一种快速定量检测猴组织中SIVSHIV的方法
【摘要】 目的以猴-人免疫缺陷病毒(simian-humanimmunodeficiencyvirus,SHIV)gag基因为特异性扩增靶标,建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan实时荧光定量PCR法检测猴血浆、外周血单核细胞和淋巴结中的猴免疫缺陷病毒(simianimmunodeficiencyvirus,SIV)和SHIV。方法以SHIVSF162p3ngag基因为模板,用普通PCR方法扩增出109bpDNA片段用于克隆构建标准品质粒pGEM-T-SHIVgag。通过对SHIV标准品质粒定量分析,优化反应体系,检测TaqMan实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异度和重复性。结果TaqMan实时荧光定量PCR法能有效地检测出102~107copies/μLSIV/SHIVgag基因mRNA,线性系数为R2=0.998,slop=-3.304。方法重复性检测显示CV%在0.6%~1.1%之间。结论该TaqMan实时荧光定量PCR法具有快速、灵敏和特异性高的优点,
