鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性
【摘要】 c型溶菌酶是鱼类在先天性免疫机制中抵抗细菌感染的关键性免疫蛋白。鲤鱼(Cyprinuscarpio)c型溶菌酶具有鱼类c型溶菌酶的基本特征:N端含有信号肽;C端成熟肽中的Glu35和Asp51构成酶的活性位点，并含有8个保守的半胱氨酸残基。本研究通过反转录PCR(reversetranscriptionPCR,RT-PCR)获得鲤鱼c型溶菌酶成熟肽的cDNA，该序列全长381bp，编码由127个氨基酸残基组成的成熟肽;通过PCR在其5'端添加限制性内切酶XhoⅠ位点和6×His标签、3'端添加XbaⅠ位点;获得的目的基因，即鲤鱼c型溶菌酶基因(commoncarpc-typelysozyme,CLYc)，与表达载体pPICZαA连接后电转至毕赤酵母(Pichiapastoris)X-33，通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子;在29、250r/min条件下，使用1.5%甲醇诱导表达120h，表达上清液经固化金属离子亲和层析(immobilizedmetalaffinity
