CTSD对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制及功能分析
【摘要】 旨在分析组织蛋白酶D（cathepsinD，CTSD）对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制并初步探究其对产羔性状的影响机理。本研究以36周龄、健康、多胎黔北麻羊母羊（n=5）为研究对象，屠宰后采集卵巢组织分离培养卵泡颗粒细胞，构建真核表达载体pEGFP-N3-CTSD，将其导入细胞后在转录与翻译水平验证真核表达效率；通过CCK-8法检测在不同时间段内重组质粒对颗粒细胞增殖的影响；通过流式细胞仪检测重组质粒对颗粒细胞凋亡及周期的影响；随后使用RT-qPCR法在细胞水平检测重组质粒对细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3，细胞周期相关因子CyclinA1、CyclinD2、CyclinEmRNA表达水平的影响，最后，以多胎性状候选基因BMPR-IB、FSHR、INHA为功能基因，在转录与翻译水平上验证重组质粒对其mRNA与蛋白表达的影响。双酶切及测序结果证实，黔北麻羊CTSD基因真核表达载体pEGFP-N3-CTSD构建成功，且在转录与翻译水平极显著上调CTSD在颗粒细胞中的表达（P<0.01）；细胞增殖检测结果表明，颗粒细胞中上调CTSD后能够抑制细胞的增殖，其中在12、24
