腾冲嗜热厌氧杆菌Cas2原核表达及生物信息学分析
【摘要】 为研究CRISPR/Cas系统及其相关蛋白Cas2(TTE2657)在腾冲嗜热厌氧杆菌热适应中的作用，应用PCR技术构建了原核重组质粒pET-28a::cas2，并在大肠埃希菌BL21表达Cas2蛋白;结合生物信息学软件对cas2编码蛋白的基本理化性质、氨基酸同源性、空间结构及蛋白质相互作用网络进行预测和分析。结果显示，成功构建了原核表达载体pET-28a::cas2并在大肠埃希菌BL21中得到表达，Cas2分子质量大小为9.9ku，主要以可溶性形式存在;qRT-PCR显示cas2mRNA在60℃和75℃高表达;生物信息学分析显示cas2基因其完整的ORF全长264bp，编码88个氨基酸，其中Ile(14)、Ser(14)、Phe(12)含量较高，等电点为9.31，不存在跨膜结构。其蛋白质二级空间结构以α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠为主，蛋白互作预测网络显示Cas2与Cas3、Cas5、Cas7等其家族大部分蛋白存在相互作用。进化树分析显示腾冲嗜热厌
