E-cadherin启动子的荧光示踪体系的建立及验证
【摘要】 为实现对肺癌A549细胞的EMT示踪，构建了E-cadherin基因启动子的慢病毒质粒，并与包装质粒pVSVG、Δ8.91共转染HEK293T细胞，包装成有活性的慢病毒，收取病毒感染A549细胞，利用流式细胞仪和Westernblot检测感染成功.进一步用TGF-β诱导感染成功的A549细胞，通过在荧光显微镜下观察荧光变化、荧光定量PCR和Westernblot检测GFP和E-cadherin的变化，发现在TGF-β诱导48h后，A549细胞形态由鹅卵石样变成长梭形.并且荧光显微镜观察到相比较于未诱导的细胞，诱导后的A549细胞绿色荧光明显变暗，同时GFP和E-cadherin的RNA水平和蛋白质表达水平均降低.以E-cadherin基因启动子为基础建立了A549细胞的EMT荧光示踪体系，为进一步研究肺癌的EMT过程提供了材料.
