转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法
【摘要】 转基因番木瓜检测中，模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率，建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法，包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后，对获得的DNA进行PCR检测验证。普通PCR验证结果显示，本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时，PCR扩增条带清晰，更高稀释倍数时，叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示，叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间。灵敏度测试结果表明，含量低至0.1%的叶片和果肉样品，内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增，且重复性较好。本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好，体系稳定。
