高效毕赤酵母表达载体的改造与应用
【摘要】 构建一种可促进外源蛋白在毕赤酵母中高表达的载体，实现在同一载体中外源基因与二硫键异构酶共表达，同时失活YPS1基因。以pPICZαA载体为骨架载体，将酵母YPS1基因C端和N端非功能区序列连接至pPICZαA载体，获得重组载体pPICZαA-YPSΔ;将酵母PDI基因序列连接至pPICZαA载体，获得重组载体pPICZαA-PDI，再以重组载体pPICZαA-PDI为模板通过PCR获得PDI表达盒，然后将PDI表达盒连接至重组载体pPICZαA-YPSΔ，筛选获得高效表达载体pPICZαA-PDI-YPSΔ。最后，将外源基因HSA、hGH导入此载体，转化毕赤酵母GS115，检测HSA和hGH蛋白的表达。结果显示，高效表达载体pPICZαA-PDI-YPSΔ构建成功，外源蛋白HSA、hGH利用此载体，可获得高表达，具有很好的工业前景。
