解淀粉芽孢杆菌素Amylocyclicin W5的纯化及其抑菌机理

【摘要】 为研究解淀粉芽孢杆菌素AmylocyclicinW5的抑菌机理,本实验通过硫酸铵沉淀、离子交换以及ÄKTA蛋白纯化系统对AmylocyclicinW5进行分离纯化,并对AmylocyclicinW5进行三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳;此外,以蜡样芽孢杆菌(BacilluscereusLMGT2805)为指示菌对AmylocyclicinW5进行抑菌实验,同时通过扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察细胞形态变化以及细胞内部结构变化。结果表明,最适宜沉淀细菌素的硫酸铵饱和度为70%,0.5mol/LNaCl可以明显洗脱吸附在HiPrepSPXL16/10柱上的AmylocyclicinW5,将洗脱液通过ÄKTA蛋白纯化系统得到2个对应的收集峰(F1和F2);对不同收集峰对应的洗脱液进行抑菌实验,结果发现只有F2对应的组分液对B.cereusLMGT2805有抑菌效果。三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示AmylocyclicinW5组分F2的分子质量约为12.3kDa。高浓度(4倍最低半抑菌浓度)条件