EMA结合实时荧光PCR方法检测单核细胞增生李斯特氏菌
【摘要】 建立叠氮>化乙锭(EMA)结合实时荧光PCR(qPCR)方法检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes&活菌。以李斯特溶血素O(LLO&基因hly设计引物、TaqMan探针，用李斯特属典型菌、沙门氏菌等56株致病菌株验证特异性，不同质量浓度EMA处理进行qPCR检测。尝试脱氧胆酸钠溶液(SD)强化抑制效果,73份不同的人工污染食品、环境样本#肉馅、垃圾渗滤液)测试实用性。结果表明，引物探针准确检测L.monocytogenes，对其他菌株无特异性扩增'EMA最适质量浓度2.5!g/mL，经过15min光激活与死菌DNA共价结合明显抑制了扩增，方法检出限为150CFU/mL。SD处理L.monocytogenes活菌Ct值增加。与传统培养法比较,EMA-qPCR方法检测100%准确，操作简单、省时高效,在食品、环境方面应用前景广阔。
