CRISPR/Cas9介导的同源重组在非编码区疾病相关位点功能研究中的应用
【摘要】 目的·以全基因组关联研究报道的系统性红斑狼疮相关单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）位点rs1978421为例，利用规律成簇间隔短回文重复序列/相关蛋白9[clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats（CRISPR）/ⅠCRISPRassociatedprotein9，CRISPR/Cas9]系统建立非编码区疾病相关的遗传突变位点功能的研究策略。方法·针对SNPrs1978421位点设计单链导向RNA（singleguideRNA，sgRNA），利用T7核酸内切酶）实验在HEK293T细胞中验证sgRNA对靶点的切割效率。以电穿孔转染的方式将融合Cas9-绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）和sgRNA的表达质粒及同源重组的模板转染至U-937细胞内，通过流式分选得到单个的GFP阳性U-937细胞，培养14d后进行基因型鉴定。筛选得到同源
