红毛五加多糖Ⅲ的荧光标记及其在小鼠体内的药动学研究
【摘要】 目的对红毛五加多糖Ⅲ（AHP-Ⅲ）的还原性末端进行选择性荧光标记，并研究AHP-Ⅲ在小鼠体内的药动学特征。方法利用胺化还原法对AHP-Ⅲ进行异硫氰酸荧光素（FITC）荧光标记，并通过荧光分光光度计和紫外可见光谱扫描对偶联标记结果进行确证。通过小鼠单次静脉注射给予FITC-AHP-Ⅲ（f-AHP-Ⅲ）后，检测不同时间点样品中的荧光强度，用DAS软件求算药动学参数并分析。结果AHP-Ⅲ荧光标记后，多糖得率和荧光标记效率分别为36.43%和0.48%。血清、尿液等样品中f-AHP-Ⅲ的线性范围为3.75~120μg·mL-1（R2>0.9982），日内和日间RSD值≤11.13%，相对回收率在84.20%~106.94%。单次静脉注射给药后，主要动力学参数为:Cmax为（43.01±0.80）mg·L-1，tmax为0.08h，AUC0~t为（113.87±1.30）mg·h·L-1，AUC0~∞为（148.35±2.27）mg·h·L-1，t1/2为（23.66±1.32）h，CLz为0.27L/（h·kg），MRT为（29.75±1.63）h，Vz为（9.20±0.39）L·kg-1。组织中药物含量检测显示，单次静脉给药后f-AHP-Ⅲ在小鼠体内主要分布在肾、小肠、肺及肝脏等组织中，其排泄主要是以尿液的形式。结论成功实现了AHP-Ⅲ的荧光标记，绝大多数药物聚集在肾、小肠、肺及肝脏。上述研究为进一步阐明AHP-Ⅲ药理作用机制奠定了基础。关键词:AHP-Ⅲ;荧光标记;小鼠;药动学中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1672-2981(2020)08-1328-06doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2020.08.009基金项目:国家自然科学基金（No.81303198）;山东省大学生创新创业训练计划（No.KX2017006）。作者简介:吴疆，男，硕士，主要从事天然产物开发研究工作，E-mail:582787459@qq.com*通信作者:陈永，男，副教授，硕士研究生导师，主要从事天然产物开发与其活性研究工作，E-mail:vvcy2005@hotmail.com1328中南药学2020年8月第18卷第8期CentralSouthPharmacy.August,Vol.18No.8FluorescentlabelingofAcanthopanaxgiraldiiHarmspolysaccharideanditspharmacokineticsinmiceWUJiang1,GUOXiao-xiao1,LIRu-yue2,JIAMing-zhu1,LIYan-yan2,CHENYong1*(1.SchoolofBasicMedicine,WeifangMedicalUniversity,WeifangShangdong261053;2.SchoolofLifeScienceandTechnology,WeifangMedicalUniversity,WeifangShangdong261053)Abstract:ObjectiveTofluorescentlabelAcanthopanaxgiraldiiHarmspolysaccharideⅢ(AHP-Ⅲ)selectivelyandconfirmthepharmacokineticcharacteristicsofAHP-Ⅲinmice.MethodsAminationreductionmethodwasusedtofluorescentlabelAHP-Ⅲ.FluorospectrophotometryandUV-Visspectrawereusedtoconfirmtheresults.Thefluorescenceintensityofthesamplesatdifferenttimepointswasmeasured,andthepharmacokineticparameterswerecalculatedbyDASsoftwareafterasingleintravenousinjectionoff-AHP-Ⅲ.ResultsTheyieldofAHP-Ⅲ-FITCandthefluorescentsubstituteratiowere36.43%and0.48%,respectively.Theregressionlinearitywas3.75-120μg·mL-1inthemiceplasma,urineandothersamples(R2>0.9982).Theinterandintra-dayprecisionsofthemethodwerenohigherthan11.13%,andtherelativerecoverywas84.20%-106.94%.Afterintravenousinjection,thepharmacokineticparameterswereasfollowing:Cmax(43.01±0.80)mg·L-1,tmax0.08h,AUC0~t(113.87±1.30)mg·h·L-1,AUC0~∞(148.35±2.27)mg·h·L-1,t1/2(23.66±1.32)h,CLz0.27L/(h·kg),andMRT(29.75±1.63)h,Vz(9.20±0.39)L·kg-1.Theresultsindicatedthatf-AHP-Ⅲwasmainlydistributedinthekidneys,intestine,lungandlivertissuesinmiceafterthesingleintravenousinjection.Itsexcretionwasmainlyintheformofurine.ConclusionThemethodcanbeusedforthefluorescentlabelingofAHP-Ⅲ.AHP-Ⅲismainlydistributedinthekidney,intestine,lungandlivertissues.ThisresearchhelpsfurtherelucidatethepharmacologicalmechanismofAHP-Ⅲ.Keywords:AcanthopanaxgiraldiiHarmspolysaccharide;fluorescencelabeling;mouse;pharmacokinetics近年来，中药多糖的药理作用备受人们关注，已有研究表明，多糖具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种功效[1]。红毛五加多糖Ⅲ（AcanthopanaxgiraldiiHarmspolysaccharide，AHP-Ⅲ）是从中药红毛五加茎皮中分离得到的多糖的单一组分，其表观分子量为12.9kD[2]。前期研究表明AHP-Ⅲ对小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的激活作用，可显著增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，促进其分泌TNF-α、IL-6、IL-1β水平及合成NO等功能[3]。目前对中药多糖研究多集中在化学结构解析和药理功能方面，对于其药物代谢动力学和组织分布研究相对较少，其主要原因是检测方法的不足[4]。多糖类化合物多为极性大分子，其结构中缺少发光基团，难以用气相色谱、光谱和质谱等技术进行直接检测[5]。本研究尝试采用荧光标记技术，实现多糖体内代谢的“可视化”，研究单次静脉给药后AHP-Ⅲ在小鼠体内的药动学，AHP-Ⅲ在小鼠体内的吸收、分布及排泄情况，为探究AHP-Ⅲ药理作用机制奠定基础，同时也为多糖类药物的剂型开发提供指导。1材料1.1试药AHP-Ⅲ（由课题组自行制备，纯度≥80.7%，红毛五加粉碎后经水提醇沉，Sevage法脱蛋白后得粗多糖，粗多糖经DEAE-Sephrose和SephacryS-300层析后得多糖AHP-Ⅲ）[2];SephadexG-25预装柱（美国GE公司），氰基硼氢化钠（纯度≥95%，CAS编号:25895-60-7）、酪胺（Tyr，纯度≥98%，CAS编号:51-67-2）、异硫氰酸荧光素（FITC，纯度≥90%，CAS编号:3326-32-7）（美国Sigma公司），其他试剂均为国产分析纯。1.2动物BALB/c小鼠，雄性，8周龄，体重（25±2）g[济南朋悦实验动物繁育有限公司，动物许可证号:SCXK（鲁）2018-0003]。1.3仪器生物安全柜（新加坡ESCO公司），RF-5301PC荧光分光光度计（日本岛津公司），超微量紫外分光光度计（美国Thermo公司），ALC-210.2电子精密天平（赛多利斯科学仪器有限公司），HC-3018R台式高速冷冻离心机（安徽中科中佳科学仪器），FSH-2可调高速匀浆机（江苏精怡仪器科技有限公司）。2方法2.1f-AHP-Ⅲ的制备[6]称取40mg的AHP-Ⅲ溶于15mL的0.2mol·L-1磷酸盐缓冲溶液（pH8.0）中，加入40mg酪胺（Tyr）和15mg氰基硼氢化钠，37℃孵育96h。反应结束后，离心收集上清液，经SephadexG-25凝胶柱纯化，蒸馏水洗脱，收集洗脱液。苯酚-硫酸法[7]测定各管糖含量及280nm处的吸光度值，按照洗脱曲线收集洗脱液，绘制AHP-Ⅲ-Tyr的洗脱曲线，冷冻干燥得AHP-1329CentralSouthPharmacy.August,Vol.18No.8中南药学2020年8月第18卷第8期Ⅲ-Tyr。将上述制得的AHP-Ⅲ-Tyr溶于蒸馏水，用0.2mol·L-1的Na2CO3调节pH值至8.5，加入FITC甲醇溶液（含FITC2.5mg），避光室温反应12h，向反应物中加入4倍量无水乙醇沉淀多糖，5000r·min-1离心10min，弃上清液。沉淀用蒸馏水复溶，乙醇再次沉淀，反复3次，条件同上。所得沉淀蒸馏水溶解后，经SephadexG-25凝胶柱纯化，蒸馏水洗脱，收集洗脱液。苯酚-硫酸法[7]测定各管糖含量及450nm处的吸光度值，按照洗脱曲线收集洗脱液，绘制f-AHP-Ⅲ的洗脱曲线，冷冻干燥得f-AHP-Ⅲ，并按下列公式计算样品得率:样品得率（%）=所得样品质量（mg）/40mg×100%。2.2紫外光谱扫描称取适量AHP-Ⅲ、AHP-Ⅲ-Tyr、f-AHP-Ⅲ多糖样品，分别配制成质量浓度为1.0mg·mL-1的溶液，于超微量紫外分光光度计中进行光谱扫描，光谱扫描200~550nm，根据光谱吸收峰值的变化判断胺化反应、FITC亲核反应是否成功。2.3荧光取代度的测定[6]取5支锡箔包裹的试管，分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL的1.0μg·mL-1FITC标准溶液（精密称取1.0mgFITC，蒸馏水溶解并定溶至100mL得质量浓度为10μg·mL-1的FITC溶液，准确吸取10μg·mL-1FITC溶液1.0mL，加入9.0mL蒸馏水将FITC配制成1.0μg·mL-1的FITC标准溶液），并分别加蒸馏水定容至5.0mL，混匀。以等体积蒸馏水为空白对照，测定各管荧光强度（激发波长490nm，发射波长530nm，狭缝宽10nm）。以FITC质量浓度（C）为横坐标，荧光强度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。准确称取2.0mg的f-AHP-Ⅲ，用蒸馏水定容至10mL配制浓度为0.2mg·mL-1的溶液，吸取1.0mL样品溶液，加入4.0mL蒸馏水混匀后，检测荧光强度（A），并将其代入回归方程，计算多糖的荧光标记效率。2.4f-AHP-Ⅲ在生物样品中稳定性考察[8-9]取小鼠空白血浆精密加入适量的f-AHP-Ⅲ标准溶液，分别制备低（12.5μg·mL-1）、中（25.0μg·mL-1）、高（50.0μg·mL-1）3个质量浓度的质控（QC）样品，置于室温放置24h、4℃保存14d、-20℃冷冻15d，测定样品中荧光强度变化，平行3份。2.5AHP-Ⅲ定量分析方法的建立2.5.1标准曲线的绘制[10]取空白组血浆、尿液、粪便浸提液及各组织匀浆，精密加入适量f-AHP-Ⅲ标准溶液，配制成相当于其质量浓度分别为3.75、7.5、15、30、60、120μg·mL-1的样品（n=3），以等体积的0.2mol·L-1磷酸盐缓冲溶液（pH7.2，自制）作为空白对照，检测荧光强度。以质量浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，加权最小二乘法进行回归运算，得标准曲线。2.5.2回收率与精密度试验[9-12]分别向小鼠血浆、尿液、粪便及各组织中精密加入适量f-AHP-Ⅲ标准溶液，分别制备低（12.5μg·mL-1）、中（25.0μg·mL-1）、高（50.0μg·mL-1）3个质量浓度的QC样品，测定样品中荧光强度变化，平行3份，计算回收率和精密度。于同日内连续测定5次，5d内重复测定，评价本方法回收率及日内、日间RSD。2.6AHP-Ⅲ小鼠体内药动学研究2.6.1小鼠体内吸收及组织分布实验[13-14]BALB/c小鼠18只，随机分为6组，按照采样时间将其设定为1、3、6、12、24、48h组，每组3只，实验前禁食不禁水12h。给药方式为:干燥f-AHP-Ⅲ，生理盐水溶解后静脉注射给药，给药剂量为40μg·g-1，另取未给药小鼠血清作空白对照。给药后每组按设定的采样时间心脏取血0.5mL，放入EDTA处理过的EP管中，4℃，4000r·min-1离心10min，制备血浆样品。心脏灌流清除组织血液后，分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脑、小肠，加入适量0.2mol·L-1磷酸盐缓冲溶液（pH7.2），匀浆，12000r·min-1离心10min，取上清液制备各组织样品，平行3份，检测荧光强度。2.6.2小鼠体内排泄实验[14]“2.6.1”项下小鼠静脉给药后在6、12、24、48h分别避光收集尿液和粪便，粪便烘干后研磨，加入适量0.2mol·L-1磷酸盐缓冲溶液（pH7.2），12000r·min-1离心10min，取上清液制备样品，测定样品中荧光强度变化，平行3份，求得累积排泄率。2.7统计学分析采用非房室模型拟合小鼠单次静脉给药后血浆药物质量浓度数据，应用DAS3.0软件进行药动学参数计算。所有数据均用SPSS21.0软件进行统计分析。3结果3.1f-AHP-Ⅲ的合成多糖胺化还原后产物经SephadexG-25凝胶柱的洗脱曲线见图1A。AHP-Ⅲ峰与Tyr第一个吸收峰重合，紫外可见光扫描光谱显示:AHP-Ⅲ-Tyr在280nm处出现一个较高的吸收峰，说明AHP-Ⅲ与Tyr成功结合，见图2。中间产物AHP-Ⅲ-Tyr得率为56.4%。AHP-Ⅲ-Tyr经FITC亲核加成后洗脱曲线见图1B。AHP-Ⅲ峰与FITC荧光吸收峰重合，在图2中f-AHP-Ⅲ在450nm附近有1个明显吸收峰，表明FITC成功与AHP-Ⅲ-Tyr结合得到f-AHP-Ⅲ。终产物f-AHP-Ⅲ得率为34.63%。3.2荧光取代度检测由FITC标准曲线可得回归方程:A=4244.3C+5.9690（R2=0.9991）。经检测f-AHP-Ⅲ荧光强度（1015.567），代入方程计算FITC取代度（荧光标记效率）为0.48%，即荧光标记后100μgf-AHP-Ⅲ中含有0.48μgFITC。3.3AHP-Ⅲ的体外稳定性由表1可知，血浆样品在室温放置24h、4℃保存1330中南药学2020年8月第18卷第8期CentralSouthPharmacy.August,Vol.18No.8图1AHP-Ⅲ-Tyr和f-AHP-Ⅲ的SephadexTMG-25凝胶洗脱曲线Fig1ElutioncurvesofSephadexG-25forAHP-Ⅲ-Tyrandf-AHP-Ⅲ注（Note）:A.AHP-Ⅲ-Tyr;B.f-AHP-Ⅲ。图2AHP-Ⅲ、AHP-Ⅲ-Tyr和f-AHP-Ⅲ紫外可见扫描光谱Fig2UV-VisspectraofAHP-Ⅲ，AHP-Ⅲ-Tyr，andf-AHP-Ⅲ14d、-20℃冷冻15d后，RSD均<5%，故含药血浆在室温条件下存放24h、4℃保存14d、-20℃冷冻15d的稳定性均良好。表1f-AHP-Ⅲ测定的稳定性实验结果条件（condition）室温放置24h4℃保存14d-20℃冷冻15d实测浓度（detectedTab1Stabilityforf-AHP-Ⅲ配制浓度（addedconcentration）/μg·mL-112.5255012.5255012.52550concentration）/μg·mL-110.9±0.5323.2±0.3247.1±1.7711.5±0.3324.5±1.0647.4±1.1411.8±0.4423.9±1.1348.7±2.05RSD/%4.91.43.82.94.42.53.84.84.33.4AHP-Ⅲ定量分析方法的建立3.4.1样品浓度标准曲线由表2可知，在上述各样品中，f-AHP-Ⅲ浓度在3.75~120μg·mL-1与荧光强度线性关系良好。3.4.2方法回收率如表3所示，回收率在84.20%~106.94%，日内精密度和日间精密度均符合试验要求（RSD≤11.13%）。3.5静脉注射的药动学研究3.5.1药动学分析采用DAS3.0软件的非房室模型计算小鼠给药后的药动学参数，具体的统计矩参数见表4，药时曲线见图3。由图3可知在小鼠单次静脉给药后血液中f-AHP-Ⅲ迅速达到最大值，随着时间的延长，血药浓度逐渐下降，并且速率变缓，到48h时仍表2样品浓度标准曲线Tab2Standardcurvesforf-AHP-Ⅲinsamples样品回归方程（sample）血浆肝肺肾肌肉脑小肠尿液粪便（regressionequation）y=555.06x-2.7908y=509.06x+4.8062y=481.63x+6.8174y=512.19x+5.5378y=502.65x+12.996y=510.06x+7.9611y=511.44x-0.7922y=548.35x+0.0198y=509.60x+6.9241R2线性范围（linearity）/μg·mL-10.99960.99960.99870.99820.99920.99890.99941.0000.99913.75~1203.75~1203.75~1203.75~1203.75~1203.75~1203.75~1203.75~1203.75~120表3小鼠血浆、组织及排泄物中f-AHP-Ⅲ的相对回收率和精密度(n=3，x±s)Tab3Relativeprecisionandrecoveryforf-AHP-Ⅲintheplasma,tissueandwasteofmice(n=3，x±s)样品（sample）浓度回收率精密度（precision）/%（concentration）（recovery）日内日间/μg·mL-1/%（intra-day）（inter-day）血浆肝脏肺肾肌肉脑小肠尿液粪便12.525.050.012.525.050.012.525.050.012.525.050.012.525.050.012.525.050.012.525.050.012.525.050.012.525.050.0104.81±2.1398.98±0.50100.78±0.7194.35±2.02100.22±1.3599.25±0.0088.28±4.08102.91±0.38103.82±0.1192.04±3.4997.17±0.4698.67±0.0192.41±3.26102.88±1.0199.77±0.1090.21±2.16101.59±0.6098.72±0.2396.25±2.9496.21±0.8099.33±0.01100.50±3.0098.81±1.25101.32±0.1990.55±2.07103.47±0.5899.05±0.013.521.190.294.431.540.114.341.150.161.991.450.083.661.310.112.411.650.074.331.200.204.731.050.203.290.900.167.011.900.0511.022.030.088.122.270.603.542.00.8511.134.211.354.713.310.725.771.300.133.081.700.594.972.240.82能检测到荧光强度。3.5.2AHP-Ⅲ在小鼠体内的组织分布由表5可知，小鼠单次静脉注射f-AHP-Ⅲ（40μg·g-1）后，吸收分布不明显，在肝、肺、肾、小肠组织中有一定分布，心、脾、肌肉、脑组织未检测出;其中在肾组织明显聚集，说明肾脏对f-AHP-Ⅲ有很强的摄取能力，小肠和肝组织次之，肺组织最少;同时不同组织代谢情况也不尽相同，肾和小肠组织中f-AHP-Ⅲ浓度存在峰1331CentralSouthPharmacy.August,Vol.18No.8中南药学2020年8月第18卷第8期表4小鼠静脉注射f-AHP-Ⅲ的药代动力学参数(n=3，x±s)Tab4Pharmacokineticparametersoff-AHP-Ⅲafterasingleintravenousinjection(n=3，x±s)参数（parameter）达峰浓度Cmax/mg·L-1达峰时间tmax/h半衰期t1/2/h曲线下面积AUC0~t/mg·h·L-1曲线下面积AUC0~∞/mg·h·L-1平均滞留时间MRT/h清除率CLz/L/（h·kg）表观分布容积Vz/L·kg-1结果（result）43.01±0.800.08±0.0023.66±1.32113.87±1.30148.35±2.2729.75±1.630.27±0.009.20±0.39图3小鼠单次静脉注射f-AHP-Ⅲ血药浓度-时间曲线Fig3f-AHP-Ⅲconcentrationandtimeprofileafterasingleintravenousinjection值，肝和肺组织只在某时间点检测出。3.5.3AHP-Ⅲ在小鼠体内的排泄由表6可知，小鼠单次静脉注射f-AHP-Ⅲ以尿液排泄为主，0~12h为主要排泄时间段，累积排泄率高达（78.01±17.61）%，之后随着时间延长排泄速率减小。4讨论近年来，随着药理学和现代分析技术的飞速发展，广泛存在自然界中的中药多糖大分子因生物活性复杂，且不良反应少，倍受人们关注。但由于多糖组成与结构的复杂性，微量定量检测技术的缺乏，致使其功能和机制研究受到了极大的限制，多糖药动学研究成为多糖药物开发的瓶颈因素。有关多糖“可视化”的研究目前国内外报道较少，已有的标记方法大多缺乏选择性，不能很好地反映多糖的生物学性质[15]。常用的荧光染料有5-氨基荧光素（FLA）、6-氨基喹啉（AQ）、2-氨基吡啶（2-AP）、菁染料（Cy）等，因多糖间存在分子结构、分子量、单糖组成的差异，导致标记效率也有所不同[16]。本实验首先通过还原胺化和亲核反应实现了AHP-Ⅲ荧光标记。经计算，标记后AHP-Ⅲ的荧光标记效率为0.48%。达到了在满足检测灵敏度的前提下，拥有相对低的标记效率，最大化地减少了荧光标记对多糖功能和理化性质的影响[17]。AHP-Ⅲ经单次静脉注射给药后，由于不存在吸收过表5小鼠静脉注射f-AHP-Ⅲ组织样品分布(n=3，x±s)Tab5Distributionoff-AHP-Ⅲinthetissuesafterasingleintravenousinjection(n=3，x±s)f-AHP-Ⅲ组织浓度（μg·g-1湿组织）（concentrationoff-AHP-Ⅲintissues）1hNDND3hNDND20.16±14.4020.16±8.6428.22±12.1090.43±59.336h31.10±19.01ND54.72±15.5562.78±63.9412h43.2±8.6414.4±4.03978.05±159.554.61±2.3024hNDND48hNDND198.72±45.5068.54±47.81NDND样品（sample）肝肺肾小肠注（Note）:ND表示未检测出（NDindicatesnodetection）。表6小鼠静脉注射f-AHP-Ⅲ尿液及粪便排泄(n=3，x±s)Tab6Excretionoff-AHP-Ⅲintheurineandfecesafterasingleintravenousinjection(n=3，x±s)样品（sample）尿液粪便0~6h59.51±11.512.74±1.32排泄百分比（excretionpercentage）/%12~24h6~12h5.58±3.5518.50±6.104.34±1.112.52±0.5424~48h2.76±1.020.80±0.24程，药物迅速从血液中向外周分布，到48h时仍能检测到荧光强度，这可能与药物的高分子性质有关，海洋多糖药物PS916[18]及多糖枸杞多糖LBP[19]的药动学研究中也提出相关观点。在组织分布和排泄方面，静脉注射给药后f-AHP-Ⅲ均主要集中于肾、小肠、肺及肝脏中，推测f-AHP-Ⅲ的吸收分布依赖肾小管的重吸收作用[20-23]。给药后肝中药物含量很少，有可能是因为f-AHP-Ⅲ分子量太大导致。Dong等[24-25]均证实多糖在动物肝脏中的代谢和排泄与药物的分子量大小有关。综合观察各组织中药物含量，推测f-AHP-Ⅲ由肠道吸收在肾脏和肝脏中代谢，同时存在组织分布特异性，Yu等[26-27]在文章中也有相似的推论。本研究结果表明，利用FITC对AHP-Ⅲ进行荧光标记是可行的，且f-AHP-Ⅲ在溶液中稳定性良好。小鼠静脉注射给药后，组织分布主要在肾、小肠、肺及肝脏。这为进一步阐明AHP-Ⅲ的扩能增效机制提供了依据。有关f-AHP-Ⅲ在小鼠体内的吸收、分布及排泄所引发的生物学效应，将在后续的实验中逐步展开。参考文献[1]张蕊馨，张彦华，周迎春，等.中药多糖化学结构及药理作用研究进展[J].黑龙江中医药，2018，47（1）:88-89.[2]陈永，卢戌，谭晓晶，等.红毛五加多糖的分离纯化1332中南药学2020年8月第18卷第8期CentralSouthPharmacy.August,Vol.18No.8和表观分子质量测定[J].四川大学学报（自然科学版），2005（2）:373-376.[3]郝慧慧，陈永，林志娟，等.红毛五加多糖不同组分对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的研究[J].天然产物研究与开发，2013，25:612-616.[4]LinX，WangZ，SunG，etal.AsensitiveandspecificHPGPC-FDmethodforthestudyofpharmacokineticsandtissuedistributionofradixophiopogonispolysaccharideinrats[J].BiomedicalChromatography，2010，24（8）:280-285.[5]康迪，滕再进，柯梦云，等.荧光标记法测定大鼠血浆中海胆黄多糖研究[J].药物生物技术，2012，19（4）:343-347.[6]陈永，张青，孙风祥，等.红毛五加多糖AHP-Ⅱ的荧光标记及其在小鼠腹腔巨噬细胞上的定位[J].药物分析杂志，2016，36（12）:2113-2119.[7]LiuAP，RenZY，LiuQ，etal.Developmentofadeter-minationmethodforfreepolysaccharidecontentinserotype6bpneumococcalpolysaccharideconjugate[J].ChineseJournalofNewDrugs，2017，26（24）:2937-2942.[8]徐倩，韩真贤，赵宏.龙牙楤木多糖在大鼠体内的药动学研究[J].中国药物经济学，2016，11（2）:20-22.[9]张文静.褐藻硫酸多糖GFS的微量分析及初步药动学研究[D].北京:中国科学院研究生院，2013.[10]狄孟华，李桂凤，李言，等.白头翁皂苷B4在大鼠体内药动学规律及肺组织分布[J].贵州医科大学学报，2018，43（7）:745-749.[11]周玉燕，沈子龙.玉米多糖铁在毕格犬体内的药动学研究[J].皖南医学院学报，2014，33（1）:16-18，22.[12]朱春红，万盟，李维，等.黄精多糖对阿托伐他汀在大鼠体内药动学的影响[J].中国生化药物杂志，2014，34（5）:171-173.[13]孙东晓，田慧芳，孟志云，等.[3H]-乙酰紫草素在小鼠体内的组织分布、排泄及血中分布研究[J].军事医学科学院院刊，2008，32（4）:348-352.[14]姜国华，刘忠敏.同位素示踪法研究125I-NGF在小鼠体内的吸收、分布及排泄[J].现代仪器，2012，18（1）:10-13.[15]郭超，宋慧，梁凤，等.金针菇多糖的提取工艺优化及荧光标记研究[J].菌物研究，2018，16（1）:43-50.[16]郑子明.香菇多糖药动学及其体内吸收代谢机制研究[D].武汉:华中科技大学，2019.[17]侯凌燕，章竹君，周福林.几种常用荧光探针的化学发光成像研究[J].分析化学，2007（2）:285-288.[18]吕志华.海洋多糖药物PS916的荧光标记及其药动学研究[D].青岛:中国海洋大学，2008.[19]陈忱，唐华丽，马月，等.大鼠血浆中枸杞多糖荧光标记物定量分析方法的建立[J].食品科学，2015，36（2）:90-95.[20]陈娟.肾脏脂质沉积对肾小管葡萄糖重吸收的影响及分子机制探讨[D].南京:东南大学，2019.[21]李树荣，杜靓，王艳芳.维生素B6对异烟肼在家兔体内药物动力学过程的影响[J].中国当代医药，2013，20（25）:9-11.[22]尹福泉，吴勇亮，刘明珠，等.玉屏风多糖对草鱼肠黏膜形态结构及主要免疫与吸收相关基因表达的影响[J].动物营养学报，2017，29（10）:3718-3725.[23]舒亚民.当归多糖核标记及其肝靶向作用的研究[D].武汉:华中科技大学，2016.[24]DongW，HanB，ShaoK，etal.Effectsofmolecularweightsontheabsorption，distributionandurinaryexcre-tionofintraperitoneallyadministratedcarboxymethylchi-tosaninrats[J].JMaterSciMaterMed，2012，23（12）:2945-2952.[25]MinT，SunJ，YiY，etal.Pharmacokineticsandtissuedistributionofpolysaccharide-proteincomplexesfromlonganpulpinmice[J].IntJMolSci，2015，16（10）:24403-24416.[26]YuMM，WangYH，MaFG，etal.Pharmacokinetics，tissuedistributionandexcretionstudyoffluorescein-la-beledPS916inrats[J].CurrPharmBiotechnol，2017，18（5）:391-399.[27]ZhangY，ZhouT，LuoL，etal.Pharmacokinetics，bio-distributionandreceptormediatedendocytosisofanatural，Angelicasinensispolysaccharide[J].ArtifCellsNanomedBiotechnol，2018，1（5）:1-10.（收稿日期:2020-05-25;修回日期:2020-06-18）1333
