其凋亡。[关键词]FRY蛋白;乳腺癌;增殖;迁移;凋亡[中图分类号]R737.9[文献标识码]ADOI:10.3969/j.issn.1672-4992.2020.19.015[文章编号]1672-4992-（2020）19-3347-07作为临床最常见的严重危害女性身心健康的恶性肿瘤，乳腺癌（breastcancer）具有发病率高、侵袭范围广、转移速度快、致死率高的特点[1]。目前乳腺癌早期的治疗以外科切除辅以药物治疗能达到理想疗效，而乳腺癌晚期大多采用手术与化疗相辅助的手段，但是术后再次复发以及癌细胞的不可控性转移是导致患者死亡的最重要的因素之一[2]。随着临床分子药理学以及药物基因组学的发展，与癌细胞的恶性侵袭、转移相关的分子研究逐步将乳腺癌的诊断、治疗水平提高[3]。研究证实[4]许多重要的基因参与乳腺癌的发生、发展以及恶性转移。ZhangR等[5]研究证实高尔基体膜蛋白1（golgimembraneprotein，GOLM1）通过影响基质金属蛋白酶-13（matrixmetalloproteinase-13，MMP-13）的表达来增强乳腺癌细胞的增殖和转移。WangY等[6]临床研究表明在乳腺癌患者中p53蛋白能明显调控原癌基因PRR11的表达。FRY基因是广泛存在真核生物中染色体上，该基因是果蝇FURRY基因的同源基因，研究表明[7]FRY基因能够影响癌细胞的增殖与侵袭。LeS等[8]研究证明人FRY基因的表达水平与乳腺癌的病理进程密切相关。WuY等[9]研究发现FRY在乳腺癌中表达异常，并伴随着神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP1）异常表达的情况出现。本研究通过对临床上乳腺癌组织标本以及乳腺癌细胞株的研究，来探讨FRY对乳腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其作用机制，以期能为乳腺癌的治疗提供新的靶向位点。1材料和方法1.1组织标本收集2017年6月-2018年6月于我院接受手术治疗的87例乳腺癌患者癌组织及其距离癌组织超过2.5cm处且经病理学证实为正常组织的癌旁组织（患者年龄21~72岁，中位年龄46岁），根据美国国立综合癌症网络指南[10]TNM分期标准对各病例进行分期:T1-T2期43例，T3-T4期44例。所有患者都是手术切除病灶，术前均未接受化疗或者放疗。用以上组织构建乳腺癌组织芯片，在免疫组织化学染色后组织标本均未出现缺失，且组织病理学检测证实为原发性乳腺癌。另收集同期因良性乳腺肿瘤接受手术的34例患者的病变组织，其中乳腺纤维瘤所有患者均同意本研究并签署知情同意书，且经我院伦理委员会审核批准后收集标本。1.2细胞、动物及主要试剂和仪器细胞和动物人乳腺癌细胞株MCF7（上海中科院细胞库）;6~8周无特定病原体（specificpathogenfree，SPF）级雄性SD大鼠裸鼠，体重130~180g，由我院实验动物研究所提供（许可证号BT-S0019-5302），依照我院实验动物管理办法，室温下标准饲料、自由饮水、分笼（4笼）适应性饲养一周后用于试验。载体和主要试剂:FRY过表达病毒载体rAAV9-FRY及空载质粒rAAV9-FRY-NC（阴性对照）由上海吉玛技术有限公司设计完成;DMEM培养基（TOYOBO）;Trizol试剂盒（TaKaRa）;Ⅰ、Ⅲ型胶原兔多克隆抗体（美国Abcamn公司），麻醉剂、FRY抗体、神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP1）抗体、鼠抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体（美国Jackson公司），Transwell小室（美国BD公司）;Click-iTEDU试剂盒、反转录试剂盒、Westernblot试剂盒、吖啶橙（acridineorange，AO）/溴化乙锭（ethidiumbromide，EB）（美国Sigma公司）;全蛋白抽提试剂盒、免疫组化试剂盒（德国QIAGEN公司）;PBS缓冲液（美Amresco公司）。主要仪器:苏净Airtech超净工作台（北京六一仪器厂），SANYOMCO-15AC细胞培养箱（美国强生公司），NikonTi-U/Ti-s倒置荧光显微镜（日本三菱公司），5810R型高速离心机（日本岛津公司），ImageQuant软件扫描系统（美国Promega公司），SDS-PAGE凝胶电泳仪（美国Corning公司）。1.3FRY蛋白表达的检测将乳腺癌组织样本10%甲醛固定石蜡包埋并切片，用二甲苯和梯度乙醇脱蜡后置于柠檬酸盐缓冲液中进行修复，以充分暴露抗原决定簇。然后用3%的双氧水室温下浸泡10min，封闭，分别加稀释好的一抗4℃过夜孵育，次日冲洗干净，分别加入适量生物素标记的二抗室温孵育30min，清洗。加适量二氨基联苯胺（DAB）作用2~5min后用去离子水终止反应，苏木素复染1.5~2min，清洗后于乙醇梯度脱水，二甲苯浸泡并干燥后用中性树胶封片，镜检观察并记录实验结果。染色评判标准:以肿瘤细胞细胞膜和细胞质内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性，每个切片随机取10个400倍视野，以100个细胞为计数单位，按染色面积及细胞被染色强度计分，计分原则如下:染色面积范围≤10%为0分，>10%~25%为1分，>25%~50%为2分，>50%~75%为3分，>75%为4分;细胞无染色0分，弱黄色1分，黄色2分，棕黄色3分。若两者积分之和大于或等于3分则为阳性，低于3分则为阴性。1.4细胞培养以及转染将高侵袭性人乳腺癌细胞株MCF7接种于含有灭活的现代肿瘤医学2020年10月第28卷第19期MODERNONCOLOGY，Oct2020，VOL28，No1910%胎牛血清的DMEM培养基中，置于生化培养箱中培养，条件37℃，5%CO2，当细胞生长密度达85%时，胰蛋白酶消胞常规培养，不进行外界干预）、对照组（细胞转染rAAV9-FRY-NC后，常规培养）、实验组（细胞转染rAAV9-FRY·9433·规方法提取各组细胞中的FRY和NRP1，BCA测定蛋白含量，取50μg蛋白上样，SDS-PAGE凝胶电泳结束后，转至PVDF膜，封闭，加入一抗（1∶2000），维持4℃过夜孵育，次日PBS漂洗，加入二抗（1∶5000），PBS漂洗，ECL显色。ImageQuant软件扫描并分析相应蛋白的灰度值，用GAPDH为化传代。取对数生长期细胞进行转染，实验分为正常组（细后，常规培养）。1.5EdU标记检测细胞增殖调整细胞浓度，以5×105个/孔接种于6孔培养板中，细胞分组处理同上，同时调整EdU工作液浓度为20μmol/L，将1ml的EdU工作液分别加入细胞培养板中，轻轻混匀后，置入37℃，5%CO2培养箱常规培养，细胞培养2h后，弃掉上清液，4%甲醛固定30min，PBS清洗2次，每次5min，在浓度为0.3%TritonX-100的PBS缓冲液中恒温静置20min，根据试剂盒要求配置Click反应液，使用移液枪在每孔中添加500μl反应液，恒温孵育20min，在1ml的Hoechst33342溶液中避光孵育30min，PBS清洗后，在荧光显微镜下观察并留取照片分析细胞增殖率。调整细胞浓度，按1×1051.6AO/EB双染法检测细胞凋亡个/孔接种于6孔培养板中，分组处理同上，200r/min离心2min，收集细胞，37℃，5%CO2生化培养箱中继续培养24h后，用1mlPBS分别制成单细胞悬液。加入60μlAO/EB荧光染液，同时滴加1.14mlPBS缓冲液，混匀后在荧光显微镜下观察细胞凋亡，同时拍照留取照片进行统计分析并计算各组细胞的凋亡率。调整细胞浓度，以5×104备注:AO/EB荧光染液必须即用即配，以100mg/L的AO和100mg/L的EB等体积混合制成。1.7Transwell小室检测细胞迁移个/孔接种于24孔无血清培养板中，置入37℃，5%CO2培养箱常规培养24h，用DMEM重悬细胞至细胞浓度为3×105个，将250μl的细胞悬液加入到Transwell上室，同时在Transwell下室中填加500μl浓度为10%的FBS培养液，37℃，5%CO2培养箱常规培养12h，PBS漂洗后用棉棒擦Transwell小室内部，4%甲醛固定，0.1%结晶紫室温避光染色10min，置于倒置荧光显微镜下观察穿过膜的细胞并拍照计数。1.8裸鼠肿瘤异种移植模型调整细胞浓度，以1×105个/孔接种于96孔培养板中，分组处理同上，轻轻混匀后，置入37℃培养箱继续培养，待生长密度达到1×106个/ml时，消化细胞，200r/min离心5min，弃掉上清液，加入PBS缓冲液，避光放置于冰上，同时备好2ml注射器。用10%的水合氯醛将已经禁食12h的SD大鼠麻醉后（每组6只），将1ml细胞悬液注射进裸鼠右前肢下部皮肤。接种第5天后能观察到原位肿瘤。同时使用活体成像系统（IVIS）来检测生物信号强度（备注:检测前10min，需以150mg/kg剂量腹腔注射Luciferin）。每5天检测一次，连续检测40天，标准饲养裸鼠，记录每日大鼠瘤体生长情况以及肺转移情况，7周后颈部放血处死裸鼠，肉眼观察裸鼠肺转移的情况，并取出瘤组织，称其重量。1.9Westernblot检测各组细胞中FRY和NRP1表达的水平调整细胞浓度，按1×105个/孔接种于6孔培养板中，分组处理同上，置入5%CO2、37℃培养箱12h，加入裂解液，常内参蛋白，来计算目标蛋白的相对表达量。1.10统计学分析数据统计采用SPSS19.0软件，作图工具采用Graphpad5.01，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示具有统计学意义。2结果2.1免疫组化检测标本中FRY的表达本研究中免疫组化结果显示，FRY主要定位在胞浆和细胞膜上，染色呈现较深棕黄色，在癌旁组织中阳性率100%，见表1。在良性乳腺肿瘤组织中可见棕黄色，细胞染色比例大，在恶性乳腺癌组织中FRY的棕黄色表达较浅，细胞染色比例较小。FRY在不同程度的乳腺肿瘤的表达见表2，在34例乳腺良性病变组织中，15例乳腺腺纤维瘤中FRY的阳性表达为13例，阳性率86.67%，19例乳腺囊内乳头状瘤FRY的阳性表达为17例，阳性率89.47%;在87例乳腺癌组织中，25例乳腺浸润性导管癌Ⅰ级FRY的阳性表达为18例，阳性率72.00%;32例乳腺浸润性导管癌Ⅱ级FRY的阳性表达为14例，阳性率43.75%;30例乳腺浸润性导管癌Ⅲ级FRY的阳性表达为10例，阳性率33.33%;FRY的阳性表达在良性肿瘤中明显高于恶性乳腺癌组织（P<0.05）。FRY的阳性表达在乳腺癌的不同分级具有统计学意义（P<0.05）。表1FRY在癌旁组织和乳腺肿瘤组织中的表达Tab.1TheexpressionofFRYinadjacenttissuesandbreasttumortissuesClassificationAdjacenttissuesBreasttumortissuesn8787TheexpressionofFRYPositiveexpressionPositiverate（%）874210048.58P0.000表2FRY在不同程度乳腺肿瘤中的表达1317TheexpressionofFRYPositiveexpressionPositiverate（%）Tab.2TheexpressionofFRYinbreastcancerofdifferentdegreesPClassificationnBreastadenofibroma150.000Intracapsularpapilloma19ofthebreastBreastinvasiveductalcarcinomagradeⅠBreastinvasiveductalcarcinomagradeⅡBreastinvasiveductalcarcinomagradeⅢ86.6789.4772.00253243.7518141033.3330Note:Mammaryglandfibromasandintramammarycysticpapillomaarebenignfibrocysticmastopathy，BreastinvasiveductalcarcinomagradeⅠ，breastinvasiveductalcarcinomagradeⅡandbreastinvasiveductalcarcinomagradeⅢaremalignantbreasttumors.·0533·2.2FRY的表达与乳腺癌临床病理特征的关系石国建，等FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响2.3FRY过表达对人乳腺癌细胞株MCF7增殖能力的影响在不同年龄以及TNM分期中FRY的阳性表达差异无统计学意义（P>0.05）;而在不同肿瘤直径和浸润深度FRY的阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05），见表3。表3FRY的表达与乳腺癌临床病理指标的关系（n=87）Tab.3RelationshipbetweentheexpressionofFRYandclinicopathologicalindicatorsofbreastcancer（n=87）EdU标记实验结果如图1所示，与正常组相比，上调rAAV9-FRY的表达后，实验组MCF7细胞的EdU阳性细胞比例、集落形成比率明显降低（P<0.05）;正常组与对照组相比，无统计意义（P>0.05）。说明上调FRY的表达后，MCF7细胞增殖能力明显降低。2.4FRY过表达对人乳腺癌细胞株MCF7凋亡的影响AO能透过胞膜完整的细胞，进入细胞核并与染色体上DNA结合，发出明亮的绿色荧光。EB仅能透过胞膜受损的细胞，进入细胞核并与染色体上DNA结合，发出橘黄色荧光。AO/EB双染法结果如图2所示，与正常组相比，上调FRY的表达后，实验组细胞凋亡率明显上升（P<0.05）;正常组与对照组相比，无统计意义（P>0.05）。提示上调FRY的表达后，能够促进MCF7细胞的凋亡。2.5FRY过表达对人乳腺癌细胞株MCF7迁移能力的影响Transwell小室结果如图3所示，与正常组相比，FRY过表达后，实验组MCF7细胞通过Matrigel基质胶的数量明显减少（P<0.05）;正常组与对照组相比，无统计意义（P>0.05）。该结果表明FRY过表达后，癌细胞迁移能力明显减弱。P92.9016.40ClassificationAge（years）<50≥50Tumorsize（cm）<3≥3TNMstagingT1-T2T3-T4InfiltrationdepthNoYesn4641503743444938TheexpressionofFRYPositiveexpressionPositiverate（%）2220375241834847.848.874.013.555.840.969.421.1图1FRY过表达对人乳腺癌细胞株MCF7增殖能力的影响（×100）A:正常组;B:对照组;C:实验组。与正常组相比，P<0.05。Fig.1EffectoftheoverexpressionofFRYontheproliferationabilityofMCF7cell（×100）A:Normalgroup;B:Controlgroup;C:Experimentalgroup.Comparedwithnormalgroup，P<0.05.图2上调FRY的表达后对人乳腺癌细胞株MCF7凋亡的影响（×400）A:正常组;B:对照组;C:实验组。与正常组相比，P<0.05。Fig.2EffectoftheoverexpressionofFRYontheapoptoticrateofMCF7cell（×400）A:Normalgroup;B:Controlgroup;C:Experimentalgroup.Comparedwithnormalgroup，P<0.05.2.6FRY过表达对MCF7细胞在裸鼠体内增殖以及转移的影响裸鼠成瘤实验结果如图4所示，与正常组和对照组相比，7周后，实验组裸鼠内移植瘤明显变小，瘤体重量明显减少（P<0.05）。通过活体成像系统（IVIS）来检测裸鼠体内病灶转移情况结果如图5所示，与正常组，7周后，实验组裸鼠内移植瘤瘤体肺脏转移的病灶比例明显减小（P<0.05）;正常组与对照组相比，无统计意义（P>0.05）。现代肿瘤医学2020年10月第28卷第19期MODERNONCOLOGY，Oct2020，VOL28，No19·1533·图3上调FRY的表达后对人乳腺癌细胞株MCF7迁移能力的影响（结晶紫染色×200）A:正常组;B:对照组;C:实验组。与正常组相比，P<0.05。Fig.3EffectoftheoverexpressionofFRYonthemigrationabilityofMCF7cell（Crystalvioletstaining×200）A:Normalgroup;B:Controlgroup;C:Experimentalgroup.Comparedwithnormalgroup，P<0.05.图4上调FRY的表达后对MCF7细胞裸鼠成瘤的影响A:正常组;B:对照组;C:实验组。与正常组相比，P<0.05。Fig.4EffectoftheoverexpressionofFRYontumorformationofMCF7cellsinnudemiceA:Normalgroup;B:Controlgroup;C:Experimentalgroup.Comparedwithnormalgroup，P<0.05.图5上调FRY的表达后对MCF7细胞裸鼠成瘤肺转移的影响A:正常组;B:对照组;C:实验组。与正常组相比，P<0.05。Fig.5EffectoftheoverexpressionofFRYonlungmetastasisofMCF7cellsinnudemiceA:Normalgroup;B:Controlgroup;C:Experimentalgroup.Comparedwithnormalgroup，P<0.05.2.7FRY与NRP1之间的关系及各组细胞中蛋白表达的水平NRP1是一类非络氨酸激酶跨膜蛋白，能够增强肿瘤细胞的增殖，侵袭能力以及促进肿瘤血管再生。http://genemania.org数据库显示FRY和NRP1存在特异性结合位点，见图6。进一步采用Westernblot检测各组细胞中FRY和NRP1的表达情况，结果如图7所示，与正常组相比，实验组细胞中FRY蛋白的表达明显上升，NRP1蛋白的表达明显下降（P<0.05）;正常组与对照组相比，差异无统计意义（P>0.05）。3讨论法主要是采用外科手术切除，辅以化疗，但是由于乳腺癌的高复发率以及癌细胞的恶性转移严重影响治疗的效果。而化疗方法本身的毒副作用以及化疗药物的耐药性，制约了其在乳腺癌的临床应用[11]。因此揭示乳腺癌的发病机制，寻找乳腺癌发生、发展过程中的潜在的分子标志物，开展乳腺癌的靶向治疗，是目前关于乳腺癌的诊断及治疗中的研究热点。FRY基因是一种在真核细胞内广泛存在的高度保守的调控基因。研究表明[12]FRY基因在真核的细胞增殖、分化、侵袭以及凋亡中发挥了重要的作用。FRY在近年的有关肿瘤的靶向治疗的研究中备受关注[13]。研究表明[14]FRY在近年来，乳腺癌的发病呈现年轻化趋势。保守的治疗方多种肿瘤组织和正常组织表达谱中存在着明显差异。更深·2533·入的研究发现[15]FRY在多种肿瘤细胞中均显示出良好的抑癌作用。研究表明FRY基因能调控细胞的有丝分裂，通过石国建，等FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响本研究中首先采用免疫组化检测FRY在乳腺肿瘤组织中的表达，结果发现FRY在癌旁组织中高表达，在乳腺癌组织中FRY低表达，并且FRY在良性乳腺肿瘤组织中表达水平明显高于在恶性肿瘤组织中的表达，FRY的阳性表达在乳进程。但FRY在乳腺癌的研究报道少见。抑制肿瘤细胞的微管蛋白脱乙酰化来影响肿瘤细胞的增殖腺癌的不同分级具有统计学意义，乳腺癌恶性等级越高，FRY蛋白的表达越低。将FRY的表达与乳腺癌的临床病理指标进行相关性分析，结果表明乳腺肿瘤直径、肺转移、浸润深度与FRY的阳性表达有相关性。推断FRY的阳性表达可能与乳腺癌的发生、发展以及恶性转移密切相关。细胞的恶性增殖和靶器官转移是肿瘤细胞的最主要的特征，为进一步明确FRY的表达在乳腺癌中的作用，本研究构建FRY过表达载体rAAV9-FRY，转染高侵袭性MCF7乳腺癌细胞株后，先后进行EdU标记实验、AO/EB双染实验、Transwell小室实验，结果发现上调FRY的表达后，MCF7细胞体外增殖、迁移能力明显降低，凋亡率明显上升（P<0.05）;而裸鼠移植瘤模型实验结果表明，实验组裸鼠内移植瘤明显变小，瘤体重量明显减少（P<0.05）。裸鼠内移植瘤瘤体肺脏转移的病灶比例明显减小（P<0.05）。说明在上调FRY的表达后，能明显抑制乳腺癌细胞MCF7的体外与体内增殖与转移。图6数据库预测FRY与NRP1之间的关系Fig.6DatabasepredictiontherelationshipbetweenFRYandNRP1图7Westernblot检测各组细胞中FRY和NRP1蛋白的表达A:正常组;B:对照组;C:实验组。与正常组相比，P<0.05。Fig.7WesternblotdetectionoftheexpressionofFRYandNRP1proteinineachgroupofcellsA:Normalgroup;B:Controlgroup;C:Experimentalgroup.Comparedwithnormalgroup，P<0.05.NRP1作为血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）的共受体，能够促进胃癌、结肠癌等多种肿瘤的血管新生，为癌细胞的增殖与迁移提供营养成分[16]。研究表明NRP1在乳腺癌组织中大量表达。PaulrajP等[17]研究证实FRY的表达能明显影响NRP1的表达。本研究中在生物信息网站上预测到FRY和NRP1存在结合位点，Westernblot检测结果表明，与空白对照组和阴性对照组相比，上调FRY的表达后，实验组细胞中FRY蛋白的表达明显上升，NRP1蛋白的表达明显下降（P<0.05）。推断FRY可能是通过特异性结合NRP1，阻断癌细胞营养成分的供应，来抑制MCF7细胞的增殖与迁移。综合上述，FRY在乳腺癌组织中存在过表达的现象，可能是FRY特异性结合NRP1来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移，促进其凋亡。但是如何将FRY的这种作用应用到乳腺癌的靶向治疗中，还待更深入的探索。[参考文献][1]SparanoJA，GrayRJ，MakowerDF，etal.Adjuvantchemotherapyguidedbya21-geneexpressionassayinbreastcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine，2018，379（2）:111-121.[2]KnottSRV，WagenblastE，KhanS，etal.Asparaginebioavailabilitygovernsmetastasisinamodelofbreastcancer[J].Nature，2018，554（7692）:378-381.[3]SchmidP，AdamsS，RugoHS，etal.Atezolizumabandnab-paclitaxelinadvancedtriple-negativebreastcancer[J].NewEnglandJournalofMedicine，2018，379（22）:2108-2121.[4]BartoschekM，OskolkovN，BocciM，etal.Spatiallyandfunctionallydistinctsubclassesofbreastcancer-associatedfibroblastsrevealedbysinglecellRNAsequencing[J].NatureCommunications，2018，9（1）:5150-5163.[5]ZhangR，ZhuZ，ShenW，etal.Golgimembraneprotein1（GOLM1）promotesgrowthandmetastasisofbreastcancercellsviaregulatingmatrixmetalloproteinase-13（MMP13）[J].MedicalScienceMonitor，2019，25（1）:847-855.[6]WangY，ZhangC，MaiL，etal.PRR11andSKA2genepairisoverexpressedandregulatedbyp53inbreastcancer[J].BMBReports，2019，52（2）:157-162.[7]EspirituEB，CrunkAE，BaisA，etal.TheLhx1-Ldb1complexinteractswithFurrytoregulatemicroRNAexpressionduringpronephrickidneydevelopment[J].ScientificReports，2018，8（1）:16029-16045.现代肿瘤医学2020年10月第28卷第19期MODERNONCOLOGY，Oct2020，VOL28，No19·3533·[8]LeS，MartinZC，SamuelsonDJ.Physicalconfirmationandcomparativegenomicsoftheratmammarycarcinomasusceptibility3quantitativetraitlocus[J].G3:Genes，Genomes，Genetics，2017，7（6）:1767-1773.[9]WuY，LinJ，LiX，etal.Transcriptomeprofileofone-month-oldlambs＇granulosacellsaftersuperstimulation[J].Asian-AustralasianJournalofAnimalSciences，2017，30（1）:20-33.[10]TranBNN，RuanQZ，EpsteinS，etal.Literacyanalysisofnationalcomprehensivecancernetworkpatientguidelinesforthemostcommonmalignanciesintheunitedstates[J].Cancer，2018，124（4）:769-774.[11]VoJB，NolanTS，BailJR，etal.Cognitivechanges:educatingbreastcancersurvivorswiththethinkwell:healthylivingtoimprovecognitivefunctionprogram[J].ClinicalJournalofOncologyNursing，2018，22（3）:252-255.[12]NagaiT，IkedaM，ChibaS，etal.FurrypromotesacetylationofmicrotubulesinthemitoticspindlebyinhibitionofSIRT2tubulindeacetylase[J].JCellSci，2013，126（19）:4369-4380.[13]VeeraraghavanJ，MaJ，HuY，etal.Recurrentandpathologicalgenefusionsinbreastcancer:currentadvancesingenomicdiscoveryandclinicalimplications[J].BreastCancerResearchandTreatment，2016，158（2）:219-232.[14]DelValleJ，FeliubadalóL，NadalM，etal.IdentificationandcomprehensivecharacterizationoflargegenomicrearrangementsintheBRCA1andBRCA2genes[J].BreastCancerResearchAndTreatment，2010，122（3）:733-743.[15]ByunYS，KimEK，ArakiK，etal.Fryldeficiencyisassociatedwithdefectivekidneydevelopmentandfunctioninmice[J].ExperimentalBiologyandMedicine，2018，243（5）:408-417.[16]TAODY，WULP，HUJX，etal.ExpressionsofFoxp3，Neuropilin-1andNeuropilin-2ininfiltratingductalbreastcarcinomaandtheirsignificance[J].ZhejiangMedine，2016，38（14）:1142-1145.[陶德友，吴丽平，胡金喜，等.Foxp3、NRP1和NRP2在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义[J].浙江医学，2016，38（14）:1142-1145.][17]PaulrajP，BosworthM，LonghurstM，etal.AnovelhomozygousdeletionwithintheFRYgeneassociatedwithnonsyndromicdevelopmentaldelay[J].CytogeneticandGenomeResearch，2019，159（1）:19-25.（编校:闫沛）PDGF-BB在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义付明刚，李龙均ExpressionofPDGF-BBininvasiveductalcarcinomaofbreastanditssignificanceFuMinggang，LiLongjunDepartmentofBreastSurgery，theFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity，XinjiangUrumqi830011，China.[Abstract]Objective:ToinvestigatetheexpressionofPDGF-BBinbreastinvasiveductalcarcinomaanditsrelationshipwithclinicopathologicalfeatures.Methods:FromJune2015toAugust2017，80casesofbreastinvasiveductalcarcinomaconfirmedbypathologyintheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversitywerecollected.TheexpressionofPDGF-BBincancertissueandadjacenttissuewasdetectedbyimmunohistochemistry，andtherelationshipbetweenPDGF-BBandclinicalpathologicalcharacteristicswasanalyzed.Results:TheexpressionofPDGF-BBwassignificantlyhigherintheinvasiveductcarcinomaofthebreastthanintheadjacenttissue（57.50%vs13.75%，P<0.05）.TheexpressionofPDGF-BBwasrelatedtopreoperativelymphnodemetastasis（P<0.05）andhigherpTNMstaging（P<0.05）.Itwasnotrelatedtoage，menstrualstate，tumordiameter，PR，ER，HER-2，whetherpostoperativerecurrenceandmetastasis（P>0.05）.Conclusion:PDGF-BBplaysanimportantroleintheoccurrenceandprogressionofbreastinvasiveductalcarcinoma，butitsprognosticvaluestillneedsfurtherevaluation.[Keywords]invasiveductalcarcinomaofbreast，PDGF-BB，immunohistochemistryModernOncology2020，28（19）:3353-3357[收稿日期]2019-10-10[修回日期]2020-01-10[基金项目]新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目（编号:2017D01C311）[作者单位]新疆医科大学第一附属医院乳腺外科，新疆乌鲁木齐830011[作者简介]付明刚（1978-），男，新疆乌鲁木齐人，副主任医师，博士研究生，硕士生导师，研究方向:乳腺癌的诊治。E-mail:2315365607@qq.com
