脑心肌炎病毒VP1基因的克隆与原核表达
【摘要】 目的]为获得重组脑心肌炎病毒VP1蛋白。[方法]利用RT-PCR方法对脑心肌炎病毒的VP1基因进行特异性扩增，并在pEASY-BluntZero载体中进行克隆。测序正确后，用NdeI和HindIII对重组质粒进行双酶切，将目的片段连接入原核表达载体pET-30a，提取质粒pET-30a-VP1，将质粒转化进大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达和纯化。[结果]重组的结构蛋白VP1以包涵体的形式存在，纯化后获得的重组蛋白，SDS-PAGE和Westernblotting双重鉴定，均在31.5kD处出现条带，说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-30a-VP1。[结论]以原核系统成功表达脑心肌炎病毒VP1蛋白，进一步为犬的脑心肌炎病毒的血清学检测奠定基础。
