苹果树腐烂病菌木聚糖酶VmXyl1基因的原核表达及多克隆抗体制备
【摘要】 木聚糖酶(xylanase)基因VmXyl1在苹果树腐烂病菌-黑腐皮壳菌(Valsamali)致病过程中发挥重要作用。为了揭示VmXyl1在腐烂病菌与寄主互作过程中的作用机制，本研究构建了原核表达载体pET32a-VmXyl1，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)进行诱导，在大肠杆菌(Escherichiacoli)表达菌株Rosetta(DE3)中成功表达了VmXyl1融合蛋白；利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)检测融合蛋白的可溶性和纯化效果，免疫新西兰白兔(Oryctolaguscuniculus)制备多克隆抗体，并对其效价和特异性进行分析。结果显示，该蛋白主要以包涵体形式存在，且0.5mmol/LIPTG、30℃诱导8h融合蛋白高效表达；经Ni-NTA柱亲和层析纯化后，获得了预期大小的融合蛋白。酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay
