酵母高效克隆表达T载体pYES2-T的构建及应用
【摘要】 为了在酵母中高通量、高效率地对外源基因进行克隆和表达，本研究以酵母表达载体pYES2为基础，构建高效克隆表达T载体。pYES2是酿酒酵母的一种高效表达载体，在其多克隆位点处设计插入XcmⅠ-Intron-XcmⅠ片段，同时将其载体中URA3基因中原有的XcmⅠ酶切位点进行定点突变，构建出pYES2-T酿酒酵母高效表达T载体。利用XcmⅠ酶切载体pYES2-T，使其产生两个突出的T末端，一方面可以通过PCR产物加A的方式直接进行TA克隆;另一方面可在半乳糖诱导启动子的调控下，对TA克隆后的外源基因在酵母中诱导表达。利用该系统高通量地对人工合成耐盐系列基因NLEAs进行筛选，研究结果表明，该系统可以在酿酒酵母中一步式完成片段克隆及耐盐基因的筛选。本研究构建的酵母表达T载体使用方便、效率高、成本低，应用前景广阔。
