人锌转运体8嵌合抗原受体表达载体的构建与初步应用
【摘要】 目的:构建人锌转运体(8zinctransporter8ZnT8,)嵌合抗原受体(体,为研究抗原特异性调节性)在T作用提供实验基础。方法:通过分子克隆及基因重组技术构建regulatoryTcells细胞(Tregs,1型糖尿病(chimericantigenreceptor,type1diabetesmellitusT1DM,CAR)的慢病毒表达载)自身免疫中的调节慢病毒表达载体质粒,并制备慢病毒;利用CAR慢病毒感染效率;细胞计数评估ZnT8scfv⁃CAR慢病毒感染TregsTregs细胞增殖能力;流式细胞术检测增殖细胞中、、和greenfluorescentproteinCD4CD25Foxp3HeliosPLVX⁃EGFP⁃ZnT8scfv,流式细胞术检测绿色荧光蛋白(ZnT8scfv⁃,)的表达确定GFP的表达。结果:酶慢病毒表达载体构建成功;质粒共转染细胞后制备浓缩慢病毒滴度为PLVX⁃EGFP⁃ZnT8scfv后慢病毒转染表达率为;